一種稠環(huán)化合物、其制備方法和應(yīng)用及其中間體化合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種稠環(huán)化合物、其制備方法和應(yīng)用及其中間體化合物。該化合物可以用作磷脂酰肌醇3?激酶的抑制劑。
【專利說(shuō)明】
一種稠環(huán)化合物、其制備方法和應(yīng)用及其中間體化合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種稠環(huán)化合物以及它們的制備方法 和其作為磷脂酰肌醇3-激酶抑制劑的用途。本發(fā)明同時(shí)涉及該化合物的中間體化合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤是一類嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病。臨床上應(yīng)用的大部分小分子抗腫 瘤藥物或是影響DNA的結(jié)構(gòu)和功能、或是干擾核酸的合成與修復(fù)、或是抑制某種管家蛋白 (如微管蛋白）的合成與功能，因而具有普遍的細(xì)胞毒性，臨床應(yīng)用中存在毒副作用大、易產(chǎn) 生耐藥性等缺點(diǎn)。
[0003] 分子靶向藥物的出現(xiàn)是抗腫瘤藥物發(fā)展史上的里程碑式事件。這類藥物作用于腫 瘤細(xì)胞的特定分子靶標(biāo)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為具有抑制作用從 而產(chǎn)生抗腫瘤作用。這些分子靶標(biāo)在腫瘤組織中特異性表達(dá)或過(guò)高表達(dá)，而在正常組織中 不表達(dá)或常規(guī)表達(dá)，因此分子靶向藥物一般能夠選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞或抑制其生長(zhǎng)增 殖，而對(duì)正常細(xì)胞的毒性作用較小。尋找和開(kāi)發(fā)新的分子靶向藥物，代表了腫瘤精準(zhǔn)治療的 發(fā)展方向。
[0004] 大量研究結(jié)果表明，人體內(nèi)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與PI3K/Akt/mT0R信號(hào)通路的調(diào)節(jié) 和異?；罨芮邢嚓P(guān)。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)是磷脂 激酶家族中的一個(gè)重要成員，它能特異性地催化磷脂酰肌醇3位羥基的磷酸化，是PI3K/ Akt/mTOR信號(hào)通路上的關(guān)鍵位點(diǎn)，對(duì)細(xì)胞的增殖、生存和代謝等起關(guān)鍵作用。
[0005] PI3K依其結(jié)構(gòu)特征、活化機(jī)制和底物選擇的不同，可分為I、II、III三種類型。由于 迄今為止功能研究最多的是I型PI3K，因此通常所說(shuō)的PI3K就是指I型PI3K?！叫蚉I3K依其調(diào) 節(jié)亞基和上游調(diào)節(jié)分子的不同又分為IA和IB兩個(gè)亞類。IA亞類PI3K可被各種受體酪氨酸激 酶和Ras激活，包括ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κβ和ΡΙ3Κδ三個(gè)亞型，分別由各自的催化亞基pi 10與調(diào)節(jié)亞基 ρ85組成。IB亞類PI3Κ主要被G蛋白耦聯(lián)受體激活，僅ΡΙ3Κ γ -個(gè)亞型，它由催化亞基ρ 110 γ 和調(diào)節(jié)亞基ρ 101或ρ84組成。
[0006] 以上四種亞型的ΡΙ3Κ在體內(nèi)的分布有所不同：ΡΙ3Κα和ΡΙ3Κβ在各種器官均有表 達(dá)，而ΡΙ3Κδ和ΡΙ3Κ γ主要分布在骨髓細(xì)胞中。四種亞型ΡΙ3Κ的功能也有所不同：ΡΙ3Κα與腫 瘤的關(guān)系最為密切，編碼PllOa的基因 PIK3CA的突變、擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)廣泛存在于多種惡性腫 瘤中，因此，ΡΙ3Κα被認(rèn)為在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用，此外還有研究表明ΡΙ3Κα 與胰島素信號(hào)傳導(dǎo)和葡萄糖代謝有關(guān);ΡΙ3Κβ可激活血小板，因此在血栓性疾病的發(fā)展中起 著重要的作用，此外，ΡΙ3Κβ近年來(lái)被報(bào)道在PTEN缺失的癌癥患者中起著比ΡΙ3Κα還重要的 作用;ΡΙ3Κδ和ΡΙ3Κ γ與炎癥和免疫等有密切的關(guān)系。
[0007] 由于ΡΙ3Κ與癌癥等疾病的密切關(guān)系，以ΡΙ3Κ為靶標(biāo)的抑制劑的開(kāi)發(fā)受到了國(guó)際制 藥界的高度重視。
[0008] 第一個(gè)報(bào)道的ΡΙ3Κ合成抑制劑是LY294002,它對(duì)I類ΡΙ3Κ的抑制活性達(dá)微摩爾級(jí)， 對(duì)PI3Ka的IC5q值達(dá)0.63μΜ，在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中也顯示了一定的抗腫瘤作用，但由于安全性、 穩(wěn)定性等原因，未能進(jìn)入臨床試驗(yàn)。
[0009]
[0010] 隨著PI3K晶體結(jié)構(gòu)的闡明，PI3K抑制劑的藥物設(shè)計(jì)和發(fā)現(xiàn)得到了快速推進(jìn)，目前 已有多種具有不同結(jié)構(gòu)的PI3K抑制劑陸續(xù)被報(bào)道，包括嘧啶類、噻吩并嘧啶類、喹唑酮類、 雙烯酮類、咪唑并喹啉類、咪唑并吡啶類、苯并吡啶類及其他分子骨架化合物。
[0011] 嘧啶類、噻吩并嘧啶類及其衍生物：
[0012] GDC-0941 是由 Genentech 公司開(kāi)發(fā)的一種泛 PI3K 抑制劑，其對(duì) pll〇a、pl 1〇β、ρ110 δ、ρ110 γ的IC5q分別為31^、331^、31^、751^。〇)(：-0941的臨床1期試驗(yàn)結(jié)果表明其在乳腺癌、
[0014] BKM120是由Novartis公司開(kāi)發(fā)的一種2,4_雙嗎啉取代嘧啶類的泛PI3K抑制劑，其 對(duì)口110〇、？11(^、？11(^、？110丫的比5()分別為5211]\1、16611]\1、11611]\1、26211]\1，用于治療轉(zhuǎn)移性乳 腺癌的研究正處于III期臨床。 卵巢；癌》爾伍查癒串去由且右檢辟的祐日*癒任_ it曰耐疼_f生較好。
[0013]
[0015]
[0016] 喹唑酮類及其類似物：
[0017] IC-87114是一種選擇性ΡΙ3Κδ抑制劑，其對(duì)ΡΙ3Κδ的IC5q為0.5μΜ，較之于對(duì)ΡΙ3Κα、 ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κ γ的抑制活性，選擇性高達(dá)58到100倍。
[0018]
[0019] CAL-101 (Idelalisib)也是一種選擇性 ΡΙ3Κδ 抑制劑，其對(duì) ρΙΙΟδ 的 IC5q為 2 ·5ηΜ，較 之于對(duì)？110€[、？11(^、？110丫的抑制活性，選擇性高達(dá)40到300倍。基于？131^在炎癥中的重 要作用，最初關(guān)于CAL-101的藥理研究集中在其抗炎和治療自身免疫性疾病上。后來(lái)基于 ΡΙ3Κδ主要在骨髓細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)CAL-101的藥理研究轉(zhuǎn)移到對(duì)白血病和淋巴瘤的治療上。 在多個(gè)臨床試驗(yàn)結(jié)果的支持下，美國(guó)Π )Α于2014年7月批準(zhǔn)了Idelalisib三個(gè)適應(yīng)癥:與利 妥昔單抗(Rituxan)聯(lián)合治療復(fù)發(fā)的慢性淋巴細(xì)胞白血病、作為單藥治療復(fù)發(fā)性濾泡B細(xì)胞 非霍奇金淋巴瘤和復(fù)發(fā)性小淋巴細(xì)胞淋巴瘤。
[0020]
[0021]雙烯酮類及其類似物：
[0022] ?乂866是一種雙烯酮類的泛？131(抑制劑，其對(duì)？131(€[、？13狀、？131(丫的1(： 5()分別為 6ηΜ、3ηΜ、9ηΜ。目前處于I/II期臨床試驗(yàn)中。
[0023]
[0024] 咪唑并喹啉類、咪唑并吡啶類及其類似物：
[0025] BAY80-6946是Bayer公司開(kāi)發(fā)的一種高活性的泛PI3K抑制劑，其對(duì)ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κβ、 P13Κδ、P13Κ γ的IC5Q分別為0 · 5ηΜ、3 · 7nM、0 · 7ηΜ、6 · 4ηΜ。目前處于II期臨床試驗(yàn)中。
[0026]
[0027] PIK75為咪唑并吡啶衍生物，是一種選擇性ΡΙ3Κα抑制劑，其對(duì)ρ11〇α、ρ11〇β、ρ11〇 δ、ρ110γ 的IC5Q分別為5·8ηΜ、1·3μΜ、0·51μΜ、76ηΜ。
[0028]
[0029]苯并吡啶類及其衍生物：
[0030] CN103788071A要求保護(hù)下述通式化合物，部分化合物顯示了較高的體外增殖抑制
作用。
[0031]
[0032]
[0033] XL147是一種選擇性PI3K抑制劑，其對(duì)ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κδ、ΡΙ3Κγ 的IC5q分別為 39ηΜ、383ηΜ、36ηΜ、23ηΜ。
