氨苯砜的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了氨苯砜的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的氨苯砜的藥物組合物中含有氨苯砜和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，氨苯砜、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)圍經(jīng)期睡眠障礙具有調(diào)理作用；氨苯砜和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)圍經(jīng)期睡眠障礙的調(diào)理作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
氨苯砜的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及氨苯砜的新用途，具體涉及氨苯砜的藥物組合物 及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 氨苯砜與其他抗麻風(fēng)藥聯(lián)合用于由麻風(fēng)分枝桿菌引起的各種類型麻風(fēng)的治療。氨 苯砜也可用其他皮膚病的治療。
[0003] 迄今為止，尚未見氨苯砜及其藥物組合物與圍經(jīng)期睡眠障礙的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種氨苯砜的藥物組合物，該藥物組合物中含有氨苯砜和 一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，氨苯砜和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008] -種氨苯砜的藥物組合物，包括氨苯砜、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥學(xué)上 可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將京大戟粉碎，用65~75%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65 %洗 脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0012]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]上述化合物（I)在制備調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙的藥物中的應(yīng)用。
[0014]上述氨苯砜的藥物組合物在制備調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明提供的氨苯砜的藥物組合物中含有氨苯砜和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，氨 苯砜、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)圍經(jīng)期睡眠障礙具有調(diào)理;氨苯砜和化合物（I)聯(lián)合作用 時(shí)，對(duì)圍經(jīng)期睡眠障礙的調(diào)理作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019]分離方法：（a)將京大戟(2kg)粉碎，用70 %乙醇熱回流提取（15L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65%乙醇洗脫 10個(gè)柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (9個(gè)柱體積）、35:1 (10個(gè)柱體積）、15:1 (8 個(gè)柱體積)和7:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4 用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1(6個(gè)柱體積）、7:1(7個(gè)柱體積)和1:1(6個(gè)柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證:冊(cè)431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 453.3677，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C31H48〇2，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ΡΡπι，CDC1 3，600MHz):H-1 (1 · 62，dd，J= 12 · 4， 8.9Hz)，H-l(2.11，dd，J=12.4,3.6Hz)，H-2(5.82，ddd，J=10.9,8.9,3.6Hz)，H-3(5.68，d， J = 10.9Hz)，H-5(0.84，d，J= 11 ·2Ηζ)，H-6(1.48，m)，H-6( 1.63，m)，H-7( 1.68，m)，H-7 (1.87，m)，H-9(1.64，d，J = 8.4Hz)，H-ll(4.27，d，J = 8.8,3.3Hz)，H-12(5.28，d，J = 3.3Hz)，H-16(2.43，d，J=13.1Hz)，H-16(2.21，d，J = 13.1Hz)，H-18(2.46，d，J = 8.4Hz)，H-19(1.41，m)，H-20(1.10，m)，H-21(1.28，m)，H-21(1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)， H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87， s)，H-29(0.85，d，J = 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6.1Hz)，0Me-ll(3.28，s);核磁共振碳譜數(shù) 據(jù)Sc(ppm，CDCl3,125MHz) :39.6(CH2，1-C)，124.3(CH，2-C)，137.6(CH，3-C)，36.5(C，4-C)， 52.4(CH，5-C)，19.7(CH2,6-C)，38.9(CH2,7-C)，51.8(C，8-C)，52.9(CH，9-C)，32.0(C，10-C)，76.2(CH，n-C)，126.3(CH，12-C)，137.2(C，13-C)，65.6(C，14-C)，209.4(C，15-C)，54.3 (CH2，16-C)，53.4(C，17-C)，48.0(CH，18-C)，39.9(CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8(CH2,21-C)，38.8(CH2,22-C)，26.6(CH3,23-C)，15.7(CH3,24-C)，13.7(CH3,25-C)，19.7(CH 3,26-C)， 14.3(CH3,27-C)，19.3(CH3,28-C)，17.2(CH3,29-C)，20.4(CH3,30-C)，54.9(CH 3,0Me-ll)。