白楊素衍生物及其制備及其在治療高尿酸血癥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種白楊素衍生物及其制備及其在治療高尿酸血癥中的應(yīng)用，屬于藥物合成領(lǐng)域。從易得的天然產(chǎn)物白楊素為起始原料，選擇性地引入含氟原子的活性官能團(tuán)合成了白楊素衍生物的白楊素類衍生物(I)、(Ⅱ)，該合成方法簡(jiǎn)單，具有較好的可操作性和反應(yīng)收率，制得的白楊素類衍生物抗高尿酸血活性與先導(dǎo)化合物白楊素比較有極顯著的增強(qiáng)，其可用于治療高尿酸血癥。
【專利說(shuō)明】
白楊素衍生物及其制備及其在治療高尿酸血癥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，涉及白楊素類衍生物及其制備方法，具體是涉及一類 新型的白楊素類衍生物及其制備方法，以及該類化合物在制備抗高尿酸血癥藥物中的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 尿酸是人類嘌呤及核酸分解代謝的最終產(chǎn)物，尿酸來(lái)源有內(nèi)源性尿酸和外源性尿 酸，內(nèi)源性尿酸主要是谷氨酸在肝內(nèi)合成，但也有體內(nèi)核蛋白分解;外源性尿酸主要是攝入 富含嘌呤的食物。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，國(guó)內(nèi)外大量流行病學(xué)研究表明高尿酸 血癥/痛風(fēng)的患病率正逐年升高。
[0003] 黃嘌呤氧化酶是體內(nèi)尿酸生成反應(yīng)的關(guān)鍵酶，它催化黃嘌呤生成尿酸及次黃嘌呤 生成黃嘌呤。目前，別嘌呤醇和非嘌呤類黃嘌呤氧化酶抑制劑非布索坦作為主要的抗痛風(fēng) 藥物，但兩者的副作用較多。2013年國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局曾發(fā)布《藥品不良反應(yīng)信息 通報(bào)》提示別嘌呤醇引起重癥藥疹的安全問(wèn)題。因此研究開(kāi)發(fā)新型低毒高效的非嘌呤類黃 嘌呤氧化酶抑制劑具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0004] 白楊素(Chrysin)，化學(xué)名5,7-二羥基黃酮，白楊素(5,7-二羥基黃酮)是一種在自 然基廣泛存在的黃酮化合物，具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗糖尿病、抗焦慮等廣泛的 藥理活性。
[0005] 白楊素結(jié)構(gòu)中含有2個(gè)極性官能團(tuán)羥基，親脂性弱，同時(shí)由于羥基在分子間形成氫 鍵，親水性也較差，且白楊素進(jìn)入體內(nèi)5、7位羥基在體內(nèi)易被糖基化導(dǎo)致活性降低，導(dǎo)致其 口服生物利用度低，限制了其在臨床上的廣泛使用。因此，改善白楊素的水溶性或脂溶性， 提高生物利用度、改善其藥理活性，以擴(kuò)展其應(yīng)用范圍已成為白楊素研究的熱點(diǎn)。盡管現(xiàn)有 技術(shù)中已經(jīng)對(duì)白楊素衍生物做了大量研究，但衍生物僅限于白楊素磺化物、硝化物、烷基 化、酯化、磷?；被?、甲基化、偶聯(lián)雜環(huán)及一氧化氦供體衍生物的合成，且主要研究其 在抗癌方面的應(yīng)用。選擇性地引入含氟原子的活性官能團(tuán)制備白楊素衍生物在抗高尿酸血 癥藥物方面應(yīng)用的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，而且制備的白楊素衍生物經(jīng)文獻(xiàn)檢索也未見(jiàn)報(bào)道，因 此本研究成果具有重要應(yīng)用價(jià)值。
[0006] 當(dāng)氟原子或含氟基團(tuán)等被引入化合物后，其電效應(yīng)和模擬效應(yīng)不僅改變了分子內(nèi) 部電子密度的分布，而且還能提高化合物的脂溶性和滲透性以及在生物膜上的溶解性，促 進(jìn)藥物在生物體內(nèi)的吸收與傳遞速度，使生理作用發(fā)生變化。它的電負(fù)性使得C 一F鍵可極 化性降低，在代謝過(guò)程中不易分解;并且氟烷基與簡(jiǎn)單烷基相比溶劑化作用大大降低，從而 使配體與靶酶的結(jié)合作用增強(qiáng)。簡(jiǎn)言之，氟取代藥物能在很大程度上改變各種生物過(guò)程，且 通過(guò)電子的調(diào)節(jié)使藥物和受體間的結(jié)合力加強(qiáng)。然而在自然界中，天然的含氟有機(jī)物非常 少見(jiàn)，自然界中發(fā)現(xiàn)的含氟有機(jī)化合物僅有12種。因此，向有機(jī)分子中選擇性地引入氟原子 或含氟官能團(tuán)以合成含氟有機(jī)物一直是化學(xué)家們孜孜以求的研究領(lǐng)域。
[0007] 我們?cè)O(shè)計(jì)通過(guò)胺甲基化反應(yīng)在白楊素8位引入含氟原子的活性官能團(tuán)，寄期提高 白楊素生物活性，研究開(kāi)發(fā)新型低毒高效的非嘌呤類黃嘌呤氧化酶抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供一種白楊素衍生物及其制備及其在治療高尿酸血癥中的應(yīng)用，目的是 通過(guò)對(duì)白楊素進(jìn)行胺甲基化反應(yīng)，增強(qiáng)其抗高尿酸血癥作用，提供一系列氟原子或含氟官 能團(tuán)的白楊素類衍生物。
