一種Fc?FF?RGD復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種Fc?FF?RGD復(fù)合物，其特征在于，所述復(fù)合物是由二茂鐵甲酸，雙苯丙氨酸和精氨酸?甘氨酸?天冬氨酸組成的多肽類似物序列。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：該水凝膠上的RGD配體能與細(xì)胞表面的α5β1整合素結(jié)合從而促進細(xì)胞粘附和增殖，展現(xiàn)出了良好的生物納米材料應(yīng)用潛力；此外，自組裝形成的納米小球能識別細(xì)胞表面的整合素α5β3，因此可以作為藥物運輸?shù)妮d體達到增強抗腫瘤效果的目的。
【專利說明】
一種Fc-FF-RGD復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物凝膠材料和藥物載體運輸領(lǐng)域，涉及一種多肽模擬物及其制備方 法和用途，尤其涉及一種Fc-FF-RGD復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)胞與生物材料之間的反應(yīng)在組織工程和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用，因為 它們不僅可以在體內(nèi)和體外通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能，如細(xì)胞粘附，細(xì)胞轉(zhuǎn)移，細(xì)胞生長，細(xì)胞 增殖和分化，來影響組織的形成，還可以影響細(xì)胞對藥物載體的攝取效率。因此，用不同的 具有細(xì)胞粘附作用的基團對生物材料進行修飾是制備細(xì)胞關(guān)聯(lián)性材料的一條重要規(guī)則。例 如，多肽序列RGD是一種高效的細(xì)胞識別基團，將它修飾到材料的表面可以達到提高細(xì)胞整 合素與材料粘附作用的目的。
[0003] 整合素是由α和β亞單體組成的在大部分細(xì)胞表面表達的一類跨膜受體。它可以通 過與纖連蛋白，玻連蛋白，纖維蛋白和膠原蛋白中的RGD相互作用來調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì) 的粘附作用。此外，人們發(fā)現(xiàn)在許多固體腫瘤表面，整合素會大量表達，并且把這這種現(xiàn)象 作為血管生成，腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。因此，整合素是設(shè)計具有提高細(xì)胞粘附和轉(zhuǎn)移特性 的生物模擬材料的重要目標(biāo)，也是用于癌癥診斷和治療的藥物運輸系統(tǒng)的重要目標(biāo)。盡管 單個RGD配體與整合素受體之間的作用力相對較弱，但是在生物材料表面的RGD納米級配體 組織形成的聚集體可以提高細(xì)胞與材料的粘附性并指導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)。自組裝是組織分子形成 大的聚集體的自發(fā)過程。因其具有諸多優(yōu)點，例如分子易于合成，材料分子排列規(guī)整，超分 子自發(fā)組裝，從而成為制備納米級別材料的一種有效策略。因此，將既具有自組裝特性又具 備促進細(xì)胞粘附特性的基團結(jié)合起來，是制備具有細(xì)胞識別功能和整合素結(jié)合特性材料的 一種新型方法。用具有細(xì)胞粘附特性的自組裝肽鏈制備的生物材料具有化學(xué)成分可以精確 控制，并且納米結(jié)構(gòu)表面的的生物活性配體可以自由、合理地被其他基團取代。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中，質(zhì)量濃度為lwt %的Fc-FF-RGD水凝膠對pH過于敏感，當(dāng)pH小于7.0 時，凝膠會瓦解形成濁液，當(dāng)pH大于7.6時，凝膠會重新變?yōu)槌吻迦芤?。并且Fc-FF-R⑶對阿 霉素進行包裹時，其包埋率僅僅為8.4%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 解決的技術(shù)問題:為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，獲得一種生物相容性好、特異性高、 毒副作用小的凝膠材料，本發(fā)明提供了一種Fc-FF-RGD復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：
[0007] 一種Fc-FF-RGD復(fù)合物，所述復(fù)合物是由二茂鐵甲酸，雙苯丙氨酸和精氨酸-甘氨 酸-天冬氨酸組成的多肽類似物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0009] -種Fc-FF-RGD復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：
[0010] (1)氯三苯甲基樹脂，粒徑為100~200目，濃度為0.3~0.8mmol/g，加入固相反應(yīng) 器中，加入30~40mL無水二氯甲烷，通入氮氣溶脹，除去二氯甲烷，用無水30~40mL DMF洗 滌樹脂；
[0011] (2)將Fmoc-Asp(0tBu)_0H和DIEA溶解在30~40mL無水DMF中，并將溶液加入到固 相反應(yīng)器中，用氮鼓氣震蕩反應(yīng)，除去反應(yīng)試劑，并用30~40mL無水DMF洗樹脂；