[0034]
[0035] PCT/US2009/045713公開(kāi)了下述通式化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0036]
[0037] 具體公開(kāi)了 137個(gè)化合物，包括：
[0038] N-( 2-氯-5-( 3-甲氧基-6喹啉基)-3-吡啶基)-4-氟苯磺酰胺；
[0039] N-(2-氯-5-(4-苯氧基-6-喹啉基)-3-吡啶基）甲磺酰胺；
[0040] N-(2-氯-5-(6-喹啉基)-3-吡啶基)-4-氟苯磺酰胺）；
[0041] N-( 2-甲氧基-5-( 4-嗎啉基喹啉-6-基)吡啶-3-基）甲磺酰胺等。
[0042] PI3K小分子抑制劑作為新一類的分子靶向藥物，潛力巨大，前景廣闊。因此，需要 更多結(jié)構(gòu)新穎、生物活性高、成藥性良好的PI3K抑制劑，用于腫瘤的靶向治療，以及用于抗 炎或治療自身免疫性疾病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0043]本發(fā)明提供了一種新型的PI3K選擇性抑制劑。具體而言，本發(fā)明提供了一種由以 下通式（I)表示的稠環(huán)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0044]
[0045]其中，X表示0、S、NR、SO2或NH2Cl，R選自 H、C1-6的烷基，優(yōu)選C1-4的烷基，Ri、R2、R 3、R4、 尺5、1?6、辦、1?8為獨(dú)立地選自由11、(：1-6的烷基、或具有0!1取代基的(： 1-6的烷基，優(yōu)選為!1、(：1-4的烷 基或具有OH取代基的&-4的烷基。Ri、R 2、R3、R4、R5、R6、R7、R 8為獨(dú)立地選自由H、Ci-6的烷基、或 具有OH取代基的Ck的烷基。
[0046]具體而言，本發(fā)明可以選自以下化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：








[0057] 其他化合物的結(jié)構(gòu)可以參照以上化合物進(jìn)行解釋。
[0058] 本發(fā)明同時(shí)提供了包含上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。本發(fā)明 稠環(huán)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或所述的藥物組合物可以有效地抑制PI3K的活性。 [0059]所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或所述藥物組合物作為PI3K抑制劑，可以作 為抗腫瘤藥物用于腦癌、頭頸癌、食管癌、肺癌、肝癌、胃癌、腎癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸 癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌、皮膚癌、白血病、骨髓異常增生綜合癥、肉瘤、骨肉瘤或橫紋 肌瘤等腫瘤的治療。
[0060]所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或所述藥物組合物作為PI3K抑制劑，可以作 為抗炎藥物用于慢性阻塞性肺病、哮喘等疾病的治療。
[0061] 所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或所述藥物組合物作為PI3K抑制劑，可以作 為治療自身免疫性疾病(例如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀肩病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡)的藥物。
[0062] 本發(fā)明的化合物可以通過(guò)以下方法制備。所述方法包括使式（ΙΙΓ)的化合物與式 (IV)的化合物反應(yīng)，得到式(I)的化合物的步驟：
[0063]
[0064] 其中X、R1、R2、R3、R4、R5、R 6、辦和心如前文所定義。
[0067] 本發(fā)明還提供了一種式(I)的化合物的制備方法，所述方法包括使式(IV'）的化合 物與式(ΠI)的化合物反應(yīng)，得到式(I)的化合物的步驟：
[0065] 所述方法還包括使式(II)的化合物與式(III)的化合物反應(yīng)得到式(ΙΙΓ)的化合 物白勺來(lái)藤.
[006d
[0068]
[0069] 其中父、1^、1?2、1?3、1?4、1?5、1? 6、1?7和1?8如前文所定義。
[0070] 所述方法還包括使式(II)的化合物與式(IV)的化合物反應(yīng)得到式(IV'）的化合物 的步驟，
[0071]
[0072] 通過(guò)上述方法，能夠以高產(chǎn)率得到所需化合物。
[0073] 另外，本發(fā)明還提供了一種式(ΙΙΓ)的化合物或式(IV'）的化合物，
[0074]
[0075] 其中乂、1^、1?2、1?3、1?4、1^、1?6、辦和1? 8如前文所定義。式(111'）的化合物或式（1￥'）的化 合物可以用作合成式(I)的化合物的原料或中間體。
[0076] 發(fā)明人通過(guò)大量探索及試驗(yàn)驗(yàn)證，在稠環(huán)上特異性的引入氰基，與沒(méi)有氰基的化 合物以及氰基用其他取代基代替的化合物相比，本發(fā)明得到的上述化合物或其藥學(xué)上可接 受的鹽具有出乎預(yù)料的、非顯而易見(jiàn)對(duì)PI3K的抑制活性。
【具體實(shí)施方式】
[0077] 以下實(shí)施例中使用的原料、試劑均為市購(gòu)。
[0078] 實(shí)施例1:Ν-(5-(3-氰基-4-硫代嗎啉基喹啉-6-基)-2_甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰 胺(化合物3)
[0079]
[0080] 步驟I :N-(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲烷磺酰胺
[ΠΠΗ11
123 將6-溴-4-氯喹啉-3-甲腈（140mg，0 · 6mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基）吡啶-3-基）甲磺酰胺(203mg，0 · 618mmol，1 · 03eq)和2N碳酸 鉀水溶液(0. 9mL，1.8mmo I，3. Oeq)于二氧六環(huán)(6mL)中的混合物脫氣，并加入二(三苯基膦） 二氯化鈀（2Img，0.03mmol，0.05eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物脫氣并回充氬氣(三個(gè)循環(huán)），然 后在100 °C下氬氣氣氛中攪拌7小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(30mL)稀釋，乙酸乙酯 萃取(30mLX3)。合并有機(jī)層并用食鹽水(30mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，經(jīng)快速 柱色譜(硅膠，二氯甲烷/甲醇=350:1，v/v)純化得到黃色固體(82mg，產(chǎn)率35 % )。 2 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)59.47(s,lH),9.21(s,lH),8.55(d,J = 2.2Hz,lH),8.44 (d ,J=1.6Hz,lH) ,8.39(dd ,J = 8.8,1.6Hz,lH) ,8.29(d ,J = 8.8Hz , 1H) ,8.09(d ,J = 2.2Hz, lH),4.01(s,3H),3.13(s,3H). 3 步驟2: N-( 5-( 3-氰基-4-硫代嗎啉基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺
[0085]
[0086] 將N-(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基）-2-甲氧基吡啶-3-基）甲烷磺酰胺（156mg， 0.4mmol)溶于NMP(5mL)中，加入碳酸鐘（83mg，0·6mmol，I · 5eq)和硫代嗎琳（62mg，0 ·6mmol, 1.5eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物在100°C下攪拌2小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物，用水(30mL)稀釋反應(yīng) 混合物，乙酸乙酯(20mL X 3)萃取。合并有機(jī)層，依次用水(20mL)和食鹽水（I OmL)洗滌，無(wú)水 硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，經(jīng)快速柱色譜（硅膠，DCM/MeOH= 100 :1，v/v)純化得白色固體 (63mg，產(chǎn)率為 34.6%)。
[0087] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)59.44(s,lH),8.81(s,lH),8.50(s,1H),8.25-8.15(m, 2H),8.13-8.03(m,2H),4.01(s,3H),3.88(br s,4H),3.13(s,3H),2.95(br s,4H).