紅 外波譜表明該化合物含有羰基（1760(^1)，雙鍵(1663(^ 1)和偕二甲基（1380(^1)基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有31個(gè)碳信號(hào)，包括九個(gè)甲基(一個(gè)甲氧基），六個(gè)亞甲基，九個(gè)次 甲基(一個(gè)連氧碳和三個(gè)烯烴碳），以及七個(gè)季碳(一個(gè)羰基，一個(gè)烯屬季碳），以上功能結(jié)構(gòu) 再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)。h-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示的六個(gè)單峰甲基 質(zhì)子信號(hào) δΗ 1.02(3H，s)，0.82(3H，s)，1.19(3H，s)，1.22(3H，s)，1.36(3H，sWP0.87(3H， 8)，兩個(gè)雙峰甲基質(zhì)子信號(hào)6 11〇.85(3!1，(1，1 = 6.3抱），0.93(3!1，(1，1 = 6.1抱）以及1!1-匪1?數(shù) 據(jù)表明該化合物為烏蘇烷型三萜類化合物。HMBC譜中OMe-11與C-11的相關(guān)信號(hào)以及碳化學(xué) 位移表明甲氧基連在C-11位。通過HMBC譜中單烯烴質(zhì)子信號(hào)δ Η 5.28(lH，d，J = 3.3Hz)與Ου 相關(guān)信號(hào)以及 C-12 與 C-13 的碳化學(xué)位移可以確認(rèn) C-12 與 C-13 形成雙鍵結(jié)構(gòu)。此外， C-2 與 C-3也形成雙鍵結(jié)構(gòu)，C-15位形成酮基。HMBC譜中Η2-16和Η3-27與C-15的相關(guān)信號(hào)以及它們 的碳化學(xué)位移進(jìn)一步確證C-15形成酮基。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于 相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理 論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0021]該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0023] 實(shí)施例2:藥理作用
[0024]本實(shí)施例使用不可預(yù)知慢性應(yīng)激制備抑郁大鼠模型，觀察藥物提高血清E2、IL_2、 IL-6水平及降低血清FSH、LH水平等方面的抗圍絕經(jīng)期抑郁癥睡眠障礙的作用。
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動(dòng)物
[0027]動(dòng)物清潔級(jí)13~15月齡雌性SD大鼠，體重300~500g，由北京斯貝特動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心 提供。
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029]氨苯砜購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。大鼠 IL-2酶聯(lián)免疫試劑盒(武漢華美）；大鼠 IL-6酶聯(lián)免疫試劑盒(武漢華美）；大鼠 IL-Ιβ酶聯(lián)免 疫試劑盒(武漢華美）。
[0030] 1.3儀器
[0031] 奧利巴斯熒光顯微鏡;KH30R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī);美國(guó)Forma公司-80 °C超低溫冰 箱;美國(guó)thermo酶標(biāo)儀。
[0032] 1.4大鼠分組及模型制備
[0033] 大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氨苯砜組(80mg · kg-0、化合物（I)組(80mg · kg-i)、氨苯砜與化合物（I)組合物組【40mg · kg-1氨苯砜+40mg · kg^1化合物（I)】。每組大鼠陰道涂片連續(xù)5d:抽取30yL生理鹽水，重復(fù)洗大鼠陰道口，然后吸 出約20yL液體，放到裝有染色劑的EP管中，彈勻，室溫放置15min后在顯微鏡下觀察，確認(rèn)動(dòng) 物是否處于動(dòng)情間期，五天連續(xù)處于動(dòng)情間期的動(dòng)物已進(jìn)入老（更)年期。采用不同方法進(jìn) 行18d不可預(yù)知慢性應(yīng)激建立抑郁模型：行為限制2h、電擊足底(36V交流電，每隔lmin刺激1 次，每次刺激1 〇s，共30次）、冰水游泳（4°C，5min)、熱應(yīng)激（45 °C，5min)、搖晃（1次/秒， 15min)、鼠籠傾斜45度24h、夾尾（lmin)、禁水(24h)、禁食(48h)、明暗顛倒、潮濕墊料10h、空 瓶放置lh，連續(xù)18d，接受慢性應(yīng)激的大鼠單籠飼養(yǎng)。慢性應(yīng)激后72h剝奪睡眠測(cè)試實(shí)驗(yàn)后開 始給藥，連續(xù)21d。正常對(duì)照組與模型對(duì)照組小鼠灌胃給予純化水;其余組按照上述劑量灌 胃給藥。在末次治療24h后，頸椎脫臼法處死大鼠，迅速斷頭取血5~10mL，離心機(jī)離心血清。 [0034] 1.5放免法測(cè)定大鼠血清中E 2、LH、FSH含量
[0035]末次給藥24h后，腹主動(dòng)脈采血8h內(nèi)分離血清，放免法測(cè)定E2(雌二醇）、LH(促黃體 生成激素）、FSH(促卵泡生成激素)含量，按各藥盒說明書進(jìn)行操作。
[0036] 1 · 6ELISA 檢測(cè)血清中 IL-Ιβ、IL-2、IL-6 含量
