026] kLaa(Pg/V 產(chǎn) 4Vs°'5 妒'5 (1)
[0027] 根據(jù)0.2至60m3的培養(yǎng)箱測(cè)定值，F(xiàn)址uda等人報(bào)道了比公式（1)提供了更好相關(guān)性 的公式（2) (F^ikuda等人，化Ickokogaku Kaishi，46卷，829頁（1968))。
[002引 kLaa{(Pg/V 產(chǎn) 4Vs°'5 妒'5}1'4 (2)
[0029] Matsushima等人證實(shí)了公式（1)和(2)的通用性并報(bào)道了通過概括為公式(3)表示 的，公式（1)和（2)可W更廣泛應(yīng)用（Matsushima等人化kkokogaku Kaishi，50卷，105頁 (1972))。
[0030] kLaa{(Pg/V 產(chǎn) 4ys°'5 妒.5}。（3)
[0031] 由運(yùn)些相關(guān)公式，人們認(rèn)為在同一攬動(dòng)功率消耗(Pg/V)和同一通風(fēng)線速度(Vs)的 條件下，較高攬動(dòng)速度(N)提供較高的容量氧傳質(zhì)系數(shù)化La)。
[0032] 每單位液體量的攬動(dòng)需要功率由公式(4)表示。
[0033] Pg/V = p化 ^clVV (4)
[0034] 其中P代表液體密度，化代表功率數(shù)和d代表攬拌葉輪的直徑。
[0035] 為了提供給定工作量下，就是說同一攬動(dòng)需要功率下，較高的攬動(dòng)速度，考慮使用 較小功率數(shù)(化)和較小攬拌葉輪直徑(d)的培養(yǎng)箱是有利的。
[0036] Taguchi等人，（Biseibutsugaku Kisokoza 7-Biseibutu Baiyo Kogaku- (Introduction to Microbiology 7_Miroorganism Fermentation Engineering)，edited by Hisaharu Taguchi and Shiro Nagai，Kyoritsu Shuppan Co.，Ltd.p. 175(1985))描述 了考慮通氣攬動(dòng)培養(yǎng)箱的標(biāo)準(zhǔn)條件，(1/0比率在1/4至1/^3范圍內(nèi)作為標(biāo)準(zhǔn)范圍，典型的是1/ 3。
[0037] 然而運(yùn)僅僅是在水或細(xì)胞濃度低的培養(yǎng)液中確立的。為了提高該生產(chǎn)的費(fèi)用有效 性，應(yīng)該增加培養(yǎng)基中氮源濃度，得到較高的細(xì)胞濃度。因此，本發(fā)明人想到，在高細(xì)胞濃度 的培養(yǎng)液中，不僅應(yīng)該考慮到容量氧傳質(zhì)系數(shù)化La)，而且應(yīng)該考慮到整個(gè)培養(yǎng)液的混合。
[0038] 此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)在氮源濃度提高的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，就是說，在較高細(xì)胞濃 度下，從微生物中提取的包含高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(粗制油）的不可皂化 物含量和醋型醬醇含量增加，導(dǎo)致由于氮源濃度提高的培養(yǎng)，產(chǎn)生具有不想要的化學(xué)組分 的油脂。Iwamoto報(bào)道了全部脂質(zhì)中不可皂化物含量隨著細(xì)胞的油脂含量增加而降低（" Biseibutsuniyoru Yushino Seisan(Microbial production of fat or oil)/'Hiroaki Iwamoto,（來源未知））。本發(fā)明人實(shí)施的研究也表明在較高濃度培養(yǎng)可能降低每個(gè)細(xì)胞的 油脂含量。本發(fā)明人考慮每一細(xì)胞的油脂含量降低引起不可皂化物含量和醋型醬醇含量增 加。
[0039] 因此，本發(fā)明人考慮在培養(yǎng)基中氮源濃度高的高濃度培養(yǎng)中，重要的不僅是提高 容量氧傳質(zhì)系數(shù)化La),而且是整個(gè)培養(yǎng)液的混合并因此提高每一細(xì)胞的油脂含量。本發(fā)明 人針對(duì)改進(jìn)攬拌葉輪的形狀(形式)作為達(dá)到運(yùn)個(gè)目標(biāo)的方法并做了廣泛和充分的研究。結(jié) 果，本發(fā)明人通過培養(yǎng)中的微生物，使用d/D(攬拌葉輪的直徑（ = d)與培養(yǎng)箱內(nèi)徑（=D)的 比率）=0.34至0.6的培養(yǎng)箱，成功提高了每一細(xì)胞的油脂含量和提高了高不飽和脂肪酸的 生產(chǎn)量。此外，已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，在運(yùn)種情況下，從微生物中提取的包含高不飽和脂肪酸作 為構(gòu)成脂肪酸的油脂的醋型醬醇含量顯著降低。