[0088] 實(shí)施例2:
[0089] N-(5-(3-氰基-4-嗎啉基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺(化合物6)
[0090]
[0091]
[0092]
[0093] 將6_漠_4_氣-卩奎琳_3_甲臆（535mg，2 .Ommol)和嗎琳（523mg，6 .Ommol，3eq)于二氧 六環(huán)(7.5mL)中、在100°C下攪拌。反應(yīng)結(jié)束后真空濃縮，濃縮液用水(20mL)稀釋，乙酸乙酯 (2〇11^\3)萃取。合并有機(jī)層，依次用水（2〇11^)和食鹽水（2〇11^)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò) 濾，濃縮，經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯= 3:1，v/v)純化得到黃色固體(556mg，產(chǎn) 率為 87.4%)。
[0094] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)58.81(s,lH),8.20(d,J = 2.0Hz,lH),7.99(dd,J = 8.8, 2.0Hz,lH),7.93(d ,J = 8.8Hz,lH),3.87(t ,J = 4.4Hz,4H),3.68(t ,J = 4.4Hz,4H).
[0095] 步驟2: N_( 5-( 3-氰基-4-嗎啉基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺
[0096]
[0097] 將6-溴-4-嗎啉基喹啉-3-甲腈(96mg，0 · 3mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲 基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡啶-3-基）甲磺酰胺（118mg，0.36mmol，1.2eq)和2N碳酸 鉀水溶液(〇. 45mL，3. Oeq)于二氧六環(huán)(4mL)中的混合物脫氣，然后加入[I，1 '-雙(二苯基膦 基)二茂鐵]二氯化鈀（1111^，0.015111111〇1，0.0569)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物脫氣并回充氬氣(三 個(gè)循環(huán)），然后在l〇〇°C下氬氣氣氛中攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用（30mL)水稀 釋，用乙酸乙酯（30mL X 3)萃取。合并有機(jī)層并用食鹽水（30mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò) 濾，濃縮，經(jīng)快速柱色譜(硅膠，二氯甲烷/甲醇= 200:1，v/v)純化得到白色固體（104mg，產(chǎn) 率為 78.9%)。
[0098] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)59.45(s,lH),8.79(s,lH),8.48(d,J = 2.4Hz,lH),8.20 (d ,J=1.6Hz,lH) ,8.18(dd ,J = 8.6,2.0Hz,lH) ,8.08(d ,J = 8.6Hz , 1H) ,8.05(d ,J = 2.4Hz, lH),4.00(s,3H),3.91(t ,J = 4.4Hz,4H),3.73(t ,J = 4.4Hz,4H),3.13(s,3H).
[0099] 實(shí)施例3 :N-(5-(3-氰基-4-(2,6-二甲基嗎啉基）喹啉-6-基）-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺(化合物2)
[0100]
[0101] 制備方法如實(shí)施例1，步驟2)中將N-(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶- 3-基）甲烷磺酰胺
￡室溫下反應(yīng)。
[0102] 1H NMR(400MHz,DMS0)59.42(s,1H) ,8.76(s,lH) ,8.45(d,J = 2.0Hz, 1H) ,8.26-8.14(m,2H) ,8.12-8.01 (m,2H),4.00(s,3H),3.99-3.90(m,2H),3.85(d J= 12.4Hz ,2H), 3.29-3.18(m,2H),3.13(s,3H),1.17(d ,J = 6.1Hz,6H).
[0103] 實(shí)施例4:N-(5-(3-氰基-4-(4-甲基哌嗪-I-基)喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基） 甲磺酰胺(化合物1)
[0104]
123 制備方法如實(shí)施例1，其中步驟2)將N-(5_(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2_甲氧基吡 啶-3-基）甲烷磺酰胺與N-甲基哌嗪在室溫下反應(yīng)。 2 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.42(s，lH)，8.75(s，lH)，8.44(d，J = 2.2Hz，lH)，8.19 (d J= 1.6Hz, 1H) ,8.16(dd ,J = 8.8,1.6Hz,0H) ,8.06(d ,J = 8.8Hz , 1H) ,8.04(d ,J = 2.2Hz, lH),4.00(s,3H),3.72(br s,4H),3.13(s,3H),2.65(br s,4H),2.31(s,3H). 3 實(shí)施例5: (R)-N-(5-(3-氰基-4-(3-甲基嗎啉基）喹啉-6-基）-2-甲氧基吡啶-3- 基）甲磺酰胺(化合物4)
[0108]
[0109] 制備方法如實(shí)施例1，其中步驟2)將N-(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡 啶-3-基）甲烷磺酰胺?
i在同樣條件下反應(yīng)。
[0110] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.45(s，lH)，8.89(s，lH)，8.49(d，J = 2.4Hz，lH)，8.33 (d J= 1.6Hz, 1H) ,8.23(dd ,J = 8.8,2.0Hz,lH) ,8.13(d ,J = 8.8Hz , 1H) ,8.06(d ,J = 2.4Hz, 1H),4.18-4.05(m,2H),4.01(s,3H),4.00-3.93(m,1H),3.92-3.82(m,1H),3.82-3.73(m, lH),3.63(dd J = 10.8,4.0Hz,lH),3.30-3.26(m,lH),3.13(s,3H),l.ll(d ,J = 6.4Hz,3H).
[0111] 實(shí)施例6: (S)-N-(5-(3-氰基-4-(3-甲基嗎啉基）喹啉-6-基）-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺(化合物5)
[0112]
[0113] 制備方法如實(shí)施例1，其中步驟2)將N-(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡 啶-3-基）甲烷磺酰胺與
生同樣條件下反應(yīng)。
[0114] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.45(s，lH)，8.89(s，lH)，8.49(d，J = 2.4Hz，lH)，8.32 (d J= 1.6Hz, 1H) ,8.23(dd ,J = 8.8,2.0Hz,lH) ,8.13(d ,J = 8.8Hz , 1H) ,8.06(d ,J = 2.4Hz, 1H) ,4.18-4.05(m,2H) ,4.01(s,3H) ,4.00-3.93(m,lH) ,3.93-3.72(m,2H) ,3.63(dd J = 11.2,4.0Hz,lH),3.30-3.26(m,lH),3.14(s,3H),l.ll(d,J=6.4Hz,3H).
[0115] 實(shí)施例7:N-(5-(3-氰基-4-((23,61〇-2,6-甲基嗎啉基)喹啉-6-基)-2-甲氧基吡 啶-3-基）甲磺酰胺(化合物56)
[0116]
[0117] 制備方法如實(shí)施例1，其中，步驟2)將N_(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2_甲氧基吡 啶-3-基）甲烷磺酰胺』
E同樣條件下反應(yīng)。
[0118] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)59.42(s,lH),8.77(s,lH),8.45(s,1H),8.22-8.15(m, 2H) ,8.11-7.99(m,2H) ,4.00(s,3H),3.98-3.91 (m,2H),3.85(d J= 12.5Hz ,2H),3.23(t J = 11.5Hz,2H),3.13(s,3H),1.17(d ,J = 6.0Hz,6H).