[0012] (3)加入20~25mL猝滅溶劑，所述猝滅溶劑由DCM、MeOH和DIEA按體積比混合，DCM: MeOH: DIEA = 80:15: 5，在氮氣鼓氣震蕩下反應(yīng)，除去反應(yīng)液，再加入20~25mL猝滅溶劑，再 氮氣鼓氣震蕩下反應(yīng)，除去反應(yīng)液，用無水30~40mL DMF洗樹脂；
[0013] (4)加入30~40mL 20 %哌啶溶液，并與樹脂反應(yīng)，分別用10~15mL20 %哌啶溶液 和30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0014] (5)Fmoc-Gly-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中配成溶液，加入到樹脂 中，反應(yīng)后，用30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0015] (6)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)，分別用10~15mL 20%哌啶溶液 和30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0016] (7)Fmoc-Arg(Pbf)-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)后，用 30~40mL無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液；
[0017] (8)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶 液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0018] (9)Fmoc-Phe-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)后，用30~ 40mL無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液；
[0019] (10)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶 液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0020] (11 )Fmoc-Phe-〇H、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)后，用30~ 40mL無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液；
[0021] (12)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶 液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0022] (13)Ferrocenecarboxylic acicUDIEA和HBTU溶解在無水30~40mL DMF中，與樹 脂反應(yīng)后，用30~40mL無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液；
[0023] (14)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶 液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液；
[0024] (15)分別用30~40mL DMF，DCM，甲醇，正己烷各自洗滌樹脂次，然后用氮氣將樹脂 吹干；
[0025] (16)加入30~40mL 95%三氟乙酸水溶液于反應(yīng)器中，用氮氣鼓氣，收集反應(yīng)液， 再用20~40mL 95%三氟乙酸水溶液洗滌樹脂，收集反應(yīng)液，混合兩次反應(yīng)液；
[0026] (17)用空氣栗將溶劑吹干，加去離子水，將所得黏性物質(zhì)超聲分散在水中，冷凍干 燥;干燥好的粗產(chǎn)品經(jīng)高效液相純化，色譜柱為C18柱，梯度為水：甲醇=70: 30~0:100。上 述Fc-FF-RGD復(fù)合物在靶向性的藥物運輸載體中的應(yīng)用。
[0027]優(yōu)選的，在用作靶向性的藥物運輸載體時，所述Fc-FF-RGD復(fù)合物的濃度為 0. lwt. % 〇
[0028]上述Fc-FF-R⑶復(fù)合物在生物模擬支架材料中的應(yīng)用。
[0029 ] 本發(fā)明中涉及到的專業(yè)術(shù)語中英文對照表如下：
[0032]有益效果：（1)本發(fā)明設(shè)計的新型多肽類似物序列，其中二茂鐵甲酸和雙苯丙氨酸 增強了材料的強度，也通過疏水作用和芳香環(huán)之間的作用為超分子自組裝提供了動力;RGD 部分可以與細(xì)胞表面的整合素發(fā)生多價作用從而增加自組裝生物納米材料的功能。
[0033] (2)由于Fc-FF-R⑶具有親疏水性以及分子之間的非共價作用，使其能在水中發(fā)生 自組裝過程并且形成質(zhì)量濃度為1 %的穩(wěn)定水凝膠。
[0034] (3)由于納米纖維結(jié)構(gòu)表面存在大量的具有多價作用的RGD配體，該水凝膠上的 RGD配體能與細(xì)胞表面的a5fo整合素結(jié)合從而促進細(xì)胞粘附和增殖，展現(xiàn)出了良好的生物納 米材料應(yīng)用潛力;此外，自組裝形成的納米小球能識別細(xì)胞表面的整合素 α5β3，因此可以作 為藥物運輸?shù)妮d體達到增強抗腫瘤效果的目的。