[0009] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供白楊素類衍生物的制備方法。
[0010] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供白楊素類衍生物在治療高尿酸血癥中的用途。
[0011] 本發(fā)明的目的是通過(guò)技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0012]如式I、Π 所示的白楊素類衍生物：
[0014] 其中：辦為芐基，2-氟苯基，3-氟苯基，4-氟苯基，2，4-二氟苯基，2，6-二氟苯基，2， 3，4三氟苯基，3，4，5三氟苯基，4-三氟甲基苯基，4-氟芐胺;R 2為4-氟苯基，2，4-二氟苯基， 4_三氟甲基苯基。
[0015] 本發(fā)明所述的白楊素衍生物制備方法反應(yīng)機(jī)理如下：
[0016] 以白楊素為原料，在甲醛或者多聚甲醛條件下，在乙醇、甲醇或二甲基甲酰胺DMF 溶液中與相應(yīng)的胺類反應(yīng)得到通式(I)或（II)表示的化合物：
[0017]
[0018] 本發(fā)明提供的白楊素衍生物和現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)比具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0019] 1、本發(fā)明提供的系列白楊素衍生物，通過(guò)在白楊素進(jìn)行胺甲基化反應(yīng)選擇性的引 入氟原子或含氟官能團(tuán)，得到的白楊素衍生物溶解性好，且白楊素衍生物可以和多種堿反 應(yīng)制備得到鹽化物，并可制成多種藥物劑型，方便臨床用藥。
[0020] 2、本發(fā)明提供的制備方法，合成方法簡(jiǎn)單，具有較好的可操作性和反應(yīng)收率，制備 的白楊素衍生物，經(jīng)文獻(xiàn)檢索也未見(jiàn)報(bào)道。
[0021] 3、動(dòng)物試驗(yàn)表明，先導(dǎo)化合物白楊素活性較弱而衍生物1-2、3、4、5、6和9(40mg/ kg)劑量即可以明顯降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的作用；其中衍生物Π -1、2、3使動(dòng) 物模型小鼠的高血尿酸水平恢復(fù)到正常水平，顯示出巨大的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0022]以下通過(guò)優(yōu)選化合物的部分合成實(shí)例和藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)例的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的上 述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述的實(shí) 例。
[0023]實(shí)施例1化合物1-1的制備
[0024] 取0.254g白楊素 （lmmo 1)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5.9mmol)，在65°C劇烈攪拌30min后，加入芐胺160ul (1.5mmol)， 在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌3h后反應(yīng)完成，反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙?，加? %的 氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9,乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò)濾，減壓蒸 干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-1。
[0025] 化合物1-1 5,7_二羥基-2-苯基-8-((芐氨基）甲基)-4_H-苯并吡喃-4-酮
[0026] 淺黃色結(jié)晶，收率：58 · 81 % ;々-Μ? (CDC13，300MHz) 3 · 95 (s，2H，Ar-CH2-NH)，4 · 21 (s，2H，Ar-CH2-NH)，6.33(s，lH，=C(0H)-CH-C(0H) = )6.68(s，lH，_⑶-CH = C) ,7.31-7.8 (m，10H，Ar-H)，12.54(s，lH，-CH2_0H) ·δ:13〇匪R(CDC13,75MHz)，S:44.76,55.73,98.26， 99.81,105.83,106.05,126.03,127.62,128.53,128.99,129.12,131.29,131.80,137.46， 154.24，160.09，160.43，163.28，182.38.MS-EI:m/z 373M+。
[0028] 實(shí)施例2化合物1-2的制備