[0119] 實(shí)施例8:N-(5-(3-氰基-4-(1， 1-二氧代硫代嗎啉基)喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺(化合物67)
[0120]
[0121 ] 制備方法如實(shí)施例1，其中，步驟2)將N_(5-(4-氯-3-氰基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡 啶-3-基）甲烷磺酰胺』
￡同樣條件下反應(yīng)。
[0122] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.44(s，lH)，8.88(s，lH)，8.59(d，J = 2.0Hz，lH)，8.33 (d J= 1.6Hz, 1H) ,8.20(dd ,J = 8.8,1.6Hz,lH) ,8.13(d ,J = 8.8Hz , 1H) ,8.08(d ,J = 2. OHz, lH),4.05(br s,4H),4.01(s,3H),3.56(br s,4H),3.13(s,3H).
[0123] 實(shí)施例9:N-(5-(3-氰基-4-(哌嗪-I-基)喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰 胺(化合物68)
[0124]
[0125] 按照實(shí)施例1的方法制備中間體4-(3-氰基-6-(6-甲氧基-5-(甲磺酰胺基）吡啶_ 3-基)喹啉-4-基)哌嗪-1-碳酸叔丁酯，再使用鹽酸甲醇溶液脫除Boc基團(tuán)得到化合物68。
[0126] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.63(br s，2H)，9.46(s，lH)，9.00(s，lH)，8.54(d，J= 2.2Hz,lH) ,8.27(dd ,J = 8.8,1.6Hz,lH) ,8.23(d ,J=1.6Hz,lH) ,8.17(d ,J = 8.8Hz , 1H), 8.08(d ,J = 2.2Hz,lH),4.01(br s, 7H), 3.46(br s,4H) ,3.14(s,3H).
[0127] 實(shí)施例10其余化合物制備方法如實(shí)施例1，差別在于步驟2中采用下述表1中的原 料替換硫代嗎啉。
[0128] 表1



[0133] 對(duì)比例化合物：
[0134] 對(duì)比例1化合物:N-(2-甲氧基-5-(4-嗎啉基喹啉-6-基)吡啶-3-基）甲磺酰胺
[0135]
123456 步驟1:4-(6-溴喹啉-4-基)嗎啉 2 將6_漠 _4_氣-卩奎琳（243mg，1 · Ommol)和嗎琳（523mg，6 · Ommol，6eq)于二氧六環(huán) (3mL)中的溶液在110 °C下攪拌48小時(shí)。在真空中濃縮反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(20mL) 稀釋，用乙酸乙酯（20mL X 3)萃取。用水(20mL)和食鹽水(20mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水 硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，二氯甲烷/甲醇=1 〇〇: 1)純化得到產(chǎn) 物為淡黃色油狀物(21 Img，產(chǎn)率為72 % )。 3 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)58.75(d,J = 5.0Hz,lH),8.15(d,J = 2.2Hz,lH) ,7.92(d, J = 8.8Hz,lH) ,7.84(dd,J = 8.8,2.2Hz,lH) ,7.07(d,J = 5.0Hz,lH) ,3.94-3.82(m,4H), 3.20-3.09(m,4H). 4 步驟2:N-(2-甲氧基-5-(4-嗎啉基喹啉-6-基)吡啶-3-基）甲磺酰胺 5 將6-溴-4-嗎啉基喹啉（105mg，0 · 36mmol)，N-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1, 3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基）吡啶-3-基）甲磺酰胺（14111^，0.43111111〇1，1.26卩)和2~碳酸鉀水 溶液(〇. 54mL，1.08mmol，3. Oeq)于二氧六環(huán)(4mL)中的混合物脫氣，然后加入[I，1 '-雙(二 苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀（1311^，0.018111111〇1，0.0569)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物脫氣并回充 氬氣（三個(gè)循環(huán)），然后在l〇〇°C下氬氣氣氛中攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用 (30mL)水稀釋，用乙酸乙酯（30mL X3)萃取。用食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫 酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，二氯甲烷/甲醇=60:1)純化得到產(chǎn)物為 淡黃色固體(11411^，產(chǎn)率為76.4%)。 6 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)59.42(s,lH),8.72(d,J = 4.9Hz,lH),8.45(d,J = 2.0Hz, 1H) ,8.16(dJ=1.2Hz,lH),8.10-7.98(m,3H),7.04(d,J = 5.0Hz,lH),4.00(s,3H),3.95-3.86(m,4H),3.27-3.19(m,4H),3.13(s,3H).
[0142] 對(duì)比例2化合物:N-(5-(3-(二氟甲基)-4-嗎啉基喹啉-6-基）-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺
[0143]
[0144] 步驟1:2-(((4-溴苯基)氨基)亞甲基)丙二酸二乙酯
[0145] 將 4-溴苯胺（10.328,60!11111〇1)和2-乙氧基亞甲基丙二酸二乙酯（12.968,60111111〇1， I.Oeq)的混合物在150°C下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用正己烷（IOOmL)稀釋。 抽濾收集產(chǎn)生的白色固體，用正己烷（50mL X 2)洗滌，真空中干燥得到產(chǎn)物為白色固體 (19.2g，產(chǎn)率為93.9%)，不作進(jìn)一步純化直接用于下一步。
[0146] 步驟2:6-溴-4-羥基喹啉-3-羧酸乙酯
[0147] 將攪拌中的2-(((4-溴苯基)氨基)亞甲基）丙二酸二乙酯（10g，29.2mmol)和二苯 醚（IOOmL)的混合物加熱至回流。在其加熱至回流的過(guò)程中，將氮?dú)饩徛呐葸M(jìn)入反應(yīng)混合 物在，然后在回流過(guò)程中在溶劑上方輕輕地吹氮?dú)狻⒎磻?yīng)混合物回流1小時(shí)，然后在氮?dú)?流下冷卻至室溫。用正己烷（IOOmL)稀釋反應(yīng)混合物，抽濾收集產(chǎn)生的白色固體，用正己烷 (50mLX 3)洗滌，真空中干燥，得到產(chǎn)物為白色固體(7.8g，產(chǎn)率為90%)，不作進(jìn)一步純化直 接用于下一步。
[0148] 步驟3:6_溴-4-氯喹啉-3-羧酸乙酯
[0149] 將6-溴-4-羥基喹啉-3-羧酸乙酯（IOg)于三氯氧磷（IOOmL)中的混合物在120 °C下 回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)除去三氯氧磷。將殘留物倒入冰水中，用飽和碳酸 氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6。用乙酸乙酯（IOOmL X 3)萃取產(chǎn)生的混合物。用食鹽水（IOOmL X 2) 洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙 酸乙酯=80:1)純化得到產(chǎn)物為白色固體(IOg，產(chǎn)率為94.1 % )。
[0150] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.19(s，lH)，8.53(d，J = 2.0Hz，lH)，8.14(dd，J = 8.9， 2.0Hz,lH),8.11(d ,J = 8.9Hz,lH),4.44(q ,J = 7.1Hz,2H),1.39(t ,J = 7.1Hz,3H).
[0151] 步驟4:6-溴-4-氯喹啉-3-甲醛
[0152] 在_80°C下氬氣氣氛中，向6-溴-4-氯喹啉-3-羧酸乙酯（I. 573g，5mmol)與無(wú)水二 氯甲烷（24mL)中的溶液中滴加 DIBAL-H溶液（1M甲苯溶液，8mL，8mmoI，1.6eq)。將產(chǎn)生的反 應(yīng)混合物在-80°C下攪拌1小時(shí)，然后用甲醇淬滅，用水(20mL)稀釋，用二氯甲烷(20mLX3) 萃取。用水(30mL)和食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留 物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯=15:1)純化得到產(chǎn)物為白色固體（I.075g，產(chǎn)率 為 79.5%)〇
[0153] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)5l0.54(s,lH),9.18(s,lH),8.57(d,J = 2.0Hz,lH),8.19 (dd ,J = 8.8,2.0Hz,lH),8.12(d ,J = 8.8Hz,lH).
