一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧霞捌渲苽浞椒ê蛻?yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及基因?qū)氩牧霞夹g(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧霞捌渲苽浞椒ê蛻?yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人類基因圖譜測定的完成，我們對人類疾病發(fā)病機制的認識在基因水平上取得了突破性的進展。目前研究表明，有許多疾病的發(fā)生及發(fā)展與基因密切相關(guān)。如果可以篩查出與疾病特異相關(guān)的基因片段或者基因突變，就可以有針對性地在基因水平上進行特異治療，如通過導(dǎo)入相關(guān)缺失基因或沉默基因，以增強相關(guān)缺失功能或者沉默致病基因，從而達到徹底治療的目的。將目的基因安全有效地導(dǎo)入生物體內(nèi)是目前此研究領(lǐng)域中的關(guān)鍵和難點。
[0003]基因?qū)敕椒梢苑譃閮深?第一類是病毒型基因?qū)敕椒?，是以逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒為載體;第二類是非病毒型基因?qū)敕椒ǎ顼@微注射、基因槍、磷酸鈣共沉淀、陽離子脂質(zhì)體法、以及利用新興的納米基因?qū)氩牧线M行基因轉(zhuǎn)染。
[0004]病毒型基因?qū)敕椒ù嬖谠S多嚴重的不足，例如病毒轉(zhuǎn)染時有可能激活原癌基因。因此，非病毒型基因?qū)敕椒ㄊ悄壳暗难芯繜狳c，但是，上述所述的非病毒型基因?qū)敕椒ň嬖诓蛔?顯微注射一次只能處理一個細胞，其轉(zhuǎn)染效率非常低;基因槍的穿透力十分有限；磷酸鈣共沉淀法的轉(zhuǎn)染效率受溫度、濃度、操作環(huán)境等眾多因素影響，轉(zhuǎn)染結(jié)果很不穩(wěn)定；陽離子脂質(zhì)體法雖然表現(xiàn)出良好的轉(zhuǎn)染效率，但是陽離子脂質(zhì)體因毒性高，使得陽離子脂質(zhì)體法的應(yīng)用受到了限制;現(xiàn)有技術(shù)中的納米基因?qū)氩牧洗嬖谏a(chǎn)成本高、制備用原料不易得、難以普及推廣應(yīng)用的缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的之一在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒ā?br>[0006]本發(fā)明的目的之二在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧稀?br>[0007]本發(fā)明的目的之三在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系膽?yīng)用。
[0008]為了實現(xiàn)上述目的之一，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒?，它包括以下步驟:
步驟一，硫酸亞鐵水溶液通氮氣:往硫酸亞鐵水溶液中通入氮氣；
步驟二，加入氟尿嘧啶水溶液:往步驟一中持續(xù)通入氮氣的硫酸亞鐵水溶液中加入氟尿嘧啶水溶液，然后在一定溫度下攪拌一定時間，得到混合物；
步驟三，超聲:對步驟二中得到的混合物繼續(xù)通入氮氣，然后對步驟二得到的混合物進tx超聲震蕩一定時間； 步驟四，靜置:對步驟三完成超聲震蕩后的混合物進行靜置一定時間；
步驟五，離心并烘干:對步驟四完成靜置的混合物進行離心，得到沉淀物，然后對沉淀物進行烘干，即制得功能化納米配合物基因?qū)氩牧稀?br>[0009]上述技術(shù)方案中，所述步驟一硫酸亞鐵水溶液通氮氣步驟中，所述硫酸亞鐵水溶液的質(zhì)量體積濃度為0.5g/L?5g/L。
[0010]上述技術(shù)方案中，所述步驟二加入氟尿嘧啶水溶液步驟中，所述氟尿嘧啶水溶液的摩爾濃度為0.05mol/L?0.5 mol/L。
[0011]上述技術(shù)方案中，所述步驟二加入氟尿嘧啶水溶液步驟中，所述硫酸亞鐵水溶液與所述氟尿嘧啶水溶液的摩爾比為I?5:1。
[0012]上述技術(shù)方案中，所述步驟二加入氟尿嘧啶水溶液步驟中，所述攪拌溫度為40°060°C，所述攪拌時間為20min?40min。
[0013]上述技術(shù)方案中，所述步驟三超聲步驟中，所述超聲震蕩的時間為Ih?4h;所述超聲震蕩的超聲波的頻率為30 kHz-50 kHz ο
[0014]上述技術(shù)方案中，所述步驟四靜置步驟中，所述靜置的時間為1h?15h。
[0015]上述技術(shù)方案中，所述步驟五離心并烘干步驟中，所述烘干的溫度為50°C~70°C，所述烘干時間為5h~7h。