[0035] (4)在相對較低的濃度下，F(xiàn)c-FF-RGD可以自組裝形成穩(wěn)定的納米小球，由于自組 裝的納米小球內(nèi)部具有疏水性空間，表面分散著大量的R⑶配體，并且該自組裝過程具有pH 敏感特性，所以自組裝納米球可以用于疏水性藥物的包埋并進行靶向性藥物運輸。因此，將 具有剛性和疏水性的Fc-FF以及親水性的RGD合理的設(shè)計并結(jié)合在一起能為制備具有生物 功能的超分子水凝膠和其他自組裝體提供了一條簡單的途徑。
【附圖說明】
[0036] 圖1是Fc-FF-RGD復(fù)合物由水溶液轉(zhuǎn)變?yōu)樗z的光學(xué)照片圖；
[0037] 圖2是Fc-FF-RGD復(fù)合物生物相容性測試結(jié)果圖；
[0038] A為NIH 3T3和HUVEC細(xì)胞在Fc-FF-R⑶凝膠上二維培養(yǎng)的活/死圖片，B為NIH 3T3 和HUVEC細(xì)胞在Fc-FF-R⑶凝膠上二維培養(yǎng)的細(xì)胞密度變化圖，C和D分別是NIH 3T3和HUVEC 細(xì)胞在Fc-FF-RO)凝膠上二維培養(yǎng)一天后的細(xì)胞微絲和細(xì)胞核圖片。
[0039] 圖3是Fc-FF-RGD復(fù)合物自組裝納米球包裹阿霉素的TEM圖；
[0040] A為平均直徑為40nm的Fc-FF-RGD復(fù)合物納米球TEM圖，B為包裹了阿霉素的Fc-FF- RGD復(fù)合物納米球TEM圖，C為在pH=6的條件下，包裹了阿霉素的Fc-FF-RGD復(fù)合物納米球瓦 解后的TEM圖；
[0041 ]圖4是Fc-FF-RGD復(fù)合物作為載體包裹阿霉素的細(xì)胞毒性結(jié)果圖。
[0042] 其中，柱形圖中第一組數(shù)據(jù)為Fc-FF-R⑶復(fù)合物，第二組為Free D0X，第三組為Fc-FF-RGD 復(fù)合物+D0X。
【具體實施方式】
[0043]以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離 本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改和替換，均屬于本發(fā)明 的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0044] 實施例1制備Fc-FF-RGD復(fù)合物
[0045] 包括以下步驟：
[0046] (1) lg氯三苯甲基樹脂，粒徑為100~200目，濃度為0.3~0.8mmol/g，加入固相反 應(yīng)器中，加入30mL無水二氯甲烷，通入氮氣溶脹30分鐘后，除去二氯甲烷，用無水DMF30~ 40mL洗滌樹脂三次；
[0047] (2)將Fmoc-Asp(0tBu)_0H和DIEA溶解在30~40mL無水DMF中，并將溶液加入到固 相反應(yīng)器中，用氮鼓氣震蕩反應(yīng)1個小時后，除去反應(yīng)試劑，并用30~40mL無水DMF洗樹脂三 次；
[0048] (3)加入20mL猝滅溶劑，所述猝滅溶劑由DCM、MeOH和DIEA按體積比混合，DCM: MeOH: DIEA = 80:15: 5，在氮氣鼓氣震蕩下反應(yīng)10分鐘，除去反應(yīng)液，再加入20mL猝滅溶劑， 在氮氣鼓氣震蕩下反應(yīng)10分鐘，除去反應(yīng)液，用無水30~40mL DMF洗樹脂三次；
[0049] (4)加入30mL 20%哌啶溶液，并與樹脂反應(yīng)30分鐘后，分別用10~15mL20%哌啶 溶液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂三次，除去反應(yīng)液；
[0050] (5)Fmoc-Gly-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中配成溶液，加入到樹脂 中，反應(yīng)30分鐘后，用30~40mL無水DMF洗滌樹脂三次，除去反應(yīng)液；
[0051 ] (6)加入30mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)30分鐘后，分別用10~15mL 20%哌啶 溶液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂三次，除去反應(yīng)液；
[0052] (7)Fmoc-Arg(Pbf)-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)30分 鐘后，用30~40mL無水DMF洗滌三次，除去反應(yīng)液；
[0053] (8)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)30分鐘后，分別用10~15mL 20% 哌啶溶液和30~40mL無水DMF洗滌樹脂三次，除去反應(yīng)液；
[0054] (9)Fmoc-Phe-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)30分鐘后， 用30~40mL無水DMF洗滌三次，除去反應(yīng)液；
[0055] (10)加入30mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)30分鐘后，分別用10~15mL 20%哌啶 溶液和30~40mL無水DMF洗滌三次樹脂，除去反應(yīng)液；
[0056] (11 )Fmoc-Phe-〇H、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)30分鐘后， 用30~40mL無水DMF洗滌三次，除去反應(yīng)液；