[0154] 步驟5:6-溴-4-嗎啉基喹啉-3-甲醛
[0155] 將6-溴-4-氯喹啉-3-甲酸（324mg，I · 2mmol)和嗎啉（314mg，0 · 314mL，3 · 6mmol， 3. Oeq)于二氧六環(huán)（2.5mL)中的混合物在110°C下攪拌2.5小時(shí)。用水(30mL)稀釋反應(yīng)混合 物，用乙酸乙酯（20mL X 3)萃取。用水(30mL)和食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫 酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯=5:1)純化得到產(chǎn)物 為黃色固體(338mg，產(chǎn)率為87.7 % )。
[0156] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)5l0.42(s,lH),8.97(s,lH),8.34(d,J = 2.0Hz,lH),7.97 (dd ,J = 8.8,2.0Hz,lH),7.93(d ,J = 8.8Hz,lH),3.93-3.84(m,4H),3.68-3.57(m,4H).
[0157] 步驟6:4-(6-溴-3-(二氟甲基)喹啉-4-基)嗎啉
[0158] 在〇°C下向6-溴-4-嗎啉基喹啉-3-甲醛（321mg，I .Ommol)和乙醇（11.6yL， 0 · 2mmol，0 · 2eq)于二氯甲燒（5mL)中的溶液中加入二乙胺基三氟化硫（645mg，526yL， 4. Ommol，4eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物在0°C下攪拌0.5小時(shí)，在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混 合物倒入冰水中（20mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至7，用二氯甲燒(20mL X 3)萃取。用 水(30mL)和食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快 速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯=10:1~4:1)純化得到產(chǎn)物為黃色固體(296m g，產(chǎn)率為 86.3%)〇
[0159] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)58.98(s,lH),8.36(d,J=1.8Hz,lH),8.01(d,J = 9.0Hz, 1H) ,7.97(dd,J = 9.0,1.8Hz,lH),7.53(t,J = 54.4Hz,lH) ,3.91-3.82(m,4H),3.37-3.24 (m,4H).
[0160] 步驟7:N-(5-(3-(二氟甲基)-4-嗎啉基喹啉- 6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰 胺
[0161] 將 4-(6-溴-3-(二氟甲基)喹啉-4-基)嗎啉(8611^，0.25_〇1)，^(2-甲氧基-5-(4， 4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基）吡啶-3-基）甲磺酰胺（99mg，0.30mmol， 1.4eq)和2N碳酸鉀水溶液(0.375mL，0.75mmol，3eq)于二氧六環(huán)(4mL)中的混合物脫氣，然 后加入PdCl 2(dppf) (13mg，0.0175mmol，0.07eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物脫氣并回充氬氣(三 個(gè)循環(huán)），然后在l〇〇°C下氬氣氣氛中攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(30mL)稀 釋，用乙酸乙酯萃取(30mL X 3)。用飽和食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干 燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，DCM/CH 30H= 100 :1)純化得到產(chǎn)物為黃色固體 (95mg，產(chǎn)率為 81.8%)。
[0162] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.46(s，lH)，8.94(s，lH)，8.49(d，J = 2.4Hz，lH)，8.38 (d J= 1.2Hz, 1H) ,8.17(dd ,J = 8.8,1.6Hz,lH) ,8.14(d ,J = 8.8Hz , 1H) ,8.07(d ,J = 2.4Hz, 1H) ,7.54( t,J = 54.6Hz,lH) ,4.01 (s , 3H), 3.93-3.85(m, 4H), 3.43-3.35(m,4H), 3.13(s, 3H).
[0163] 對(duì)比例3化合物:N-(5-(3-(l，l-二氟乙基)-4-嗎啉基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲磺酰胺
[0164]
[0165] 步驟1:6-溴-3-碘喹啉-4-酚
[0166] 將6_漠卩奎琳_4_酸(2· 15g，9·6mmol)和N-鵬代丁二醜亞胺（2·6g，11 ·6mmol，I · 2eq) 于冰醋酸（25mL)中的混合物在50 °C下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水（IOOmL)中，抽濾收 集產(chǎn)生的黃色固體，用甲醇洗滌，在50°C下烘干，得淡黃色固體(2.7g，產(chǎn)率81 %)。該粗產(chǎn)物 不作進(jìn)一步純化直接用于下一步。
[0167] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)5l2.37(s,lH) ,8.57(d,J = 4.6Hz,lH) ,8.19(d,J = 2.4Hz,lH),7.84(dd ,J = 8.8,2.4Hz,lH),7.57(d ,J = 8.8Hz,lH).
[0168] 步驟2:6-溴-4-氯-3-碘喹啉
[0169] 將6-溴-3-碘喹啉-4-酚（2 · 769g，7 · 9lmmol)于三氯氧磷（25mL)中的混合物回流 2.5小時(shí)。在真空中濃縮反應(yīng)混合物，用水(IOOmL)稀釋殘留物。用飽和碳酸氫鈉水溶液中和 產(chǎn)生的混合物，用乙酸乙酯（I OOmL X 3)萃取。用水（I OOmL)和食鹽水（I OOmL)洗滌合并的有 機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯= 25: 1)純化得到產(chǎn)物為白色固體(0.93g，產(chǎn)率32 % )。
[0170] 1H NMR(400MHz，CDC13)S9.11(s，1H)，8.43(d，J = 2.0Hz，1H)，7.95((1, J = 8.8Hz， lH),7.84(dd ,J = 8.8,2.0Hz,lH).
[0171 ] 步驟3:6-漠氣乙氧基乙烯基)卩奎琳
[0172] 將6-溴-4-氯-3-碘喹啉（921mg，2.5mmol)，三丁基（1-乙氧基乙烯基）錫（948mg， 2.625mmol，I · 05eq)和三苯基神（153mg，0 · 5mm ο I，0 · 2eq)于 DMF( IOmL)中的混合物脫氣，然 后加入Pd2(dba)3(57mg，0.0625mmol，0.025eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物脫氣并回充氬氣(三個(gè) 循環(huán)），然后在60 °C下氬氣氣氛中攪拌6小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(IOOmL)稀釋， 用乙酸乙酯萃取(50mLX3)。用水(50mLX2)和飽和食鹽水(50mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú) 水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯=140:1~100:1) 純化得到產(chǎn)物為黃色固體(461mg，產(chǎn)率為59 % )。
[0173] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)58.89(s,lH),8.43(d,J=1.8Hz,lH),8.06(d,J = 8.8Hz, lH),8.03(dd ,J = 8.8,1.8Hz,lH),4.75(d ,J = 2.8Hz,lH),4.57(d ,J = 2.8Hz,lH),3.98(q J = 7.0Hz,2H),1.34(t ,J = 7.0Hz,3H).
[0174] 步驟4: ^6-溴-4-氯喹啉-3-基）乙酮
[0175] 將6-溴-4-氯-3-(1-乙氧基乙烯基）喹啉（461mg，1.47mmol)和2N HCl水溶液 (2. OmL)于THF( IOmL)中的混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將適量硅膠加到反應(yīng)混合物中，真空 中除去揮發(fā)物。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，石油醚/乙酸乙酯=10:1)純化得到產(chǎn)物為黃色 固體(30〇11^，產(chǎn)率為71.5%)。
[0176] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)59.11(s,lH),8.50(d,J=1.6Hz,lH),8.13-8.07(m,2H), 2.76(s,3H).
[0177] 步驟5:6-溴-4-氯-3-( I，1-二氟甲基)喹啉
[0178] 在0 °C 下向 1_(6-溴-4-氯喹啉-3-基）乙酮（350mg，1.23mmol)和乙醇（14.3yL， 0.246_31，0.269)于二氯甲燒(71111^)中的溶液中加入二乙胺基三氟化硫(79311^，4.92_31， 4eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物在0°C下攪拌0.5小時(shí)，在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入冰 水中（30mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至7，用二氯甲燒(20mL X 3)萃取。用水(30mL)和 食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅 膠，石油醚/乙酸乙酯=20:1)純化得到產(chǎn)物為黃色固體(156mg，產(chǎn)率為41.3% )。
[0179] 1H NMR(400MHz，DMSO-Cl6)δ9 ·07(s，1H)，8 · 50(d，J = 2 ·OHz，1H)，8 · 14-8 · 08(m，2H)， 2.18(t ,J = 19.2Hz,3H).