[0016]為了實現(xiàn)上述目的之二，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧?，運用上述所述的一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒ㄋ频玫墓δ芑{米配合物基因?qū)氩牧?，所述功能化納米配合物基因?qū)氩牧蠟橐环N平均直徑為150nm左右的納米球狀材料。
[0017]為了實現(xiàn)上述目的之三，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
提供一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系膽?yīng)用，上述所述的一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒ㄋ频玫墓δ芑{米配合物基因?qū)氩牧显诳鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，有益效果在于:
(一)本發(fā)明提供的一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒ň哂兄苽浞椒ê唵蔚膬?yōu)點，所制得的功能化納米配合物基因?qū)氩牧蠟橐环N平均直徑為150nm左右的納米球狀材料，且該納米球狀材料的粒徑能夠通過反應(yīng)時間的控制進而控制納米顆粒的粒徑，從而擴大了粒徑的選擇范圍。該功能化納米配合物基因?qū)氩牧夏芎途G色熒光蛋白質(zhì)?；騊GFP以非共價方式結(jié)合，形成無機納米基因?qū)胂到y(tǒng)，用于基因轉(zhuǎn)染。該功能化納米配合物基因?qū)氩牧吓c綠色熒光蛋白質(zhì)粒基因PGFP結(jié)合后再與DNA中的氫氧化鈣和磷酸離子的正電性根發(fā)生作用，能夠達到穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染效率，并且能夠降低高濃度鈣離子可能導(dǎo)致的活性，從而使得本發(fā)明所制得的功能化納米配合物基因?qū)氩牧夏軌蛟谌梭w內(nèi)得到進一步應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述制得的功能化納米配合物基因?qū)氩牧暇哂幸韵聝?yōu)點:
(1)具有較高的轉(zhuǎn)染效率，在人乳腺癌細胞中轉(zhuǎn)染效率能夠達到45%左右；
(2)低毒性，因硫酸亞鐵具有良好的生物相容性，使得所制得的球狀的功能化納米配合物基因?qū)氩牧暇哂辛己玫纳锵嗳菪?，因此，使得細胞生存率很高?br> (3)該功能化納米配合物基因?qū)氩牧系姆稚⑿粤己?，符合對轉(zhuǎn)染的要求；
(4)制備成本極低，因制備該功能化納米配合物基因?qū)氩牧纤玫脑牧系膬r格低廉，且易得。
[0019](5)材料制備反應(yīng)簡單，容易操作，可重復(fù)性好；
(6)應(yīng)用前景良好，可以應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。
[0020](二)本發(fā)明提供的一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒ǎ洳襟E一往硫酸亞鐵水溶液中通入氮氣，是為了去除硫酸亞鐵水溶液中的氧氣，從而防止硫酸亞鐵水溶液中的二價鐵發(fā)生氧化反應(yīng)，并在步驟二和步驟三的全過程均保持通入氮氣，進一步防止亞鐵離子發(fā)生氧化反應(yīng)。
【附圖說明】
[0021 ]圖1是本發(fā)明的一種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒ǖ膶嵤├?所制得的功能化納米配合物基因?qū)氩牧系耐干潆婄R圖。
[0022]圖2是本發(fā)明在轉(zhuǎn)染實驗中的功能化納米配合物基因?qū)氩牧虾蚿EGFP-Cl的聯(lián)合體在轉(zhuǎn)染后的倒置熒光顯微鏡下的熒光圖。
[0023]圖3是本發(fā)明在轉(zhuǎn)染實驗中的功能化納米配合物基因?qū)氩牧虾蚿EGFP-Cl的聯(lián)合體在轉(zhuǎn)染后的細胞存活率圖。
[0024]圖4是本發(fā)明在轉(zhuǎn)染實驗中的功能化納米配合物基因?qū)氩牧虾蚿EGFP-Cl的聯(lián)合體的轉(zhuǎn)染效率圖。
[0025]其中，在圖3至圖4中，ce 11 viabi I ity(%)代表細胞存活率，transfect1nefficiency(%)代表轉(zhuǎn)染效率。
【具體實施方式】
[0026]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0027]其中，本發(fā)明提及的氟尿嘧啶水溶液也稱作:2，4_二羥基-5-氟嘧啶或5-FU或5-氟-2，4(1H，3H)_ 嘧啶二酮。
[0028]實施例1。
[0029]—種功能化納米配合物基因?qū)氩牧系闹苽浞椒?，它包括以下步驟:
步驟一，硫酸亞鐵水溶液通氮氣:往硫酸亞鐵水溶液中通入氮氣;本實施例中，硫酸亞鐵水溶液的質(zhì)量體積濃度為lg/L;
步驟二，