[0029] 取0.254g白楊素 （lmmo 1)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5.9mmol)，在65 °C劇烈攪拌30min后，加入2-氟苯胺166ul (1.5mmol)，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌2.5h后反應(yīng)完成，反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀?解，加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水， 過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-2。
[0030] 化合物1-2 8-((2-氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮
[0031 ]淺黃色結(jié)晶，收率：47 · 22 % 匪R(CDC13，300MHz) δ : 4 · 59 (s，2H，Ar-CH2-NH)， 6.47(s，lH，=C(0H)-CH-C(0H) = )6.65(s，lH，-C0-CH = C) ,6.70-7.88(m，9H，Ar-H) ,13.01 (s，1H，-CH2_OH).13C-匪R(CDC13,75MHz)，δ:45.51,81.15,94.81,105.60,116.33,116.54， 121.22,124.26,124.33,124.52,126.30,129.07,131.82,154.40,155.95,158.00,160.10, 164.05,182.63.MS-EI:m/z 378[M+l]+〇
[0033]實(shí)施例3化合物1-3的制備
[0034] 取0.254g白楊素 （lmmo 1)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37%甲醛水溶液48〇111(5.9111111〇1)，在65°(：劇烈攪拌3〇111丨11后，加入3-氟苯胺166 (1.5mmol)，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌1.5h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀?解，加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水， 過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-3。
[0035] 化合物1-3 8-((3-氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮
[0036]淺黃色結(jié)晶，收率：49 · 78 % 匪R(CDC13，300MHz) δ : 4 · 64(s，2H，Ar-CH2-NH)， 6.46(s，lH，=C(0H)-CH-C(0H) = )6.65(s，lH，-C0-CH = C) ,6.67-7.88(m，9H，Ar-H) ,13.03 (s，1H，-CH2-OH) · 13C-NMR(CDC13，75MHz)，δ : 45 · 65，79 · 79，94 · 95，104 · 27，104 · 33，105 · 60， 108.54,113.68,126.31，129.07,130.54,131.32,131.85,155.99,158.00,160.17,164.11， 164.90，182.64.MS-EI:m/z 377M+。
[0038] 實(shí)施例4化合物1-4的制備
[0039] 取0.254g白楊素 （lmmo 1)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5.9mmol)，在65 °C劇烈攪拌30min后，加入4-氟苯胺166ul (1.5mmo 1 )，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌2h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙猓?加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò) 濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物I -4。
[0040] 化合物〗-4 8-((4-氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮
[0041] 淺黃色結(jié)晶，收率：55.41% JH-匪R(CDCl3,300MHzM:4.75(s，2H，Ar-^^-NH)， 6.31 (s，lH，=C(0H)_迎-C(OH) = )6.68(s，lH，_⑶-迎=C) ,6.95-7.94(m，9H，Ar-H) ,12.47 (s，lH，-CH2-0^p.13C-NMR(CDCl3,75MHz)，δ :46.50,81.05,100.22,106.31,115.87,116.10， 121 ·12,121.20,126.10,131.33,131.96,144.40,153.42,157.46,160.35,163.38， 181.36.MS-EI:m/z 378[M+l]+〇
