白腺，酵母抽提物，麥芽提取物，肉類抽提物，酪蛋氨基酸， 玉米漿，大豆蛋白質(zhì)，脫脂大豆和棉子粉，有機氮源如尿素，和無機氮源如硝酸鋼，硝酸錠和 硫酸錠。特別是，從大豆獲得的氮源，特別是大豆，脫脂大豆，大豆薄片，食用大豆蛋白質(zhì)， bean-curd re化se，豆?jié){和大豆粉可W被作為氮源。特別是，熱變性脫脂大豆，更優(yōu)選在大 約70-90°C熱處理脫脂大豆和除去可溶于乙醇組分而產(chǎn)生的產(chǎn)物可W單獨使用或與它們中 兩個或更多組合或它們與上述氮源組合使用。
[0060] 此外，如果需要，憐酸離子，鐘離子，鋼離子，儀離子，巧離子和，W及金屬離子如 鐵，銅，鋒，儘，儀和鉆離子，和維生素也可W用作次要的營養(yǎng)。
[0061] 運些培養(yǎng)基組分的濃度不特別限制，只要微生物的生長不被抑制。在實踐中，添加 的碳源總量通常按重量計算是0.1-40%，優(yōu)選按重量計算1-25%，和添加的氮源總量優(yōu)選 按重量計算是2-15 %，更優(yōu)選按重量計算2-10 %。更優(yōu)選，添加的碳源初始量通常按重量計 算是1-5 %，和添加的氮源初始量按重量計算是3-8%，和，在培養(yǎng)過程中，可W供給碳源和 氮源，更優(yōu)選可W僅僅供給碳源。
[0062] 為了增加不飽和脂肪酸的產(chǎn)量，例如，可W單獨或聯(lián)合使用碳氨化合物如十六燒 或十八燒;脂肪酸或其鹽如油酸或亞油酸，或脂肪酸醋，例如乙醋，脂肪酸甘油醋，或失水山 梨糖醇脂肪酸醋;或脂肪或或油如橄攬油，大豆油，油菜巧油，棉巧油或棟桐油作為不飽和 脂肪酸的前體。添加的底物量是0.001-10%，優(yōu)選0.5-10%，根據(jù)培養(yǎng)基而定。也可W使用 運些底物作為唯一碳源進行培養(yǎng)。
[0063] 產(chǎn)生高不飽和脂肪酸的微生物的培養(yǎng)溫度根據(jù)使用的微生物而變化。然而，培養(yǎng) 溫度可W是5-40°C，優(yōu)選20-30°C。也可W使用一種方法，其中在20-30°C進行培養(yǎng)使細胞生 長和接著繼續(xù)在5-2(TC培養(yǎng)而產(chǎn)生不飽和脂肪酸。也可W通過運個溫度控制增加所產(chǎn)生的 脂肪酸中的高不飽和脂肪酸的比例。通過通風(fēng)攬拌培養(yǎng)，振蕩培養(yǎng)，固體培養(yǎng)或固定液培養(yǎng) 進行種子培養(yǎng)，和通過通風(fēng)攬拌培養(yǎng)進行主要培養(yǎng)。主要培養(yǎng)開始時（種子培養(yǎng)溶液接種 時）的培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至抑5至7，優(yōu)選5.5至6.5。主要培養(yǎng)通常進行2至30天，優(yōu)選5至20天，更 優(yōu)選5至15天。
[0064] 根據(jù)本發(fā)明的油脂(粗制油)是從培養(yǎng)產(chǎn)物獲得的微生物油脂，該培養(yǎng)產(chǎn)物是通過 培養(yǎng)能夠產(chǎn)生包含高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘油Ξ醋）的微生物而產(chǎn)生的， 并且本發(fā)明最具特征性的特征是通過在裝備著d/D = 0.34至0.6的攬拌葉輪的培養(yǎng)箱中進 行主要培養(yǎng)，或當(dāng)使用d/D =小于0.34的培養(yǎng)箱時，通過在不超過5的pH值滅菌含氮源的培 養(yǎng)基中進行主要培養(yǎng)降低了粗制油的不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量。因此，本發(fā)明開 發(fā)了一種方法，通過使用能夠產(chǎn)生包含高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘油Ξ醋） 的微生物，它可W降低粗制油中不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量。
