胺晶體;其中，乙醇將硫酸胍基丁胺粗晶體清洗干凈即可，其用量可根據(jù)具體情況進行調(diào)整。
[0046]或者純化步驟如下:
[0047]I)乙腈、四氫呋喃、甲醇按體積比為2.5?3.5:3.5?5:1混合均勻，得到混合溶劑；
[0048]2)將硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物溶于步驟I)中的混合溶劑中，其中，硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物與混合溶劑的質(zhì)量比為1:8?13，抽濾，得到硫酸胍基丁胺粗晶體；
[0049]3)將步驟2)所得的硫酸胍基丁胺粗晶體用乙醇洗滌，過濾并干燥后，得到純化的硫酸胍基丁胺晶體。其中，乙醇將硫酸胍基丁胺粗晶體清洗干凈即可，其用量可根據(jù)具體情況進行調(diào)整。
[0050]優(yōu)選地，將乙腈、四氫呋喃、甲醇按體積比為3: 4: I混合均勻，得到混合溶劑。
[0051 ] 實施例一
[0052]以左旋精氨酸作為底物，以精氨酸脫羧酶作為生物轉(zhuǎn)化催化劑，以磷酸吡哆醛作為輔酶，進行脫羧反應，生成胍基丁胺粗產(chǎn)物，將胍基丁胺粗產(chǎn)物用稀硫酸酸化，得到硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物。精氨酸脫羧酶與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1:40;磷酸吡哆醛與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1: 1000。控制反應體系的溫度為35 °C ；控制反應體系的pH值為6.5。
[0053]精氨酸脫羧酶為經(jīng)過固定化處理后的精氨酸脫羧酶，精氨酸脫羧酶的固定化處理包括如下步驟:
[0054]I)破碎含精氨酸脫羧酶的工程菌細胞，將工程菌細胞離心后，收集精氨酸脫羧酶液；
[0055]2)將步驟I)所收集的精氨酸脫羧酶液、添加劑和固定化載體按質(zhì)量比為1:0.7:11加入PH值為7的磷酸鹽緩沖溶液中，在30°C下恒溫攪拌2.5h，離心后收集固體，得到固定酶載體;其中，添加劑包括硫酸鐵和硫酸鎂，硫酸鐵和硫酸鎂的質(zhì)量比為1:2，硫酸鐵和硫酸鎂的質(zhì)量比為1:2更能促進精氨酸脫羧酶的活性；固定化載體由藻土、石英砂、氧化鋁和明膠組成，藻土、石英砂、氧化鋁和明膠的質(zhì)量比為4:1:1:3，藻土、石英砂、氧化鋁和明膠的質(zhì)量比為4:1: 1:3能夠更高的提升精氨酸脫羧酶的活性，更利于精氨酸脫羧酶的多次循環(huán)利用；
[0056]3)將步驟2)中得到的固定酶載體用乙醇洗滌3次，干燥，即得到固定化處理后的精氨酸脫羧酶。
[0057]當脫羧反應進行到第2h時，向脫羧反應補加左旋精氨酸，補加的左旋精氨酸的質(zhì)量為初始所加的左旋精氨酸的質(zhì)量的一半。
[0058]具體地，采用濃度為0.lmol/L的硫酸對胍基丁胺粗產(chǎn)物進行酸化，使酸化后的胍基丁胺粗產(chǎn)物，即硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物的PH值為4。
[0059]對硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物進行純化，純化步驟如下:
[0060]I)將乙腈、四氫呋喃、甲醇按體積比為3:4:1混合均勻，得到混合溶劑；
[0061]2)將硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物溶于步驟I)中的混合溶劑中，其中，硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物與混合溶劑的質(zhì)量比為1:10，抽濾，得到硫酸胍基丁胺粗晶體；
[0062]3)將步驟2)所得的硫酸胍基丁胺粗晶體用乙醇洗滌，過濾并干燥后，得到純化的硫酸胍基丁胺晶體。
[0063]將純化的硫酸胍基丁胺晶體進行液相色譜實驗，所得實驗結(jié)果如圖1所示，在該圖中，于15.579min處有吸收峰。本實施例提供的底物左旋精氨酸的轉(zhuǎn)化率為97.5%，所制備純化的硫酸胍基丁胺晶體的純度達到99.4%。