[0043] 實(shí)施例5化合物1-5的制備
[0044] 取0.254g白楊素（lmmol)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5 · 9mmol)，在65 °C劇烈攪拌30min后，加入2，4-二氟苯胺194ul (1.5mmol)，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌2.5h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀?解，加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水， 過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-5。
[0045] 化合物1-5 8-((2,4-二氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮
[0046]淺黃色結(jié)晶，收率：57 · 41 % 匪R(CDC13，300MHz)δ : 4 · 89(s，2H，Ar-CH2-NH)， 6.33(s，lH，=C(0H)-CH-C(0H) = )6.69(s，lH，-C0-CH = C) ,6.73-7.94(m，8H，Ar-H) ,12.51 (s，1H，-CH2-OH).13C-NMR(CDC13,75MHz)，δ:45.99,81.21,98.92,100.18,104.72,104.97， 105.22,106.25,111.05,111.25,122.27,122.36,126.09,129.26,131.22,131.99,159.94， 160.38,163.44,182.39.MS-EI:m/z 396[M+1]+.
[0048]實(shí)施例6化合物1-6的制備
[0049] 取0.254g白楊素（lmmol)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5.9mmo 1)，在65 °C劇烈攪拌30min后，加入2，6-二氟苯胺194 (1.5mmol)，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌1.5h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀?解，加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水， 過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-6。
[0050] 化合物1-6 8-((2,6-二氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4- 酮
[0051 ]黃色結(jié)晶，收率：52 · 11 % 匪R(CDC13，300MHz)δ : 4 · 56 (s，2H，Ar-CH2-NH)，6 · 56 (s，1H，=C(0H)-CH-C(0H) = )6 · 69(s，1H，-C0-CH = C) ,6.89-7.92(m，9H，Ar-H)，12.99(s， 1H，-CH2-OH) .13C-匪R(CDC13,75MHz)，δ:45.95,81.43,95.15,105.62,112.11,112.36， 124.49,126.32,129.06,131.79,155.92,157.62,158.61，160.37,161.77,164.06， 182.75.MS-EI:m/z 395M+.
[0053] 實(shí)施例7化合物1-7的制備
[0054] 取0.254g白楊素（lmmol)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5 · 9_〇1)，在65°C劇烈攪拌30min后，加入2，3，4-三氟苯胺220ul (1.5mmo 1 )，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌2h后反應(yīng)完成;反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙猓?加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò) 濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-7。
[0055] 化合物1-7 8-((2,3,4_三氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃- 4-酮
[0056] 黃色結(jié)晶，收率：54 · 26 % 匪R(CDC13，300MHz) δ : 4 · 5 (s，2H，Ar-CH2-NH)，6 · 70 (s，lH，=C(0H)-CH-C(0H) = )，6.73-7.85(m，8H，Ar-H)，13.06(s，1H，-CH2_0H) .13C-匪R (CDC13,75MHz)，δ:46·09,81·25,98·59,103.90,106.27,111.26,114.64,126.10,129.34， 132.16，134.19，158.31，163.17，182.43.MS-EI:m/z414M+.