[0065] 在根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)方法中，最具特征性的特征是通過在d/D(攬拌葉輪直徑（= d)與培養(yǎng)箱內(nèi)徑（=D)的比率）=0.30至0.6的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，優(yōu)選d/D = 0.34至0.55,更優(yōu) 選d/D = 0.37至0.55，最優(yōu)選d/D = 0.42至0.55，粗制油中不可皂化物含量和/或醋型醬醇含 量降低。為了獲得d/D比率引起的更好效果，期望使用體積至少Im3的培養(yǎng)箱，優(yōu)選至少5m3， 更優(yōu)選至少10m3。至于攬拌葉輪，包括滿輪葉片的攬拌葉輪可W在一個階段使用或無特殊 限制在許多階段使用。
[0066] 當(dāng)在培養(yǎng)基滅菌W后進行培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)時，應(yīng)該無菌小屯、地實施調(diào)節(jié)步驟，W 便不引起不需要的微生物污染。因此，抑調(diào)節(jié)通常在培養(yǎng)基滅菌之前進行。例如，當(dāng)培養(yǎng)開 始時調(diào)節(jié)時未引起任何pH改變的培養(yǎng)基被調(diào)節(jié)至PH6.0時，滅菌前培養(yǎng)基W非無菌方式調(diào) 節(jié)至PH6.0消除了滅菌后無菌pH調(diào)節(jié)。為了降低甚至在d/D =小于0.34的培養(yǎng)箱中醋型醬 醇，本發(fā)明人針對并進行了滅菌步驟中pH條件對培養(yǎng)生產(chǎn)量和產(chǎn)物組成的影響的研究。結(jié) 果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，優(yōu)選培養(yǎng)基滅菌前調(diào)節(jié)pH不超過5,滅菌后pH再調(diào)節(jié)至適于開始培養(yǎng)的 值。
[0067] 特別地，含有培養(yǎng)基氮源的溶液抑調(diào)節(jié)為4至5，優(yōu)選抑4.2至4.7，隨后滅菌。照此 滅菌的培養(yǎng)基或任選添加另一待滅菌培養(yǎng)基后用于制備培養(yǎng)起始培養(yǎng)基，然后pH調(diào)節(jié)為5 至7,優(yōu)選pH 5.5至6.5。種子培養(yǎng)溶液接種到該培養(yǎng)基開始主要培養(yǎng)?？捎糜跍缇罢{(diào)節(jié) 含有氮源溶液的pH的P的周節(jié)劑包括但不特別限于硫酸，鹽酸，憐酸，硝酸和碳酸或其鹽，單 獨使用或它們中的兩個或更多組合使用。滅菌后培養(yǎng)基的pH再調(diào)節(jié)劑包括但不特別限于氨 氧化物化合物如氨氧化鋼和氨氧化鐘和氨和錠鹽，單獨使用或它們中的兩個或更多組合使 用。
[0068] 已知屬于被抱霉屬的被抱霉亞屬的微生物能夠產(chǎn)生包含花生四締酸作為主要構(gòu) 成脂肪酸的油脂(甘油Ξ醋）。本發(fā)明人通過對上述菌株進行突變處理獲得了能夠產(chǎn)生包含 二高-丫-亞麻酸作為主要構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘油Ξ醋）的微生物（日本未審查專利公開號 化okai)5(1993)-91887)和能夠產(chǎn)生包含ω 9高不飽和脂肪酸作為主要構(gòu)成脂肪酸(甘油Ξ 醋）的油脂的微生物（日本未審查專利公開號化〇kai)5(1993)-91888)。