[0180] 步驟6:4-(6-溴-3-(1,1-二氟乙基)喹啉-4-基）嗎啉
[0?81 ] 將6-溴-4-氯-3-( 1,1-二氟甲基)喹啉（137mg，0 · 45mmo 1)于嗎啉(5mL)中的混合物 在100 °C下攪拌2小時(shí)。用水（30mL)稀釋反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯（20mL X 3)萃取。用水 (30mL)和食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速 柱色譜（硅膠，石油醚/乙酸乙酯=20 :1~10 :1)純化得到產(chǎn)物為黃色固體（48mg，產(chǎn)率為 30%)?；厥赵?2mg。
[0182] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6)59.01(s,lH),8.43(d,J = 2.0Hz,lH),8.06(d,J = 8.8Hz, 1H) ,7.99(dd,J = 8.8,2.0Hz,lH) ,3.81(t,J = 4.4Hz,4H) ,3.26(br s,4H) ,2.19(t,J = 19.2Hz,3H).
[0183] 步驟7:N-(5-(3-(l，l-二氟乙基)-4-嗎啉基喹啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基）甲 磺酰胺
[0184] 將4-(6-溴-3-(1，1-二氟乙基)喹啉-4-基）嗎啉(4511^，0.126_〇1)，^(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基）吡啶-3-基）甲磺酰胺（5〇11^， 0.15Immol，1.2eq)和2N碳酸鐘水溶液(0.189mL，0.378mmol，3eq)于二氧六環(huán)(4mL)中的混 合物脫氣，然后加入PdCl 2(dppf) (6 · 5mg，0 · 0088mmol，0 · 07eq)。將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物脫氣 并回充氬氣(三個(gè)循環(huán)），然后在l〇〇°C下氬氣氣氛中攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫， 用水(30mL)稀釋，用乙酸乙酯萃取(30mL X 3)。用飽和食鹽水(30mL)洗滌合并的有機(jī)層，用 無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。殘留物經(jīng)快速柱色譜(硅膠，DCM/CH 30H= 110:1)純化得到產(chǎn) 物為黃色固體(36mg，產(chǎn)率為59.7 % )。
[0185] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S9.47(s，lH)，8.98(s，lH)，8.50(d，J = 2.4Hz，lH)，8.44 (d J= 1.3Hz, 1H) ,8.20(d,J = 8.8Hz,lH),8.16(dd,J = 8.8,1.6Hz,lH),8.07(d,J = 2.4Hz, lH),4.01(s,3H),3.84(t ,J = 4.0Hz,4H) ,3.33(br s,4H) ,3.13(s,3H) ,2.21(t ,J = 19.2Hz, 3H).
[0186] 試驗(yàn)部分
[0187] PI103指:3-[4-(4-嗎啉基吡啶并[3'，2'，4,5]呋喃并[3,2_d]嘧啶-2-基）]苯酚。
[0188] 試驗(yàn)1化合物對(duì)激酶ΡΙ3Κα的抑制活性
[0189] 一、試驗(yàn)方法
[0190] 1.制備IX激酶緩沖液
[0191] 50mM HEPES，pH 7.5
[0192] 3mM MgCl2
[0193] ImM EGTA
[0194] IOOmM NaCl
[0195] 0.03 % CHAPS
[0196] 2mM DTT
[0197] 2.待測(cè)化合物DMSO溶液的制備及稀釋
[0198] 1)將化合物用100 % DMSO溶解，所配濃度為測(cè)試中所需最高抑制濃度的100 X。轉(zhuǎn) 移IOOyL該溶液至96孔板的一個(gè)孔內(nèi)。例如，如果所需最高抑制劑濃度是ΙμΜ，則這一步需制 備1 ΟΟμΜ的化合物DMSO溶液。
[0199] 2)對(duì)于所有的化合物，將管內(nèi)的化合物轉(zhuǎn)移至96孔儲(chǔ)備板的一個(gè)孔內(nèi)，再轉(zhuǎn)移30μ L至含有60yL 100%DMS0的下一個(gè)孔內(nèi)，以此方式對(duì)化合物進(jìn)行稀釋。
[0200] 3)在同一張96孔板上，分別加入IOOyL 100%DMS0至2個(gè)空白孔內(nèi)作為無(wú)化合物對(duì) 照和無(wú)酶對(duì)照，這張板記為源板。
[0201] 3.制備中介板
[0202] 1)從源板轉(zhuǎn)移4yL化合物至一張新的96孔板，以此作為中介板。
[0203] 2)中介板每孔內(nèi)加入96yL IX激酶緩沖液。
[0204] 3)在振蕩器上將中介板內(nèi)的化合物混合IOmin。
[0205] 4.制備測(cè)試板
[0206]從中介板的每孔中轉(zhuǎn)移2.5yL的液體至一張384孔板，并設(shè)立復(fù)孔。例如，96孔板的 Al轉(zhuǎn)移到384孔板的Al和A2孔。96孔板的A2轉(zhuǎn)移到384孔板的A3和A4,以此類推。
[0207] 5.ΡΙ3Κα 激酶反應(yīng) [0208]制備4 X激酶溶液
[0209] 1)在I X激酶緩沖液中制備ΡΙ3Κα溶液，每種試劑的濃度為測(cè)試時(shí)最終濃度的4倍。
[0210]最終濃度:ΡΙ3Κα為 1·65ηΜ。
[0211] 2)測(cè)試板每孔加2.5yL激酶溶液，不含酶的對(duì)照孔除外（加2.5yL I X激酶緩沖液 代替）。
[0212] 3)振蕩測(cè)試板。
[0213] 制備2 X底物溶液
[0214] 1)在IX激酶反應(yīng)緩沖液中制備含PIP2底物和ATP的底物溶液，每種試劑的濃度均 為測(cè)試時(shí)最終濃度的2倍。
[0215] 最終濃度:PIP2 為 50μΜ，ΑΤΡ 為 25μΜ。
[0216] 2)測(cè)試板每孔加入5yL底物溶液開(kāi)始反應(yīng)。
[0217] 3)振蕩測(cè)試板
[0218]激酶反應(yīng)
[0219] 1)測(cè)試板加蓋于室溫孵育1小時(shí)。
[0220] 6激酶檢測(cè)
[0221] 1)將Kinase-Glo試劑平衡至室溫。
[0222] 2)測(cè)試板每孔加入IOyL的Kinase-Glo試劑終止反應(yīng)。
[0223] 3)離心短暫混合，在用讀板器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度之前于振蕩器上緩慢振搖15min。
[0224] 7 讀板
[0225]在Synergy上收集數(shù)據(jù)
[0226] 8.曲線擬合
[0227] 1)從Synergy程序中拷貝RLU(相對(duì)光單位)值。
[0228] 2)將RLU值轉(zhuǎn)換成百分抑制率。
[0229] 百分抑制率= 100-(最高RLU-樣本RLU)/(最高RLU-最低RLU)*100
[0230] "最高RLU"指無(wú)酶對(duì)照孔的RLU值，"最低RLU"指DMSO對(duì)照孔的RLU值。
[0231]二、結(jié)果：
[0233]同樣的試驗(yàn)方法測(cè)得下述化合物的IC50:
[0235] 三、結(jié)論：
[0236] 實(shí)施例化合物都顯示了對(duì)激酶ΡΙ3Κα的抑制活性，尤其是化合物1~6具有很高的 活性:對(duì)激酶PI 3Κα的I C5q都在IOnM左右甚至以下。
[0237] 試驗(yàn)2化合物對(duì)激酶PI3K γ的抑制活性
[0238] -、試驗(yàn)方法
[0239] 1.制備IX激酶緩沖液
[0240] 50mM HEPES，pH 7.5
[0241] 3mM MgCl2
[0242] ImM EGTA
[0243] IOOmM NaCl
[0244] 0.03 % CHAPS
[0245] 2mM DTT
[0246] 2.制備4X激酶溶液
[0247] 1)在I X激酶緩沖液中制備PI3K γ溶液，每種試劑的濃度為測(cè)試時(shí)最終濃度的4 倍。
[0248] 終濃度:ΡΙ3Κγ 為7·6ηΜ。
[0249] 2)測(cè)試板每孔加2.5yL激酶溶液，不含酶的對(duì)照孔除外（加2.5yL I X激酶緩沖液 代替）。
[0250] 3)振蕩測(cè)試板。
[0251] 3.制備2 X底物溶液
[0252] 1)在I X激酶反應(yīng)緩沖液中制備含PIP2底物和ATP的底物溶液，每種試劑的濃度均 為測(cè)試時(shí)最終濃度的2倍。
[0253] 終濃度：PIP2 為 50μΜ，ΑΤΡ 為 25μΜ。
[0254] 2)測(cè)試板每孔加入5yL底物溶液開(kāi)始反應(yīng)。
[0255] 3)振蕩測(cè)試板