[0058] 實(shí)施例8化合物1-8的制備
[0059] 取0.254g白楊素 （lmmo 1)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5 · 9_〇1)，在65°C劇烈攪拌30min后，加入3，4，5-三氟苯胺220ul (1.5mmol)，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌1.5h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀?解，加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水， 過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物1-8。
[0060] 化合物8-((3,4,5-三氟苯氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮
[0061 ]黃色結(jié)晶，收率：46 · 41 % 匪R(CDC13，300MHz)δ : 4 · 57 (s，2H，Ar-CH2-NH)，6 · 47 (s，1H，=C(0H)-CH-C(0H) = )6 · 66(s，1H，-C0-CH = C) ,6.70-7.88(m，7H，Ar-H)，12.99(s， 1H，-CH2-OH) .13C-匪R(CDC13,75MHz)，δ :46.04,94.99,102.60,103.63,105.21,105.59， 126.29,129.08,131.20,131.91,143.83,150.38,152.84,156.04,158.04,159.73,164.20， .MS-EI :m/z 412[M-1] +。
[0063]實(shí)施例9化合物1-9的制備
[0064] 取0.254g白楊素（lmmol)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，10ml，再加 入37 %甲醛水溶液480ul (5 · 9mmol)，在65 °C劇烈攪拌30min后，加入4-氟芐胺190ul (1.5mmo 1 )，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌lh后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙猓?加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò) 濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物I-9。
[0065] 化合物1-9 8-((4-氟芐基氨基）甲基)-5,7-二羥基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮
[0066] 黃色結(jié)晶，收率：57 · 41 % 匪R(CDC13，300MHz)δ : 3 · 89(s，2H,4-F-Ar-CH2-NH)， 4.17(s，2H，Ar-CH2-NH)，6.30(s，lH，=C(0H)-CH-C(0H) = )6.65(s，lH，-C0-CH = C) ,7.02-7.97(m，9H，Ar-H)，12.52(s，lH，-CH2_0H) .13C-NMR(CDCl3,75MHz)，S:44.68,54.93,82.47， 98.15,99.81,106.06,115.27,115.48,126.00,129.15,130.58,131.26,131.85,133.20， 154,23，160.12，161.07，163.28，182.36.MS-EI:m/z 391M+。
[0068] 實(shí)施例10化合物Π -1的制備
[0069] 取0.254g白楊素（lmmol)于反應(yīng)瓶中，加入甲醇使其溶解，20ml，再加入37%甲醛 水溶液976ul (12mmol)，在65°C劇烈攪拌30min后，加入4-氟苯胺167ul (1.5mmol)，在此溫度 下將該反應(yīng)溶液攪拌26h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙?，加? %的氫氧化鈉 溶液調(diào)pH值至9,乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠 柱層析，得化合物Π -1。
[0070] 化合物π-l 9-(4-氟苯基)-5-羥基-6-(羥甲基)-2-苯基-9,10-二氫苯并吡喃[8， 7-6][1，3]氧嗪-4(8田-酮
