鹽酸布替萘芬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了鹽酸布替萘芬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的鹽酸布替萘芬的藥物組合物中含有鹽酸布替萘芬和一種從百部的干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)。鹽酸布替萘芬、化合物(Ⅰ)可抑制去勢大鼠骨吸收，促進骨形成，從而阻止骨量丟失。鹽酸布替萘芬、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對骨量流失的具有治療作用；鹽酸布替萘芬和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對骨量流失的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成治療骨質(zhì)疏松的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【專利說明】
鹽酸布替萘芬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸布替萘芬的新用途，具體涉及鹽酸布替萘芬 的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸布替萘芬為苯甲胺衍生物，其作用機制為選擇性地抑制真菌角鯊烯環(huán)氧化 酶，干擾真菌細胞壁的麥角固醇的生物合成，影響真菌的脂質(zhì)代謝，使真菌細胞損傷或死亡 而起到殺菌和抑菌作用。
[0003] 骨質(zhì)疏松即骨質(zhì)疏松癥，是多種原因引起的一組骨病，骨組織有正常的鈣化，鈣鹽 與基質(zhì)呈正常比例，以單位體積內(nèi)骨組織量減少為特點的代謝性骨病變。在多數(shù)骨質(zhì)疏松 中，骨組織的減少主要由于骨質(zhì)吸收增多所致。以骨骼疼痛、易于骨折為特征。
[0004]迄今為止，尚未見鹽酸布替萘芬及其藥物組合物與骨質(zhì)疏松的相關(guān)性報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸布替萘芬的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸布替萘芬和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸布替萘芬和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療骨質(zhì)疏 松。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0009] -種鹽酸布替萘芬的藥物組合物，包括鹽酸布替萘芬、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將百部的干燥塊莖粉碎，用65 ~75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁 醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65%乙醇洗脫10個柱體積，收 集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗脫濃縮物用正 相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組 分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫液，洗脫液減壓 濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用70%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 上述鹽酸布替萘芬的藥物組合物在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0019] 本發(fā)明提供的鹽酸布替萘芬的藥物組合物中含有鹽酸布替萘芬和一種從百部的 干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸布替萘芬和該天然產(chǎn)物單獨作用時，對 骨質(zhì)疏松具有治療作用;二者聯(lián)合作用時，對骨質(zhì)疏松的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成 治療骨質(zhì)疏松的藥物。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022]分離方法：（a)將百部的干燥塊莖(2kg)粉碎，用70%乙醇熱回流提取（15L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的 正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65%乙 醇洗脫10個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65% 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (9個柱體積）、35:1 (10個柱體積）、 15:1(8個柱體積)和7:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c) 中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1(6個柱體積）、7:1(7個柱體積)和1:1 (6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷 鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (235mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0023] 結(jié)構(gòu)確證：白色粉末，冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 561.3892，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C37H52〇4,不飽和度為12。