[0256] 4.激酶反應(yīng)
[0257] 測(cè)試板加蓋于室溫孵育1小時(shí)。
[0258] 5.激酶檢測(cè)
[0259] 1)將ADP-Glo試劑平衡至室溫。
[0260] 2)從384孔板轉(zhuǎn)移5yL反應(yīng)混合物至一張新的384孔板。
[0261] 3)新測(cè)試板每孔加入5yL ADP-Glo試劑終止反應(yīng)。
[0262] 4)離心短暫混合，于振蕩器上緩慢振搖，平衡40min。
[0263] 5)每孔加入IOyL激酶檢測(cè)試劑，振搖lmin，在用讀板器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度之前平衡 60min〇
[0264] 6.讀板
[0265]在Synergy上收集數(shù)據(jù)。
[0266] 7.曲線擬合
[0267] 1)從Synergy程序中拷貝RLU值。
[0268] 2)將RLU值轉(zhuǎn)換成百分抑制率。
[0269] 3)數(shù)據(jù)存于MS Excel，用Graphpad 5.0擬合曲線。
[0270] 百分抑制率= 100-(最高RLU-樣本RLU)/(最高RLU-最低RLU)*100
[0271] "最高RLU"指無(wú)酶對(duì)照孔的RLU值，"最低RLU"指DMSO對(duì)照孔的RLU值。
[0272] 二、結(jié)果： LUZ/4」 二、铦論：
[0275] 實(shí)施例化合物1、4、6都顯示了很高的對(duì)激酶PI3K γ的抑制活性，其IC5q都在IOnM以 下。
[0276] 試驗(yàn)3:化合物在MCF-7細(xì)胞上對(duì)Akt的Serine 473磷酸化的抑制
[0277] 細(xì)胞株 L0279」一、買驗(yàn)萬(wàn)法
[0280]第1天細(xì)胞鋪板
[0281] a.在顯微鏡下觀察細(xì)胞株生長(zhǎng)狀態(tài)，在細(xì)胞株生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
[0282] b.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)箱中取出，核對(duì)瓶上標(biāo)記的細(xì)胞名稱，培養(yǎng)基類型及細(xì)胞 代數(shù)。
[0283] c.棄去培養(yǎng)基，用胰酶消化，消化完后，用含血清的培養(yǎng)基中和，吹打細(xì)胞，使細(xì)胞 脫落。
[0284] d.用移液管將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘。
[0285] e.吸棄離心管中的細(xì)胞上清液。
[0286] f.向離心管中加入適當(dāng)體積的培養(yǎng)基，輕柔吹打使細(xì)胞重懸均勻。
[0287] g.使用Vi-Ce 11 XR細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。
[0288] h.將細(xì)胞懸液調(diào)至合適濃度。
[0289] i .將細(xì)胞懸液加入384孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，36μ!7孔。標(biāo)記細(xì)胞名稱，種板密度，日期 等詳細(xì)信息，將培養(yǎng)板放置于CO2培養(yǎng)箱中孵育過(guò)夜。
[0290]實(shí)驗(yàn)條件：
[0292] 第2天加化合物
[0293] 」.吸棄24以1^細(xì)胞上清，加24以1^新鮮01^1+10%?83培養(yǎng)基，37°(：，5%0)2孵育211。
[0294] k.用DMSO將待測(cè)化合物配制成8mM溶液，然后3倍梯度稀釋成9個(gè)濃度。
[0295] 1.將梯度稀釋的化合物用完全培養(yǎng)基(DMEM+10 %FBS)配成4 X溶液，每孔加12yL 化合物到384孔細(xì)胞培養(yǎng)板(3701)(化合物的排布和最終濃度如下），37°C，5%CO2孵育2h。
[0297] 注:Torin 1作為內(nèi)參化合物;DMSO的最終濃度是0.5%。
[0298] m.吸棄上清38yL，加 IOyL 2X裂解緩沖液，室溫振30min后-80°C過(guò)夜。
[0299] 第3天AlphaScreen 檢測(cè)
[0300] η·室溫解凍細(xì)胞裂解液，轉(zhuǎn)移IOyL裂解液到檢測(cè)板(Optiplate-384)。
[0301] 〇 ·加5yL Acceptor beads到檢測(cè)板，室溫孵育2小時(shí)。
[0302] p ·加5yL Donor beads到檢測(cè)板，室溫孵育2小時(shí)。
[0303] q.用EnSpire Multimode讀板器檢測(cè)，讀取結(jié)果。
[0304] r ·在Exce 1中用XL-fi t軟件計(jì)算化合物抑制的IC50值。
[0305] 二、結(jié)果：
[0307] 三、結(jié)論：
[0308]該實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞水平的活性測(cè)試，體現(xiàn)了化合物在活細(xì)胞上對(duì)PI3K的抑制活性?；?合物6相較于對(duì)比例1化合物，分子結(jié)構(gòu)中僅增加了一個(gè)氰基，但是其細(xì)胞活性卻顯著高于 后者，IC5q值相差4倍多?？梢?jiàn)，化合物6中氰基的引入，具有出乎預(yù)料的、非顯而易見(jiàn)的提升 細(xì)胞活性的效果。
[0309] 試驗(yàn)4:化合物在MCF-7細(xì)胞上對(duì)Akt的Serine 473磷酸化的抑制
[0310] -、試驗(yàn)方法:與試驗(yàn)3相同。
[0311] 二、結(jié)果：
[0313] 三、結(jié)論：
[0314] 該細(xì)胞水平的活性測(cè)試，顯示了化合物1~4在活細(xì)胞上對(duì)PI3K的抑制活性均顯著 優(yōu)于對(duì)比例1化合物，IC5q值相差3到5倍。與對(duì)比例1化合物相比，本發(fā)明化合物1~4均在稠 環(huán)上相同取代位置引入一個(gè)氰基，這些結(jié)果進(jìn)一步表明，化合物1~4中氰基的引入，具有顯 著的提升細(xì)胞活性的效果。
[0315] 試驗(yàn)5心111^6廣61〇((^)法測(cè)試化合物在1]87]\^細(xì)胞株的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
[0316] -、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0317] 在U87MG細(xì)胞中測(cè)定化合物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制活性，并每株細(xì)胞設(shè)定一個(gè)陽(yáng)性對(duì) 照、一個(gè)空白對(duì)照和一個(gè)溶媒對(duì)照。
[0318] 二、實(shí)驗(yàn)材料
[0319] 細(xì)胞系
[0321] 置于37 °C、5 % CO2、95 %濕度條件下培養(yǎng)。
[0322] 試劑和耗材
[0323] 胎牛血清FBS(GBICO)，CdiTiter-Gloi.Luminescent Cell Viability Assay (Promega)，96孔透明平底黑壁板(Corning)。
[0324]待測(cè)藥
[0326] 母液凍存于-20 °C。
[0327] 陽(yáng)性藥
[0329] 三、實(shí)驗(yàn)儀器
[0330] EnVis ion 多標(biāo)記微孔板檢測(cè)儀，PerkinElmer，2104_0010A;
[0331] CO2培養(yǎng)箱，Thermo Scientific，Model 3100Series;
[0332] 生物安全柜，Thermo Scientific，Model 1300Series A2;
[0333] 倒置顯微鏡，Olympus，CKX41 SF;
[0334] 電子天平，METTLER-TOLEDO，AL-104;
[0335] 冰箱，SIEMENS，ΚΚ25Ε76ΤΙ。
[0336] 四、對(duì)細(xì)胞增殖的抑制活性測(cè)定
[0337] 細(xì)胞培養(yǎng)和接種：
[0338] 收獲處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞并采用血小板計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。用臺(tái)盼藍(lán)排斥法 檢測(cè)細(xì)胞活力，確保各細(xì)胞系活力在96%以上。
[0339] 用培養(yǎng)液稀釋調(diào)整細(xì)胞濃度，添加90yL細(xì)胞懸液至的96孔板中使細(xì)胞密度達(dá)到指 定的濃度。
[0340] 96孔板中的細(xì)胞置于37 °C、5 % C〇2、95 %濕度條件下培養(yǎng)過(guò)夜。