[0071 ]黃色結(jié)晶，收率：66 · 49 % 匪R(CDC13，300MHz) δ : 4 · 60 (s，2H，Ar-CH2-N)，4 · 70 (s,2H,Ar-CH2-OH),5.46(s,2H,0-CH2-N),6.68(s,lH,-C0-CH=C),6.94-7.91(m,9H,Ar-H), 13·10(s，1H，-CH2-OH) · 13C-匪R(CDC13，75MHz)，δ :57·90，61·80，81·27，103·75，104·57, 105.43,115.72,115.94,120.50,126.22,129.11,131.41,131.83,144.24,154.67,157.86， 159.01,159.51,163.86,182.75.MS-EI:m/z 420[M+1]+〇
[0073] 實(shí)施例11化合物Π -2的制備
[0074] 取0.254g白楊素（lmmol)于反應(yīng)瓶中，加入甲醇使其溶解，約20ml，再加入37%甲 醛水溶液976111(12臟〇1)，在65°(：劇烈攪拌301^11后，加入2、4-氟苯胺194111(1.5臟〇1)，在此 溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌24h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙?，加? %的氫氧 化鈉溶液調(diào)pH值至9,乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò)濾，減壓蒸干，經(jīng) 硅膠柱層析，得化合物Π -2。
[0075] 化合物Π -2 9-(2,4-二氟苯基)-5-羥基-6-(羥甲基)-2-苯基-9,10-二氫苯并吡 喃[8,7-e][l，3]氧嗪-4(8H)_ 酮
[0076]黃色結(jié)晶，收率：67 · 21 % 匪R(CDC13，300MHz)δ : 4 · 54(s，2H，Ar-CH2-N)，4 · 72 (s，2H，Ar-CH2-〇H)，5 · 39(s，2H，O-CH2-N)，6 · 69(s，1H，-C〇-CH=C)，6 · 72-7 · 91 (m，8H，Ar-H)， 13.13(s，1H，-CH2-OH).13C-匪R(CDC13,75MHz)，S:,57.96,61.85,81.62,103.71,104.69， 104.93,105.50,110.85,122.04,126.26,129.16,131.44,131.89,154.70,156.84,157.93， 158·74，160·03，163·95，182·78.MS-EI:m/z 438[M+1] +。
[0078] 實(shí)施例12化合物Π -3的制備
[0079] 取0.254g白楊素 （lmmo 1)于反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺DMF使其溶解，約10ml，再 加入37 %甲醛水溶液976ul (12mmol)，在65°C劇烈攪拌30min后，加入4-三氟甲基苯胺240ul (1.5mmo 1 )，在此溫度下將該反應(yīng)溶液攪拌2h后反應(yīng)完成。反應(yīng)液減壓蒸干，殘?jiān)铀芙猓?加入5 %的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9，乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，無(wú)水MgS04脫水，過(guò) 濾，減壓蒸干，經(jīng)硅膠柱層析，得化合物Π -3。
[0080] 化合物n-3 9-(4-三氟甲基苯基)-5-羥基-6-(羥甲基)-2-苯基-9,10-二氫苯并 吡喃[8,7-e][l，3]氧嗪-4(8H)_ 酮
[0081 ]黃色結(jié)晶，收率：57 ·41 % 匪R(CDC13，300MHz)δ :4· 24(s，2H，Ar-Ofe-N) ,5.00 (s，2H，Ar-CH2-〇H)，5 · 78(s，2H，O-CH2-N)，6 · 5(s，1H，-C〇-CH= C)，6 · 74-8 · 18(m，10H，Ar-H)， 13.23(s，1H，-CH2-0廷）.13C-匪R(CDC13,75MHz)，δ:44.33,54.84,78.78,99.43,104.03， 105.40,108.67,111.30,117.40,125.92,126.61,129.16,130.49,132.17,150.39,151.35， 152.08,157.47,158.08,163.25,182.19.MS-EI:m/z 470[M+1]+〇
[0083]實(shí)施例13.白楊素衍生物的黃嘌呤氧化酶抑制活性研究
[0084] 空白X0D活性測(cè)定:吸取50mmol/L磷酸緩沖液3ml至10ml容量瓶中，再分別加入3ml 黃嘌呤溶液(2. Ommo 1/L)和0.4mlNBT(1.8mg/L)，搖勻，即為X0D活性測(cè)定用空白溶液。再往 該空白溶液加入2.5mlX0D溶液(0.08U/ml)搖勻，即為XOD活性測(cè)定用溶液。以XOD溶液的加 入開(kāi)始計(jì)時(shí)，25°C反應(yīng)30min后，在560nm波長(zhǎng)下以空白溶液為對(duì)照，測(cè)定X0D吸光度A〇。