[0064]將精氨酸脫羧酶液重復利用10次并得到其比活力數(shù)據(jù)圖，如圖2所示，固定后，精氨酸脫羧酶重復利用10次后反應仍具有酶活，并且在第10次使用時，其酶的比活力大于30U/mg。這使得昂貴的精氨酸脫羧酶可以循環(huán)利用，極大地節(jié)省生產(chǎn)成本。
[0065]實施例二
[0066]以左旋精氨酸作為底物，以精氨酸脫羧酶作為生物轉(zhuǎn)化催化劑，以磷酸吡哆醛作為輔酶，進行脫羧反應，生成胍基丁胺粗產(chǎn)物，將胍基丁胺粗產(chǎn)物用稀硫酸酸化，得到硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物。精氨酸脫羧酶與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1: 20;磷酸吡哆醛與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1:800?？刂品磻w系的溫度為30°C ;控制反應體系的pH值為6。
[0067]精氨酸脫羧酶為經(jīng)過固定化處理后的精氨酸脫羧酶，精氨酸脫羧酶的固定化處理包括如下步驟:
[0068]I)破碎含精氨酸脫羧酶的工程菌細胞，將工程菌細胞離心后，收集精氨酸脫羧酶液；
[0069]2)將步驟I)所收集的精氨酸脫羧酶液、添加劑和固定化載體按質(zhì)量比為1:0.6:13加入PH值為6的磷酸鹽緩沖溶液中，在25°C下恒溫攪拌2h，離心后收集固體，得到固定酶載體;其中，添加劑包括硫酸鐵和硫酸鎂，硫酸鐵和硫酸鎂的質(zhì)量比為1:1;固定化載體由藻土、石英砂、氧化鋁和明膠組成，藻土、石英砂、氧化鋁和明膠的質(zhì)量比為2:1:2:4;
[0070]3)將步驟2)中得到的固定酶載體用乙醇洗滌I次，干燥，即得到固定化處理后的精氨酸脫羧酶。
[0071]當脫羧反應進行到第Ih時，向脫羧反應補加左旋精氨酸，補加的左旋精氨酸的質(zhì)量為初始所加的左旋精氨酸的質(zhì)量的3/4。
[0072]具體地，采用濃度為0.lmol/L的硫酸對胍基丁胺粗產(chǎn)物進行酸化，使所得硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物的PH值為4。
[0073]對硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物進行純化，純化步驟如下:
[0074]I)向硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物中加入活性炭，在40°C下放置2h，再用孔徑為0.45um的過濾膜抽濾，將抽濾后所得的溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除雜質(zhì)，得到硫酸胍基丁胺粗晶體;其中，過濾膜可以為硅藻土0.45um膜。其中，活性炭的加入量可使黃色的硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物吸附至無色即可。同時可利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術和高效液相色譜法進行監(jiān)控，直至底物完全利用。
[0075]2)將步驟I)所得的硫酸胍基丁胺粗晶體用乙醇洗滌，過濾并干燥后，得到純化的硫酸胍基丁胺晶體。
[0076]本實施例提供的底物左旋精氨酸的轉(zhuǎn)化率為96.8%，所制備純化的硫酸胍基丁胺晶體的純度達到99.1%。
[0077]實施例三
[0078]以左旋精氨酸作為底物，以精氨酸脫羧酶作為生物轉(zhuǎn)化催化劑，以磷酸吡哆醛作為輔酶，進行脫羧反應，生成胍基丁胺粗產(chǎn)物，將胍基丁胺粗產(chǎn)物用稀硫酸酸化，得到硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物。精氨酸脫羧酶與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1: 30;磷酸吡哆醛與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1:500?？刂品磻w系的溫度為42°C ;控制反應體系的pH值為7。
[0079]精氨酸脫羧酶為經(jīng)過固定化處理后的精氨酸脫羧酶，精氨酸脫羧酶的固定化處理包括如下步驟:
[0080]I)破碎含精氨酸脫羧酶的工程菌細胞，將工程菌細胞離心后，收集精氨酸脫羧酶液；