[0057] (12)加入30mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)30分鐘后，分別用10~15mL 20%哌啶 溶液和30~40mL無水DMF洗滌三次樹脂，除去反應(yīng)液；
[0058] (13)Ferrocenecarboxylic acicUDIEA和HBTU溶解在無水30~40mL DMF中，與樹 脂反應(yīng)30分鐘后，用30~40mL無水DMF洗滌三次，除去反應(yīng)液；
[0059] (14)加入30mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)30分鐘后，分別用10~15mL 20%哌啶 溶液和30~40mL無水DMF洗滌三次樹脂，除去反應(yīng)液；
[0060] (15)分別用30~40mL DMF，DCM，甲醇，正己烷各自洗滌樹脂5次，然后用氮氣將樹 脂吹干；
[0061 ] (16)加入30mL 95%三氟乙酸水溶液于反應(yīng)器中，用氮氣鼓氣三個小時，收集反應(yīng) 液，再用20mL 95%三氟乙酸水溶液洗滌樹脂，收集反應(yīng)液，混合兩次反應(yīng)液；
[0062] (17)用空氣栗將溶劑吹干，加去離子水50mL，將所得黏性物質(zhì)超聲分散在水中，冷 凍干燥;干燥好的粗產(chǎn)品經(jīng)高效液相純化，色譜柱為C18柱，梯度為水：甲醇=70 : 30~0 : lOOc/HMMRHOOMHz.DMSO-ds) :δ8· 18-8.08(m，5H)，7.87(d，3H) ,7.42-7.19(m，10) ,4.85-4.73(m，5H)，3.91(s，5H)，4.34(s，4H)，3.06(d，4H)，2.96-2.90(m，4H)，1.54-1.52(m，4H)。 MS:calcd M+ = 853.3,obsd(M-H)-= 852.3。
[0063] 所述制備方法的化學(xué)反應(yīng)式如下：
[0065] 對上述制備獲得的Fc-FF-R⑶復(fù)合物進行溶解性檢測，配置lwt%的pH = 8的水溶 液，然后將pH調(diào)節(jié)至7.4,靜置2小時，結(jié)果如圖1所示。在pH值為7.4時，能夠形成穩(wěn)定的水凝 膠。
[0066] 實施例2FC-FF-RO)復(fù)合物生物相容性檢測
[0067]對實施例1制備獲得的Fc-FF-R⑶復(fù)合物的生物相容性進行檢測，具體步驟如下： 在96孔板中將Fc-FF-R⑶自組裝水凝膠用DMEM培養(yǎng)基浸泡24h，然后分別接種4*104/mL的小 鼠成纖維細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。分別取培養(yǎng)了 1、3和5天的 細(xì)胞進行細(xì)胞活死染色，在倒置熒光顯微鏡下觀察，同時對細(xì)胞進行計數(shù)。并對第一天的細(xì) 胞的微絲和細(xì)胞核進行染色，以觀察其形態(tài)的變化。從圖2中可見，隨著培養(yǎng)時間的增加，小 鼠成纖維細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞能夠粘附在Fc-FF-RGD自組裝水凝膠上，并且能夠發(fā)生 增殖，細(xì)胞的形態(tài)良好。這說明Fc-FF-RGD自組裝水凝膠具有良好的生物相容性。
[0068]實施例3FC-FF-RO)復(fù)合物作為藥物載體的應(yīng)用
[0069]當(dāng)濃度為lwt%或大于該濃度時，F(xiàn)c-FF-R⑶在pH 7.4時能自組裝為水凝膠，其微 觀結(jié)構(gòu)為納米纖維，要制備得到納米球，就必須降低濃度。本實施例采用O.lwt%的濃度的 Fc-FF-R⑶在pH = 7.4時制備得到了平均直徑40nm的納米球，如圖3中A所示。向其中加入阿 霉素，納米球能夠在發(fā)生自組裝的過程中將阿霉素包裹在內(nèi)部，用規(guī)格為l〇〇〇Da透析袋將 未包裹的阿霉素除去，在TEM下發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)c-FF-R⑶自組裝形成了直徑更大的納米球，如圖3中B 所示，平均直徑約50nm。為了保證納米球能夠在細(xì)胞內(nèi)部瓦解，從而釋放出阿霉素，本實施 例將pH值調(diào)節(jié)到6,在電鏡下沒有觀察到納米球，如圖3中B所示。說明自組裝納米球發(fā)生瓦 解，從而釋放出阿霉素，也說明了Fc-FF-R⑶自組裝納米球具有pH敏感特性。從圖中可以看 出，控制Fc-FFRGD的質(zhì)量濃度，可以得到具有包裹阿霉素功能的自組裝納米球，為其進一步 應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[0070] 進一步的，用不同濃度，分別為0. ]^1、]^1、5以1、1(^1的阿霉素和納米球包裹阿霉 素的溶液以及相應(yīng)濃度的Fc-FF-RGD納米球進行CCK-8細(xì)胞毒性實驗，24小時后，用CCK-8溶 液替代原來的培養(yǎng)基。最后，用光譜掃描多功能讀數(shù)儀測試溶液在450nm的光密度值(0D 值）。細(xì)胞生存力表示為對照(未處理的)細(xì)胞數(shù)的百分比。在對照組的細(xì)胞生存能力被指定 為100%。所有實驗一式五份進行的。從圖中可以看出F成FFRGD納米球沒有細(xì)胞毒性，對實 驗結(jié)果不產(chǎn)生干擾。在相同阿霉素濃度下，當(dāng)用Fc-FF-RGD自組裝納米球包裹阿霉素是其細(xì) 胞存活率要低于阿霉素組。因此，我們可以得出結(jié)論，F(xiàn)c-FF-R⑶自組裝納米球具有作為藥 物在的功能。結(jié)果如圖4所示。
【主權(quán)項】