[0040] 此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)甚至在d/D =小于0.34的培養(yǎng)箱的情況下，由微生物產(chǎn)生的高不飽 和脂肪酸的生產(chǎn)量提高和醋型醬醇含量降低可W通過在不超過5.0的抑值滅菌培養(yǎng)基的氮 源來達(dá)到。
[0041] 據(jù)此，本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛和充分的研究，結(jié)果，通過采用一種方法，其中使用裝 備有d/D =至少0.34的攬拌葉輪的培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，或通過采用一種方法，其中d/D =小于 0.34的培養(yǎng)箱的情況下，在氮源已經(jīng)在不超過5的pH值下滅菌的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，成功地 穩(wěn)定產(chǎn)生了不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量降低的油脂(粗制油）。運(yùn)導(dǎo)致本發(fā)明的完 成。
[0042] 因此，本發(fā)明提供了一種制備不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量降低并且包含 高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的粗制油的方法，其特征在于在培養(yǎng)箱中在含有2至15% 氮源濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)能夠產(chǎn)生包含不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂的微生物，所 述培養(yǎng)箱內(nèi)裝備著攬拌葉輪，滿足攬拌葉輪的直徑（=d)與培養(yǎng)箱內(nèi)徑（=D)的比率是d/D = 0.30至0.6的要求。
[0043] 本發(fā)明也提供了粗制油，其特征是上述方法制備的不可皂化物含量按重量計(jì)算不 超過2.2%。本發(fā)明也提供了通過精煉上述粗制油產(chǎn)生的精煉油脂。
[0044] 本發(fā)明也提供了包含滲入其中的上述粗制油和/或上述精煉油脂的普通食品和飲 料、功能食品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物、早產(chǎn)兒的嬰兒配制食品（formula)、足月嬰兒的嬰兒配制食品、 嬰兒食品、預(yù)產(chǎn)和哺乳母親的食品、或老年人食品。
[0045] 本發(fā)明也提供了包含滲入其中的上述粗制油和/或上述精煉油脂，任選連同適于 口服、直腸內(nèi)或腸胃外給藥的中性載體的治療性營(yíng)養(yǎng)食品。
[0046] 本發(fā)明也提供了包含滲入其中的上述粗制油和/或上述精煉油脂的給予動(dòng)物或魚 的食物。
[0047] 本發(fā)明也提供了包含滲入其中的上述粗制油和/或上述精煉油脂的藥物組合物。 本發(fā)明也提供了使用上述粗制油和/或上述精煉油脂作為原料制備的藥物組合物。
[004引發(fā)明實(shí)施方案
[0049]本發(fā)明設(shè)及制備不可皂化物含量和/或醋型醬醇含量降低并且包含高不飽和脂肪 酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(粗制油）的方法，所述油脂(粗制油），W及含有滲入其中的通過 精煉所述油脂(粗制油）而提供的精煉油脂(甘油Ξ醋）的食品和飲料、治療營(yíng)養(yǎng)食物、動(dòng)物 食品和藥物制劑。
[0050] 根據(jù)本發(fā)明的油脂(粗制油)是從培養(yǎng)產(chǎn)物獲得的微生物油脂，該培養(yǎng)產(chǎn)物是在含 有2至15%氮源濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)能夠產(chǎn)生包含高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂 的微生物產(chǎn)生的。該油脂(粗制油）的不可皂化物和/或醋型醬醇含量降低，通過在裝備有攬 拌葉輪的d/D = 0.34至0.6的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，或當(dāng)使用d/D =小于0.34的培養(yǎng)箱時(shí)，通過在不 超過5的pH值下滅菌含有氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)達(dá)到。
[0051] 特別地，該油脂(粗制油）的不可皂化物含量按重量計(jì)算不超過2.2%，優(yōu)選按重量 計(jì)算不超過2.0%，更優(yōu)選按重量計(jì)算不超過1.8%，和/或醋型醬醇含量按重量計(jì)算不超過 1.0%，優(yōu)選按重量計(jì)算不超過0.8%，更優(yōu)選按重量計(jì)算不超過0.6%，和根據(jù)油脂(粗制 油）的總脂肪酸，高不飽和脂肪酸含量按重量計(jì)算不少于10%，優(yōu)選按重量計(jì)算不少于 20%，更優(yōu)選按重量計(jì)算不少于30%，最優(yōu)選按重量計(jì)算不少于40%。因此，應(yīng)該進(jìn)行能夠 產(chǎn)生包含高不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘油Ξ醋）的微生物的培養(yǎng)。
[0052] 運(yùn)里設(shè)及的微生物最好是可W產(chǎn)生至少一種高不飽和脂肪酸主要作為甘油Ξ醋 的構(gòu)成脂肪酸的微生物，高不飽和脂肪酸選自具有18個(gè)或W上碳原子和3個(gè)或W上雙鍵的 ω6高不飽和脂肪酸，具有18個(gè)或W上碳原子和2個(gè)或W上雙鍵的ω9高不飽和脂肪酸，和具 有18個(gè)或W上碳原子和3個(gè)或W上雙鍵的ω 3高不飽和脂肪酸。
[0053] 具有18個(gè)或W上碳原子和3個(gè)或W上雙鍵的ω 6高不飽和脂肪酸包括丫-亞麻酸 (6，9，12-十八碳Ξ締酸），二高-丫-亞麻酸(8，11，14-二十碳Ξ締酸），花生四締酸巧，8，11， 14-二十碳四締酸），7，10，13，16-二十二碳四締酸(22:4ω6)，和 0ΡΑω6(4,7，10，13，16-: 十二碳五締酸）。具有18個(gè)或W上碳原子和2個(gè)或W上雙鍵的ω 9高不飽和脂肪酸包括6,9- 十八碳二締酸，8,11-二十碳二締酸，和Mead acid(5,8，ll-二十碳Ξ締酸），具有18個(gè)或W 上碳原子和3個(gè)或W上雙鍵的ω 3高不飽和脂肪酸包括α-亞麻酸(9,12,15-十八碳Ξ締酸）， 6,9，12，15-十八碳四締酸（18:4〇3)，8，11，14，17-二十碳四締酸(20:4〇3)，6口4(5,8，11， 14，17-二十碳五締酸），0?4〇3(7，10，13，16，19-二十二碳五締酸），和0齡(4,7，10，13，16， 19-二十二碳六締酸）。
[0054] 因此，在本發(fā)明中，可W使用所有微生物，只要它們可W產(chǎn)生包含高不飽和脂肪酸 作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘油Ξ醋）。能夠產(chǎn)生包含花生四締酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂(甘 油Ξ醋)的微生物包括例如屬于被抱霉屬，耳霉屬(Conidiobolus)，腐霉屬(Pythium)，疫霉 屬(Phyto地thora)，青霉屬(Penicillium)，枝抱霉(Cladosporium)，毛霉菌屬(Mucor)，鑲 刀菌屬（Fusarium)，曲霉屬（Aspergillus)，紅酵母屬（Rhodotorula)，蟲霉屬 化ntomophthora)，刺抱囊霉屬化chinosporangium)和水霉屬（Saprolegnia)的微生物。
[0055] 屬于被抱霉屬的被抱霉亞屬的微生物包括例如亞屬長(zhǎng)形被抱霉（Mortierella elonga1:a)，微小被抱霉(Mo;rtierella exigua)，喜濕被抱霉(Mortierella hygro地ila)和 高山被抱霉(Mortierella alpina)。其具體實(shí)例包括長(zhǎng)形被抱霉（IF0 8570)，微小被抱霉 (IF0 8571)，喜濕被抱霉（IF0 5941)，高山被抱霉（IF0 8568)，ATCC 16266，ATCC 32221， ATCC 42430，CBS 219.35，CBS 224.37，CBS 250.53，CBS ：M3.66，CBS 527.72，CBS 529.72， CBS 608.70和CBS 754.68菌株。
[0056] 例如，屬于Crypthecodenium，Thrautochyt;rium，Schizochyt;rium，Ulkenia， 化ponoch^ri皿或化li地thoros屬的微生物也可W被提為能夠產(chǎn)生DHA的微生物。
[0057] 所有運(yùn)些菌株都可W不受限制的獲自發(fā)酵研究所，Osaka(IFO)，美國(guó)典型培養(yǎng)物 保藏中屯、（ATCC)和Centrra化ureau voor Schimmelcultures(CBS)。此外，也可 W使用參與 本發(fā)明的研究組從上壤分離的菌株，即長(zhǎng)形被抱霉SAM 0219(FERM P-8703)(FERM BP- 1239)0
[0058] 為了培養(yǎng)本發(fā)明中使用的菌株，抱子、菌絲體或預(yù)先培養(yǎng)獲得的種子培養(yǎng)溶液或 從種子培養(yǎng)收集的細(xì)胞接種于液體培養(yǎng)基，隨后主要培養(yǎng)。在液體培養(yǎng)基的情況下，運(yùn)里可 用的碳源包括但不限于本領(lǐng)域常用的那些，例如葡萄糖，果糖，木糖，薦糖，麥芽糖，可溶淀 粉，糖蜜，甘油，甘露醇和糖化淀粉。
[0059] 氮源包括天然氮源如蛋