[0069] 此外，本發(fā)明人也獲得了耐高濃度碳源的微生物(W098/39468)。上述微生物是屬 于被抱霉屬的被抱霉屬亞屬的微生物，通過本發(fā)明的培養(yǎng)方法可W容易地降低粗制油的不 可皂化物含量和/或醋型醬醇含量，特別是通過在裝備著d/D = 0.34至0.6的攬拌葉輪的培 養(yǎng)箱中進行主要培養(yǎng)，或當(dāng)使用d/D =小于0. %的培養(yǎng)箱時，通過在不超過5的pH值和2- 15%的培養(yǎng)基氮源濃度下，滅菌含氮源的培養(yǎng)基中進行主要培養(yǎng)。
[0070] 然而本發(fā)明中使用的微生物不限于屬于被抱霉屬的被抱霉屬亞屬的那些，通過將 根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)方法應(yīng)用于能夠產(chǎn)生包含高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘油 Ξ醋）的微生物，具體地說通過在裝備著d/D = 0.34至0.6的攬拌葉輪的培養(yǎng)箱中進行主要 培養(yǎng)，或當(dāng)使用d/D =小于0.34的培養(yǎng)箱時，通過在含氮源的培養(yǎng)基中進行主要培養(yǎng)，該氮 源培養(yǎng)基在不超過5的pH值滅菌，并具有2-15 %的培養(yǎng)基氮源濃度，可W產(chǎn)生不可皂化物含 量和/或醋型醬醇含量降低的預(yù)期粗制油。
[0071] 可用于從微生物獲得粗制油的方法中，培養(yǎng)完成后，照運樣的培養(yǎng)液或如滅菌，濃 縮或酸化的處理后，接受常規(guī)的固液分離方法，如自然沉淀，離屯、和/或過濾，收集培養(yǎng)細 胞，所述微生物蓄積了不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量降低并且包含高不飽和脂肪酸 作為構(gòu)成脂肪酸的油脂，它是通過在裝備著d/D = 0.34至0.6的攬拌葉輪的培養(yǎng)箱中進行主 要培養(yǎng)，或當(dāng)使用d/D =小于0.34的培養(yǎng)箱時，通過在不超過5的pH值滅菌，并含有2-15 %的 培養(yǎng)基氮源濃度的含氮源的培養(yǎng)基中進行主要培養(yǎng)產(chǎn)生的。
[0072] 從輔助固液分離的觀點來看可W添加凝結(jié)劑或過濾助劑。凝結(jié)劑包括例如氯化 侶，氯化巧，褐藻膠和殼聚糖。過濾助劑包括例如娃藻±。優(yōu)選培養(yǎng)細胞用水洗，壓碎和干 燥?？蒞如冷凍干燥，風(fēng)干或流化床干燥進行干燥。從干燥細胞獲得粗制油的方法可W是用 有機溶劑提取或壓棒。然而優(yōu)選在氮氣流下用有機溶劑提取。
[0073] 有機溶劑包括乙醇，己燒，甲醇，乙醇，氯仿，二氯甲燒，石油酸和丙酬。也可W使用 甲醇和石油酸交互提取W及用氯仿-甲醇-水單相溶劑提取。然而，獲得粗制油的抽提方法 不限于上述方法，并且可W使用可W有效地提取細胞內(nèi)蓄積的油脂的任何方法。例如，超臨 界提取可W用作有效方法。
[0074] 通過在降低的壓力或其它條件下，從用有機溶劑或超臨界流體提取獲得的提取物 中除去有機溶劑或超臨界流體成分可W獲得目標(biāo)粗制油。此外，可供選擇地，可W使用濕細 胞進行提取。在運種情況下，使用與水相容的溶劑，如甲醇，乙醇和丙酬，或與水相容并由上 述溶劑和水和/或其它溶劑組成的混合溶劑。其它步驟與上面描述的那些相同。
[0075] 根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量降低并且包含高不飽和脂 肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的粗制油可W與動物食品混合直接使用。然而當(dāng)考慮到應(yīng)用于食品 時，在使用之前，優(yōu)選粗制油接受常規(guī)油脂精煉過程。運里可用的油脂精煉過程包括常規(guī)過 程如脫膠，脫氧，除臭，脫色，柱處理，分子蒸饋和越冬(wintering)。精煉油脂，因此，其中不 可皂化物含量和/或醋型醬醇含量已經(jīng)空前降低的精煉油脂可W通過使常規(guī)油脂精煉方法 難W達到的醋型醬醇含量降低的根據(jù)本發(fā)明的粗制油接受油脂精煉方法獲得。