[0341] 加藥：
[0342] 藥物稀釋。用相應(yīng)溶劑溶解被測(cè)化合物形成儲(chǔ)存液并進(jìn)行梯度稀釋，得到10倍溶 液;同樣制備陽(yáng)性藥的10倍溶液。
[0343] 加藥。在已接種細(xì)胞的96孔板中每孔加入IOyL藥物溶液，每個(gè)細(xì)胞濃度設(shè)置三個(gè) 復(fù)孔。被測(cè)化合物的最高濃度為50μΜ，9個(gè)濃度，3.16倍稀釋。
[0344]培養(yǎng)。將已加藥的96孔板中的細(xì)胞置于37°C、5%⑶2、95%濕度條件下繼續(xù)培養(yǎng)96 小時(shí)，分別進(jìn)行CTG分析。
[0345] 終點(diǎn)讀板：
[0346] 融化CTG試劑并平衡細(xì)胞板至室溫30分鐘。
[0347] 每孔加入等體積的CTG溶液。
[0348] 在定軌搖床上振動(dòng)2分鐘使細(xì)胞裂解。
[0349] 將細(xì)胞板放置于室溫10分鐘以穩(wěn)定冷光信號(hào)。
[0350] 用EnVision讀取冷光值。
[0351] 數(shù)據(jù)處理
[0352]使用GraphPad Prism 5.0軟件分析數(shù)據(jù)，利用非線性S曲線回歸來(lái)擬合數(shù)據(jù)得出 劑量-效應(yīng)曲線，并由此計(jì)算IC5Q值。
[0353 ]細(xì)胞存活率（％) = ( Lu_sr-L_舖卿,?) / (Lu_j_rLum賴|_照）X 100 %
[0354] Lum是指:冷光值。
[0355] 五、結(jié)果：
[0357] 為另一次以相同方法獨(dú)立進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0358]六、結(jié)論：
[0359]該實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞水平的增殖抑制測(cè)試，體現(xiàn)了化合物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制活性。與化 合物6相比，對(duì)比例1化合物稠環(huán)上沒(méi)有氰基，對(duì)比例2化合物和對(duì)比例3化合物在相同取代 位置用其他基團(tuán)替代氰基。試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物6對(duì)U87MG細(xì)胞的增殖抑制活性顯著高于 所有對(duì)比例化合物，IC 5q值均相差在3倍以上?？梢?jiàn)，化合物6中氰基的引入，具有出乎預(yù)料 的、非顯而易見(jiàn)的提升細(xì)胞活性的效果。
[0360]試驗(yàn)eCellTiter-Glo法測(cè)試化合物對(duì)5株人腫瘤細(xì)胞株增殖活性抑制的研究 [0361 ] -、實(shí)驗(yàn)方法:與試驗(yàn)5相同。
[0363]二、結(jié)果：
[0365] 三、結(jié)論：
[0366] 該實(shí)驗(yàn)比較了化合物6與對(duì)比例1化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制活性?；?物6相較于對(duì)比例1化合物，分子結(jié)構(gòu)中僅增加了一個(gè)氰基，但是其細(xì)胞增殖抑制活性卻顯 著高于后者，二者在了470、1^^7^2780、％1-!11975^549等多種細(xì)胞株上的1(： 5()值均相差約3 ~6倍。可見(jiàn)，化合物6中氰基的引入，具有出乎預(yù)料的、非顯而易見(jiàn)的提升細(xì)胞活性的效果。
[0367] 試驗(yàn)7CellTiter-Glo法測(cè)試化合物對(duì)5株人腫瘤細(xì)胞株增殖活性抑制的研究
[0368] 一、實(shí)驗(yàn)方法:與試驗(yàn)5相同。
LUJ/Ζ」 二、珀化：該頭版測(cè)訊」億甘徹個(gè)丨η」^熘瑚胭休的項(xiàng)甩仰明沾怔，珀米衣明，億 合物6在^'20、8了474、31(-0￥-3、％1-!1460、％1-!11650等多種腫瘤細(xì)胞株上都表現(xiàn)出了很好 的增殖抑制活性，IC5Q值均在ΙμΜ以下。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種由以下通式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中，X表示0、S、NR、S〇2 或NH2C1，R選自 Η、Ci-6 的烷基，Ri、R2、R3、R4、R5、R6、R7、Rs獨(dú)立地選 自Η、&-6的烷基、或具有OH取代基的6的烷基。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，RSCh的烷基，R^R^Rs、 R4、Rs、R6、R7、Rs為獨(dú)立地選自Η、&-4的烷基、或具有OH取代基的4的烷基。3. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，R為甲基或乙基， R4、R5、R6、R7、R8為甲基或乙基。4. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，所述化合物選自以下化合 物或其藥學(xué)上可接受的鹽：5. -種藥物組合物，所述藥物組合物包含如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物或其 藥學(xué)上可接受的鹽。6. 如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或如權(quán)利要求5所述 的藥物組合物在制備用于抑制磷脂酰肌醇3-激酶的藥物中的應(yīng)用。7. 如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中所述的藥物為抗腫瘤藥物。8. 如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中，所述的腫瘤選自：腦癌、頭頸癌、食管癌、肺癌、肝癌、 胃癌、腎癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌、皮膚癌、白血病、骨髓 異常增生綜合癥、肉瘤、骨肉瘤或橫紋肌瘤。9. 如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中所述的藥物為抗炎藥物或治療自身免疫性疾病的藥 物。10. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中所述的抗炎藥物是用于治療慢性阻塞性肺病或哮喘 的藥物。11. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中自身免疫性疾病選自風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀肩病或系統(tǒng) 性紅斑狼瘡。12. -種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的式（I)的化合物的制備方法，所述方法包括使式 (IIΓ )的化合物與式(IV)的化合物反應(yīng)，得到式(I)的化合物的步驟：其中乂、1?1、1?2、1?3、1?4、1^、1?6、1?7和1?8如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所定義。13. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述方法包括使式（II)的化合物與式（III)的化 合物反應(yīng)得到式(IIΓ )的化合物的步驟，14. 一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的式（I)的化合物的制備方法，所述方法包括使式 (IV '）的化合物與式(III)的化合物反應(yīng)，得到式(I)的化合物的步驟：其中乂、1?1、1?2、1?3、1?4、1^、1?6、1?7和1?8如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所定義。15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述方法包括使式(II)的化合物與式（IV)的化合 物反應(yīng)得到式(IV'）的化合物的步驟，16. -種式(IIΓ )的化合物或式(IV'）的化合物，其中乂、1?1、1?2、1?3、1?4、1^、1?6、1?7和1?8如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所定義。
【文檔編號(hào)】A61P17/06GK105859684SQ201610235304
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月15日
【發(fā)明人】龍凱, 廖立東, 王萬(wàn)
【申請(qǐng)人】四川賽諾唯新生物技術(shù)有限公司