1. 一種Fc-FF-RGD復(fù)合物，其特征在于，所述復(fù)合物是由二茂鐵甲酸，雙苯丙氨酸和精 氨酸-甘氨酸_天冬氨酸組成的多肽類似物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：2. 權(quán)利要求1所述的一種Fc-FF-RGD復(fù)合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 氯三苯甲基樹脂，粒徑為100~200目，濃度為0.3~0.8mmol/g，加入固相反應(yīng)器中， 加入30~40mL無水二氯甲烷，通入氮氣溶脹，除去二氯甲烷，用無水30~40mL DMF洗滌樹 脂； (2) 將Fmoc-Asp(0tBu)-OH和DIEA溶解在30~40mL無水DMF中，并將溶液加入到固相反 應(yīng)器中，用氮鼓氣震蕩反應(yīng)，除去反應(yīng)試劑，并用30~40mL無水DMF洗樹脂； (3) 加入20~25mL猝滅溶劑，所述猝滅溶劑由DCM、MeOH和DIEA按體積比混合，DCM: MeOH: DIEA = 80:15: 5，在氮氣鼓氣震蕩下反應(yīng)，除去反應(yīng)液，再加入20~25mL猝滅溶劑，再 氮氣鼓氣震蕩下反應(yīng)，除去反應(yīng)液，用無水30~40mL DMF洗樹脂； (4) 加入30~40mL 20%哌啶溶液，并與樹脂反應(yīng)，分別用10~15mL20%哌啶溶液和30 ~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (5) Fmoc-Gly-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中配成溶液，加入到樹脂中，反 應(yīng)后，用30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (6) 加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)，分別用10~15mL 20%哌啶溶液和30 ~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (7) Fmoc-Arg(Pbf)-OH、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)后，用30~ 40mL無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液； (8) 加入30~40mL 20 %哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20 %哌啶溶液和 30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (9奸111〇(3-?116-011、0此4和冊1'1]溶解在30~4011^無水01^中，與樹脂反應(yīng)后，用30~401111 無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液； (10)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶液和 30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (11 )Fmoc-Phe-〇H、DIEA和HBTU溶解在30~40mL無水DMF中，與樹脂反應(yīng)后，用30~40mL 無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液； (12)加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶液和 30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (13) Ferrocenecarboxylic acicUDIEA和HBTU溶解在無水30~40mL DMF中，與樹脂反 應(yīng)后，用30~40mL無水DMF洗滌，除去反應(yīng)液； (14) 加入30~40mL 20%哌啶溶液并與樹脂反應(yīng)后，分別用10~15mL 20%哌啶溶液和 30~40mL無水DMF洗滌樹脂，除去反應(yīng)液； (15) 分別用30~40mL DMF，DCM，甲醇，正己烷各自洗滌樹脂次，然后用氮氣將樹脂吹 干； (16) 加入30~40mL 95%三氟乙酸水溶液于反應(yīng)器中，用氮氣鼓氣，收集反應(yīng)液，再用 20~40mL 95 %三氟乙酸水溶液洗滌樹脂，收集反應(yīng)液，混合兩次反應(yīng)液； (17) 用空氣栗將溶劑吹干，加去離子水，將所得黏性物質(zhì)超聲分散在水中，冷凍干燥； 干燥好的粗產(chǎn)品經(jīng)高效液相純化，色譜柱為C18柱，梯度為水：甲醇=70:30~0:100。3. 權(quán)利要求1所述的一種Fc-FF-RGD復(fù)合物在靶向性的藥物運輸載體中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述Fc-FF-RGD復(fù)合物的濃度為0. lwt. %。5. 權(quán)利要求1所述的一種Fc-FF-RGD復(fù)合物在生物模擬支架材料中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K47/42GK106046116SQ201610481741
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月28日
【發(fā)明人】李新明, 許鳳陽
【申請人】蘇州大學(xué)