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(卯m，CDCl 3,500MHZ):H-la(2.13， qd，J=12.6,4.1Hz)，H-lb(2.24，m)，H-2a(2.27，m)，H-2b(2.40，dd，J=12.6,3.4Hz)，H-4 (2.28，q，J = 6.6Hz)，H-6a(1.41，m)，H-6b(1.92，dt，J=13.1，3.0Hz)，H-7a(1.57，m)，H-7b (1.66，m)，H-8(1.59，m)，H-10(1.75，m)，H-lla(1.31，td，J=13.8,3.3Hz)，H-llb(2.06，d，J =13.8Hz)，H-12a(1.39，m)，H-12b(1.52，m)，H-15a(1.38，m)，H-15b(1.64，m)，H-16a(1.41， m)，H-16b(1.71，m)，H-18(1.83，m)，H-19a(1.63，m)，H-19b(1.86，m)，H-21a(1.78，d，J= 13.1Hz)，H-21b(2.62，d，J=13.1Hz)，H-23(0.92，d，J = 6.8Hz)，H-24(0.83，s)，H-25a (4.51，d，J=12.4Hz)，H-25b(4.95，d，J= 12.4Hz)，H-26( 1.07, s)，H-27(1.17, s)，H-28 (1.14，s)，H-29(1.09，s)，H-30(1.16，s)，H-3,，7'（7.98，br，d，J = 7.6Hz)，H-4'，6'（7.46， t，J = 7 · 6Hz)，H-5 '（7 · 57，t，J = 7 · 6Hz);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。（ppm CDC13，125MHz): 24 · 8 (CH2d-C)，42.6(CH2,2-C)，212.5(C，3-C)，58.4(CH，4-C)，42.3(C，5-C)，41.4(CH2,6-C)， 18.3(CH2,7-C)，53.4(CH，8-C)，41.9(C，9-C)，60.8(CH，10-C)，30.4(CH2，n-C)，31.7(CH2， 12-C)，39.7(C，13-C)，37.6(C，14-C)，33.2(CH2，15-C)，35.2(CH2，16-C)，33.4(C，17-C)， 41.9(CH，18-C)，37.0(CH2，19-C)，36.1(C，20-C)，53.1(CH2,21-C)，216.4(C，22-C)，7.3 (CH 3,23-C)，14.6(CH3,24-C)，62.7(CH3,25-C)，20.8(CH 3,26-C)，18.1(CH3,27-C)，33.5 (CH3,28-C)，28.8(CH3,29-C)，25.3(CH 3,30-C)，166.7(C，r-C)，130.4(C，2'-C)，129.3(CH， 3'，7'-C)，128.5(CH，4'，6'-〇，133.6(01，5'-〇。紅外波譜中的1735〇11- 1吸收帶表明結(jié)構(gòu)中 存在羰基，而1448cm-1與1523cm-1吸收帶表明結(jié)構(gòu)中存在苯環(huán)結(jié)構(gòu)。 13C-NMR、DEPT和HSQC譜 中顯示有37個碳信號，包括七個甲基，十一個亞甲基(一個連氧碳），四個次甲基，九個季碳 (三個羰基碳）以及一組單取代苯環(huán)結(jié)構(gòu)，以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為六 環(huán)結(jié)構(gòu)。 1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示一組單取代苯環(huán)質(zhì)子信號δΗ 7.98(2H，br，d，J = 7.6Hz)、 7.46(2H，t，J = 7.6Hz)、7.57(lH，t，J = 7.6Hz)，七個甲基質(zhì)子信號δΗ 〇.92(3H，d，J = 6.8Hz)、0.83(3H，s)、1.07(3H，s)、1.17(3H，s)、1.14(3H，s)、1.09(3H，s)、1.16(3H，s)，一個 含氧亞甲基質(zhì)子信號δ Η 4.51(1!1，(1，1=12.4泡）與4.95(1!1，(1，1 = 12.4抱），四個次甲基質(zhì) 子信號δΗ 2.28(lH，q，J = 6.6Hz)、l .59(lH，m)、l .75(lH，m)、l .83(lH，m)。由以上NMR數(shù)據(jù)可 知該化合物為木栓烷型三萜類，并且結(jié)構(gòu)中存在兩個酮基以及一個羥甲基片段。根據(jù)HMBC 譜中顯示的H-3'，7'與C-Γ相關(guān)信號，以及C-Γ、C-2'、C-3'、C-4'、C-5'、C-6'與C-7'的碳化 學(xué)位移和 1H-NMR數(shù)據(jù)可知該化合物含有苯甲酰基結(jié)構(gòu)單元。通過分析HMBC譜中H2-25與C-Γ 相關(guān)信號以及C-25的化學(xué)位移可知苯甲酸是通過與C-25的羥甲基成酯形成苯甲酰基結(jié)構(gòu) 單元。另在HMBC譜中，H3-23與C-3以及H 2-21與C-22相關(guān)信號以及它們的碳化學(xué)位移數(shù)據(jù)可 以確定在C-2和C-22為酮基碳。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型 核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實 驗值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0025] 實施例2:藥理作用 [0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] 6月齡雌性SD大鼠，清潔級，體質(zhì)量220~270g，購自西普爾-必凱實驗動物有限公 司。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 鹽酸布替萘芬購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例 1。陽性藥骨松寶由貴州富華公司提供。