[0081]2)將步驟I)所收集的精氨酸脫羧酶液、添加劑和固定化載體按質(zhì)量比為1:0.8:10加入PH值為6.5的磷酸鹽緩沖溶液中，在35°C下恒溫攪拌3h，離心后收集固體，得到固定酶載體;其中，添加劑包括硫酸鐵和硫酸鎂，硫酸鐵和硫酸鎂的質(zhì)量比為1: 1.5;固定化載體由藻土、氧化鋁和明膠組成，藻土、氧化鋁和明膠的質(zhì)量比為2:1:1;
[0082]3)將步驟2)中得到的固定酶載體用乙醇洗滌2次，干燥，即得到固定化處理后的精氨酸脫羧酶。
[0083]當脫羧反應進行到第1.5h時，向脫羧反應補加左旋精氨酸，補加的左旋精氨酸的質(zhì)量為初始所加的左旋精氨酸的質(zhì)量的2/3。
[0084]具體地，采用濃度為0.lmol/L的硫酸對胍基丁胺粗產(chǎn)物進行酸化，使酸化后的胍基丁胺粗產(chǎn)物，即硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物的PH值為5。
[0085]對硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物進行純化，純化步驟如下:
[0086]I)將乙腈、四氫呋喃、甲醇按體積比為2.5:3.5:1混合均勻，得到混合溶劑；
[0087]2)將硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物溶于步驟I)中的混合溶劑中，其中，硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物與混合溶劑的質(zhì)量比為I: 8，抽濾，得到硫酸胍基丁胺粗晶體；
[0088]3)將步驟2)所得的硫酸胍基丁胺粗晶體用乙醇洗滌，過濾并干燥后，得到純化的硫酸胍基丁胺晶體。
[0089]底物左旋精氨酸的轉(zhuǎn)化率為97.1%，所制備純化的硫酸胍基丁胺晶體的純度達到99.2%。
[0090]實施例四
[0091]以左旋精氨酸作為底物，以精氨酸脫羧酶作為生物轉(zhuǎn)化催化劑，以磷酸吡哆醛作為輔酶，進行脫羧反應，生成胍基丁胺粗產(chǎn)物，將胍基丁胺粗產(chǎn)物用稀硫酸酸化，得到硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物。精氨酸脫羧酶與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1: 50;磷酸吡哆醛與左旋精氨酸的質(zhì)量比為1:600?？刂品磻w系的溫度為25°C;控制反應體系的pH值為7.5。
[0092]精氨酸脫羧酶為經(jīng)過固定化處理后的精氨酸脫羧酶，精氨酸脫羧酶的固定化處理包括如下步驟:
[0093]I)破碎含精氨酸脫羧酶的工程菌細胞，將工程菌細胞離心后，收集精氨酸脫羧酶液；
[0094]2)將步驟I)所收集的精氨酸脫羧酶液、添加劑和固定化載體按質(zhì)量比為1:0.7:12加入PH值為7.5的磷酸鹽緩沖溶液中，在28°C下恒溫攪拌2.Sh，離心后收集固體，得到固定酶載體;其中，添加劑為硫酸鐵;固定化載體為氧化鋁；
[0095]3)將步驟2)中得到的固定酶載體用乙醇洗滌3次，干燥，即得到固定化處理后的精氨酸脫羧酶。
[0096]當脫羧反應進行到第2.5h時，向脫羧反應補加左旋精氨酸，補加的左旋精氨酸的質(zhì)量為初始所加的左旋精氨酸的質(zhì)量的I /4。
[0097]具體地，采用濃度為0.lmol/L的硫酸對胍基丁胺粗產(chǎn)物進行酸化，使酸化后的胍基丁胺粗產(chǎn)物，即硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物的PH值為4。
[0098]對硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物進行純化，純化步驟如下:
[0099]I)將乙腈、四氫呋喃、甲醇按體積比為3.5:5:1混合均勻，得到混合溶劑；
[0100]2)將硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物溶于步驟I)中的混合溶劑中，其中，硫酸胍基丁胺粗產(chǎn)物與混合溶劑的質(zhì)量比為1:13，抽濾，得到硫酸胍基丁胺粗晶體；
[0101]3)將步驟2)所得的硫酸胍基丁胺粗晶體用乙醇洗滌，過濾并干燥后，得到純化的硫酸胍基丁胺晶體。
[0102]本