[0085] 白楊素衍生物對(duì)XOD活性的抑制作用測(cè)定:精密吸取白楊素組(Chrysin)和白楊素 衍生物1-1~1-9，Π -1~Π -3溶液0.5ml，各置于10ml容量瓶中，按"空白X0D活性測(cè)定"項(xiàng)下 操作分別得到樣品X0D抑制活性測(cè)定用X0D溶液。以X0D溶液的加入開(kāi)始計(jì)時(shí)，25°C反應(yīng) 30min后，在560nm波長(zhǎng)下以空白溶液為對(duì)照，測(cè)定X0D吸光度A X。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
[0086] 抑制率（％) = (Aq-Ax)/AqX100%
[0087] 表1、白楊素及白楊素衍生物lOμg/ml對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響測(cè)定結(jié)果(M+SE)
[0089] 黃嘌呤氧化酶抑制活性測(cè)定結(jié)果如表1所示，先導(dǎo)化合物白楊素活性較弱，衍生物 1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-9、和11-2抑制作用亦顯著，衍生物11-1、11-3抑制作用最強(qiáng)。
[0090] 實(shí)施例14.白楊素衍生物小鼠體內(nèi)抗高尿酸活性研究
[0091] KM小鼠，體重18-22g，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，隨機(jī)分組，分別為對(duì)照組，陽(yáng)性藥 組(別噪醇片)20mg/kg，白楊素組(Chrysin)和白楊素衍生物1-1~1-9, Π -1~Π -3均設(shè)置 為高、低劑量組(40、20mg/kg)，每組10只。各組小鼠連續(xù)灌胃給藥3天，給藥體積為20ml/kg， 對(duì)照組給予同體積0.5 % CMC。末次給藥后0.5h各組小鼠腹腔注射次黃嘌呤600mg/kg( 0.5 % CMC配制），給藥體積為10ml/kg，注射后30分鐘內(nèi)小鼠眼眶眶靜脈取血，室溫沉降30分鐘， 3 0 0 0 r p m / m i η離心10分鐘取血清，按照試劑盒要求測(cè)定U A含量。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差 (i±s)表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析，組間比較用單因素方差分析法，顯著性水平 以P<0.05和P<0.01標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。
[0092]表2、白楊素及白楊素衍生物對(duì)高尿酸小鼠血清尿酸(UA)的影響
[0094]根據(jù)表2結(jié)果顯示：先導(dǎo)化合物白楊素活性較弱而衍生物1-2、3、4、5、6和9(4〇!!^/ kg)劑量即可以明顯降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的作用；其中衍生物Π -1、2、3使動(dòng) 物模型小鼠的高血尿酸水平恢復(fù)到正常水平。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種白楊素衍生物，其特征在于，它們是具有通式（I)或（Π )所示的化合物及其在藥 學(xué)上可以接受的鹽和前藥：其中:Ri為芐基，2-氟苯基，3-氟苯基，4-氟苯基，2，4-二氟苯基，2，6-二氟苯基，2，3，4三 氟苯基，3，4，5三氟苯基，4-氟芐胺;R2為4-氟苯基，2，4-二氟苯基，4-三氟甲基苯基。2. -種包括如權(quán)利要求1所述的化合物以及任選的載體物質(zhì)和、或輔劑的藥物組合物。3. 如權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療高尿酸血癥的藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求2所述的藥物組合物在制備治療高尿酸血癥的藥物中的應(yīng)用。5. 如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：白楊素在甲醛或 者多聚甲醛條件下，在乙醇、甲醇或二甲基甲酰胺(DMF)溶液中與相應(yīng)的胺類反應(yīng)得到通式 (I)或（Π )表示的化合物，其中RjPR2如權(quán)利要求1所定義。
【文檔編號(hào)】A61K31/5365GK105884735SQ201610256522
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月21日
【發(fā)明人】仲崇琳, 楊美林, 全哲山, 林紅
【申請(qǐng)人】吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院, 林紅