[0031] 1.3儀器
[0032]①雙能X線骨密度測量儀及LU-NAR-DPX0型小動物軟件。由美國GE公司提供。②全 自動生化分析儀（7600-010型）。由日立儀器（蘇州）有限公司提供。③骨鈣素 （bonegla protein，BGP)、白細胞介素 6(interleukin-6，IL_6)和喊性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP)試劑盒由上海森雄科技公司提供。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034] 將大鼠隨機分為6組，每組12只，分別為假手術(shù)組、模型對照組、陽性對照組(骨松 寶280mg · kg-1鹽酸布替萘芬組(60mg · kg-1化合物（I)組(60mg · kg-1鹽酸布替萘芬 與化合物（I)組合物組【30mg · kg^1鹽酸布替萘芬+30mg · kg^1化合物（I)】。采用絕經(jīng)骨質(zhì)疏 松動物模型造模方法造模。采用45mg · kg-Ι戊巴比妥鈉腹腔麻醉，固定，在最末肋骨下腋中 線與距脊柱外側(cè)lcm交叉處消毒后切開腹膜。模型對照組及藥物組將脂肪團拉出分離，結(jié)扎 雙側(cè)輸卵管并切除卵巢，切除卵巢做HE染色以驗證造模成功;假手術(shù)組不切除卵巢，僅開腹 縫合。術(shù)后每只大鼠肌肉注射青霉素 O.lmL。飼養(yǎng)4周后，假手術(shù)組和模型對照組以10mL· kg"1生理鹽水灌胃，藥物組灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥12周。
[0035] 1.5大鼠骨密度(BMD)、骨礦含量(BMC)測定
[0036]最后一次給藥后禁食24h，將大鼠處死。腹主動脈取血，離心取血清，再取出雙側(cè)股 骨，并剔除骨上附著軟組織，生理鹽水紗布包裹，分裝后置-20°C冰箱保存?zhèn)錅y。采用雙能X 線吸收法測定大鼠骨密度（bone mineral density，BMD)、骨礦含量（bone mineral content，BMC)。
[0037] 1.6統(tǒng)計學(xué)方法
[0038] 實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標準差(x土s)表示，應(yīng)用SPSS19.0版統(tǒng)計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0039] 2、實驗結(jié)果
[0040] 2.1對去勢大鼠模型骨密度(BMD)、骨礦含量(BMC)的影響
[0041] 與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠的BMD、BMC明顯降低(P<0.01);與模型對照組 比較，鹽酸布替萘芬與化合物（I)組合物組和陽性對照組大鼠的B M D、B M C顯著升高（P < 0.01)，鹽酸布替萘芬組與化合物（I)組大鼠的BMD、BMC顯著升高(Ρ<0.05)，去勢大鼠的骨 密度(BMD)、骨礦含量(BMC)得到改善。結(jié)果見表1。
[0042]表1對去勢大鼠骨密度、骨吸收與骨形成指標的影響
[0044] 上述結(jié)果表明，鹽酸布替萘芬和本發(fā)明提供的化合物（I)可抑制去勢大鼠骨吸收， 促進骨形成，從而阻止骨量丟失。鹽酸布替萘芬、化合物（I)單獨作用時，對骨量流失的具有 治療作用；鹽酸布替萘芬和化合物（I)聯(lián)合作用時，對骨量流失的治療效果進一步提高，可 以開發(fā)成治療骨質(zhì)疏松的藥物。
[0045] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)，2. -種鹽酸布替萘芬的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸布替萘芬、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸布替萘芬的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸布替萘芬的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、□服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將百 部的干燥塊莖粉碎，用65~75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65% 乙醇洗脫10個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 65 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅 烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用70%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的鹽酸布替萘芬的藥物組合物在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物 中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/137GK105949269SQ201610270462
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月27日
【發(fā)明人】周飛燕
【申請人】周飛燕