[0037]加樣：加一定稀釋的待檢樣品O.lmL于已包被之反應(yīng)孔中，置37°C孵育lh。然后洗 滌（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）；加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋 的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1mL，37°C孵育0.5~lh，洗滌;加底物液顯色:于各反應(yīng) 孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0 . lmL，37 °C 10~30min;終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入 2mol/L硫酸0.05mL;結(jié)果判定:在酶免疫上，于450nm測(cè)定吸光度值。
[0038] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0039]采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，正態(tài)分布資料 使用單因素方差分析，偏態(tài)分布使用秩和檢驗(yàn)。
[0040] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0041] 2.1對(duì)圍絕經(jīng)期抑郁癥睡眠障礙模型大鼠血清性激素含量的影響
[0042]與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠 E2、FSH含量下降、LH升高（P < 0.01);與模型 對(duì)照組比較，氨苯砜與化合物（I)組合物組大鼠 E2、FSH含量明顯升高(P<0.01)，LH明顯降 低(P<0.01);與模型對(duì)照組比較，氨苯砜組、化合物（I)組大鼠 E2、FSH含量升高(P<0.05)， LH 降低(Ρ<0·05)。
[0043] 試驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0044] 2.2對(duì)圍絕經(jīng)期抑郁癥睡眠障礙模型大鼠 IL-Ιβ、IL-2、IL-6含量的影響
[0045] 與正常對(duì)照組比，模型對(duì)照組大鼠 IL-2、IL-6、IL-li3顯著降低(Ρ<0.01)。與模型 對(duì)照組比，氨苯砜與化合物（I)組合物組大鼠 IL-2、IL-6、IL-Ιβ顯著提高(Ρ<0.01);與模型 對(duì)照組比，氨苯砜組、化合物（I)組大鼠 IL-2、IL-6、IL-Ιβ提高(P<0.05)。
[0046] 試驗(yàn)結(jié)果見表2。
[0047] 表1對(duì)圍絕經(jīng)期抑郁癥睡眠障礙模型大鼠血清性激素含量的影響
[0049] 表2對(duì)圍絕經(jīng)期抑郁癥睡眠障礙模型大鼠 IL-lf3、IL-2、IL-6含量的影響
[0051] 圍絕經(jīng)期抑郁癥睡眠障礙多數(shù)學(xué)者把它歸因于卵巢功能衰退，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表 明，雌激素除了與生殖功能相關(guān)外，還具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用，可調(diào)節(jié)雌性動(dòng)物晝夜節(jié)律， 影響松果體產(chǎn)生褪黑素，促進(jìn)晝夜節(jié)律的同步發(fā)生，當(dāng)雌激素水平下降時(shí)，晝夜節(jié)律發(fā)生變 化，很可能出現(xiàn)失眠和睡眠中斷。此外雌激素可通過影響體溫調(diào)節(jié)中樞來影響睡眠，體溫以 最大速率下降時(shí)最可能入睡，而且入睡時(shí)間越接近體溫下降速率時(shí)，在睡眠的最初1小時(shí)里 覺醒越少，故圍絕經(jīng)期雌激素水平的下降可能改變了體溫調(diào)節(jié)過程，從而引起相當(dāng)比例的 睡眠障礙。另外雌激素對(duì)大腦皮層有抑制作用，雌激素缺乏時(shí)，大腦的抑制過程減弱，興奮 過程相對(duì)過高，兩者的平衡狀態(tài)遭到破壞，便表現(xiàn)為失眠。由于體內(nèi)雌激素水平過度下降， 免疫活性細(xì)胞不能獲得生理劑量的雌激素刺激，雌激素受體隨之下降。繼而，免疫活性細(xì)胞 不能有效產(chǎn)生足夠量的IL-li3、IL-2、IL-6及β-內(nèi)啡肽等免疫介質(zhì)，與去甲腎上腺素的比例 失調(diào)，最終導(dǎo)致更年期綜合征臨床證候群。
[0052] 上述結(jié)果表明，氨苯砜、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)圍經(jīng)期睡眠障礙具有調(diào)理;氨苯 砜和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)圍經(jīng)期睡眠障礙的調(diào)理作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成調(diào)理圍 經(jīng)期睡眠障礙的藥物。
[0053] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種氨苯砜的藥物組合物，其特征在于:包括氨苯砜、如權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的氨苯砜的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體包 括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或 潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的氨苯砜的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠囊 劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓 劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將京 大戟粉碎，用65~75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65%乙醇洗脫 10個(gè)柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和 1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2~4任一所述的藥物組合物在制備調(diào)理圍經(jīng)期睡眠障礙的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07J63/00GK106046107SQ201610471556
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月24日
【發(fā)明人】劉芊芊
【申請(qǐng)人】劉芊芊