[0076] 使根據(jù)本發(fā)明和醋型醬醇含量低的粗制油接受油脂精煉過程也可W降低提煉過 程中的加工量。具體地說，例如，甚至在提煉過程處理時間減少和能源消耗減少后仍可W提 供不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量等于現(xiàn)有技術(shù)的精煉油脂。此外，使用與現(xiàn)有技術(shù)相 同的處理時間和能源消耗可W提供不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量低于現(xiàn)有技術(shù)的精 煉油脂。
[0077] 根據(jù)本發(fā)明的精煉油脂（甘油Ξ醋）可用于無限的應(yīng)用范圍，例如，用于食品、飲 料、化妝品和藥物制劑的原料和添加劑，并且使用的目的和量沒有限制。
[0078] 例如，可W使用精煉油脂的食物組合物包括普通食品、W及功能食品、營養(yǎng)補充 物、早產(chǎn)兒的配制品、足月嬰兒的配制品、嬰兒配制品、嬰兒食品、預(yù)產(chǎn)和哺乳母親的食品或 老年人食品。
[0079] 含有油脂的食品實例包括：固有含有油脂的天然食物，如肉、魚或堅果;在烹調(diào)的 時候添加油脂的食品，如湯;使用油脂作為載熱體的食品，如油炸圈餅;油脂食品如黃油;在 加工的時候添加油脂的加工食品，如小甜點或餅干;或在完成加工的時候噴霧或涂布油脂 的食品，如初性餅干。此外，精煉油脂可W添加到不含脂肪和油的農(nóng)業(yè)食品、發(fā)酵食品、家畜 食品、海產(chǎn)品或飲料中。精煉油脂可W用于功能食品和藥物制劑形式，例如可W用于加工形 式如腸營養(yǎng)素，粉劑，粒劑，錠劑，內(nèi)部使用的液體，懸浮液，乳劑和糖漿。 實施例
[0080] 參考下列實施例更詳細地描述本發(fā)明。然而，應(yīng)該指出本發(fā)明不僅僅限于運些實 施例。
[0081] 實施例1:花生四締酸的制備，d/D = 0.34,培養(yǎng)基中大豆粉的濃度=6%
[0082] 提供高山被抱霉(CBS 754.68)作為產(chǎn)生花生四締酸的真菌。高山被抱霉的標(biāo)準(zhǔn)菌 株接種到培養(yǎng)基（1%酵母抽提物，2%葡萄糖，pH 6.3)中。在1(Κ)巧m往復(fù)搖動和28°C條件下 開始種子培養(yǎng)(第一階段），種子培養(yǎng)延續(xù)3天。接下來，在50k體積通風(fēng)攬拌培養(yǎng)箱中制備 3化培養(yǎng)基（1%酵母抽提物，2%葡萄糖，0.1%豆油，pH 6.3)。種子培養(yǎng)(第一階段)溶液接 種到該培養(yǎng)基。在2(K)rpm攬動速度，溫度28°C，150kPa箱內(nèi)部壓力條件下開始種子培養(yǎng)(第 二階段），種子培養(yǎng)延續(xù)2天。
[0083] 接下來，制備45001培養(yǎng)基（培養(yǎng)基4:大豆粉33化旨，1(出？〇416.84旨，]\^(：12.6出0 2.84旨，〔3(：12*2此0 2.81^，豆油5.化旨）。對于條件（1-1)培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至抑6.3和對于條件 (1-2)調(diào)節(jié)至抑4.5。在12rC條件下對對于條件（1-1)的培養(yǎng)基和對于條件（1-2)的培養(yǎng)基 滅菌20分鐘。在140°C條件下對1000L培養(yǎng)基(培養(yǎng)基B: