: 14.4，19.2，29.6， 29.7, 63.2, 100.2, 119.1, 121.3, 122.5, 122.8, 124.3, 129.2, 133.1, 141.7, 156.9，167.4，168.9; HRMS 化SI-TOF) m/z: Calcd. for Cl姐2iN3〇3 [M+Na] + : 339.1582;化und: 339.1585. 本實(shí)施例制備化合物化：黃色固體，產(chǎn)率86%，烙點(diǎn)：148.0-149.9 DC。核磁共振和高分 辨質(zhì)譜測(cè)試等結(jié)果如下：1η NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 0.82-0.86 (m, 6H), 1.62-1.67 (m, 4H), 4.33-4.37 (m, 4H), 6.88-6.93 (m, 3H), 7.17-7.21 (m, IH), 7.60 (s, IH), 8.46 (s, IH), 9.12 (s, IH); 1化 NMR (CDCI3， 100 MHz) δ: 10.2， 22.1， 69.0， 100.1, 109.8, 121.5, 122.6, 124.9, 125.0, 129.4, 129.9, 141.4, 157.1, 167.5, 170.2; HRMS 化SI-TOF) m/z: Calcd. for Cl訊21 化化〇3 [M+Na] + : 362.1480;化und: 362.1484. 本實(shí)施例制備化合物3q:黃色固體，產(chǎn)率66%，烙點(diǎn)：157.1-158.7 °C。核磁共振和高 分辨質(zhì)譜測(cè)試等結(jié)果如下：1η NMR (CDC13, 400 MHz) δ: 0.84 (S, 6H), 1.30-1.25 (m, 4H), 1.63-1.57 (m, 4H), 4.41-4.37 (m, 4H), 6.93-6.87 (m, 3H), 7.21-7.17 (m, IH), 7.58 (s, IH), 8.46 (s, IH), 8.88 (s, IH); "C 匪R (CDCI3，100 MHz) δ: 13.7, 19.0, 29.7, 30.8, 67.3, 100.2, 109.7, 121.6, 122.7, 124.9, 125.0, 129.4， 129.9， 141.3， 157.1， 167.6， 170.1; HRMS 化SI-TOF) m/z: Calcd. for C21 出曲3Na〇3[M+化]+ : 390.1793; Found: 390.1797. 本發(fā)明的式（1)化合物具有重要的生物活性，人肺癌細(xì)胞(A549)W及人白血病細(xì)胞 (K562)共二株腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明：此類(lèi)式（1)所示的結(jié)構(gòu)的雙烷氧基喀晚拼接 3-締鍵氧化嗎I噪衍生物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，有可能發(fā)展成為新的防治腫瘤藥 物。但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合物不限于人肺癌細(xì)胞(A549)和人白血病細(xì)胞(K562)表示的 細(xì)胞毒性。
[001引藥理實(shí)施例1:化合物3日，3b，3e，3j，31，3m，化對(duì)A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性，但需 強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合物不限于化合物3a, 3b，3e，3j，31，3m，化對(duì)A549細(xì)胞的細(xì)胞 毒性。
[0016] A549(人非小細(xì)胞肺癌肺癌）用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100 U/mL的青霉素和lOOU/mL鏈霉素。細(xì)胞W每孔4000個(gè)細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在37°C含5% C〇2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
[0017] 細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法。細(xì)胞經(jīng)過(guò)24小時(shí)的解育后，分別將新配的化合物 3曰，3b，3e，3j，31，3m，化的二甲基亞諷溶液W濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物 最終濃度分別為5皿ol/L, 10皿ol/L, 20皿ol/L, 40皿ol/L和80皿〇1/1。48小時(shí)后， 每孔加入10化MTT (5 mg/mL)的憐酸鹽緩沖液，再繼續(xù)在37 T培養(yǎng)4小時(shí)后，離屯、5分 鐘除去未轉(zhuǎn)化的MTT，每孔中加入150化二甲基亞諷。W溶解還原的MTT晶體甲臘 (formazan)，用酶標(biāo)儀在490 nm波長(zhǎng)測(cè)定0D值。其中化合物3a-：3q對(duì)PC-3細(xì)胞半抑制濃度 IC50由SPSS軟件（19版本)分析得到?；衔?a對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的IC50為43.1 μπιο1/1;化合 物3b對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的ICso為26.8皿ol/l;化合物3e對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的ICso為30.5皿ol/ L化合物3j對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的ICso為57.5 μL?οΙ/Ι;化合物31對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的ICso為45.4 郵〇1幾；化合物3m對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的IC50為35.3皿ol/L;化合物化對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的 IC50為19.0郵〇1幾；化合物3p對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的1C日日為46.4郵〇1幾；而陽(yáng)性照順?shù)N對(duì) A549腫瘤細(xì)胞的IC50為26.9 ymol/L。
[0018] 實(shí)驗(yàn)結(jié)論:A549細(xì)胞是測(cè)試化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評(píng)價(jià)指 標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)表明此類(lèi)式（1)所示的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物對(duì)A549細(xì)胞具 有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成新的具有抗腫瘤作用的藥物。
[0019] 藥理實(shí)施例2:化合物3a-：3q對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞毒性，但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合 物不限于化合物3a,抓，3c，3d，3e，3f，3g，池，3i，3j，化對(duì)A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
[0020] Κ562(人慢性髓系白血病細(xì)胞)用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血 清，100 U/mL的青霉素和100 U/mL鏈霉素。細(xì)胞W每孔5000個(gè)細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在 37 °C含5% C〇2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
[0021 ]細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法。具體方法如藥理實(shí)施例1?；衔?a對(duì)K562腫瘤 細(xì)胞的IC50為9.1皿〇1/1;化合物3b對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC50為5.8皿〇1/1;化合物3c對(duì)K562 腫瘤細(xì)胞的IC5Q為51.5 μL?οΙ/Ι;化合物3d對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC5Q為41.3 μL?οΙ/Ι;化合物3e 對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的ICso為6.3皿ol/M化合物3f對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的ICso為45.9皿〇1/1;化 合物3g對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC5o為40.8μmol/レ化合物化對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC5o為9.5μ mol/l;化合物3i對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC5Q為31.7皿〇1/1;化合物3j對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC50為 5.2皿〇1/1;化合物化對(duì)K562腫瘤細(xì)胞的IC5Q為17.2 μL?οΙ/Ι;而陽(yáng)性對(duì)照順?shù)N對(duì)K562腫瘤 細(xì)胞的IC5Q為22.6 ymol/L。
[0022] 實(shí)驗(yàn)結(jié)論:K562細(xì)胞是測(cè)試化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評(píng)價(jià)指 標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)表明此類(lèi)式（1)所示的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物對(duì)K562細(xì)胞具 有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成新的具有抗腫瘤作用的藥物。
[0023] 從W上藥理實(shí)施例中我們可W看出運(yùn)些化合物對(duì)運(yùn)二株腫瘤細(xì)胞都顯示有一定 的細(xì)胞毒性。但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合物不限于人肺癌細(xì)胞（A549)和人白血病細(xì)胞 (K562)表示的細(xì)胞毒性?？梢?jiàn)運(yùn)些化合物具有開(kāi)發(fā)成為抗腫瘤藥物的潛力，值得繼續(xù)深入 研究下去。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物，其特征在于：該化合物具有如通式 (I)所示的結(jié)構(gòu)：式中，Ri為烷基;R2為烷基或芳基或H;R3為烷基或面素或H。2. -種如權(quán)利要求1所述的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物的制備方法，其 特征在于:將2-嗎I噪酬與3，5-二氯喀晚甲醒在無(wú)機(jī)堿性條件下，按摩爾比為3:4的比例在醇 類(lèi)溶劑中加熱回流，進(jìn)行Knoevenagel加成消除反應(yīng)，同時(shí)發(fā)生醇徑基雙取代氯原子反應(yīng)， 獲得雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物的制備方法，其特 征在于:所述的無(wú)機(jī)堿為化〇H、KOH、Na2C〇3或K2CO3,無(wú)機(jī)堿的加入量為氧化嗎I噪摩爾量的 50-150%〇4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物的制備方法，其特 征在于:所述的醇類(lèi)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇或正下醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物的制備方法，其特 征在于:2-嗎I噪酬和3，5-二氯喀晚甲醒反應(yīng)溫度為60-100°C，反應(yīng)時(shí)間為1-10小時(shí)。6. -種如權(quán)利要求1所述的雙烷氧基喀晚拼接3-締鍵氧化嗎I噪衍生物在制備防治腫瘤 疾病藥物中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種雙烷氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物，本發(fā)明以不同取代的2-吲哚酮與3,5-二氯嘧啶甲醛在無(wú)機(jī)堿性條件下，在醇類(lèi)溶劑中加熱回流，進(jìn)行Knoevenagel加成消除反應(yīng)，同時(shí)發(fā)生醇羥基雙取代氯原子反應(yīng)，獲得雙烷氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物，該類(lèi)骨架包含潛在的生物活性嘧啶骨架和3-烯鍵氧化吲哚骨架，是一類(lèi)重要的醫(yī)藥中間體類(lèi)似物和藥物分子類(lèi)似物，可以為生物活性篩選提供化合物源，對(duì)藥物的篩選和制藥行業(yè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值，本發(fā)明針對(duì)這些衍生物對(duì)二種腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行腫瘤生長(zhǎng)抑制活性篩選，證明這些衍生物發(fā)現(xiàn)具有一定的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活性，可預(yù)期作為抗腫瘤藥物用途。
【IPC分類(lèi)】A61P35/02, A61P35/00, C07D403/06, A61K31/506
【公開(kāi)號(hào)】CN105585558
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510929100
【發(fā)明人】劉雄利, 楊超, 劉雄偉, 黃俊飛, 陳智勇, 周英, 俸婷婷, 余章彪
【申請(qǐng)人】貴州大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2015年12月15日