52] 本發(fā)明第三方面提供了第一方面所述的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針在 制備腫瘤的早期檢測、診斷、治療或診療的藥物中的應用。
[0053]所述探針可以對配合腫瘤的早期檢測、診斷、治療或診療的藥物中的其他成分對 腫瘤內(nèi)的pH進行檢測。
[0054]所述具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的最大吸收波長隨著pH降低由670nm紅 移到760nm，能有效避開組織自吸收和自焚光，其最大發(fā)射波長為790nm-800nm，stocks位移 高達130nm，背景干擾少、信噪比較高。另外，所述探針的pKa較低，在pH3.5~7.5時，其在激 發(fā)光760nm、670nm下發(fā)射波長790nm處的焚光強度比（簡寫為F76〇/F67q)隨著pH的降低而逐漸 增強。該探針對H+有較高的靈敏度、高選擇性、背景干擾小，對細胞和活體傷害較小，很適合 用來進行極酸環(huán)境下pH的檢測。
[0055]綜上，本發(fā)明提供的一種具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針及其制備方法和應 用的有益效果包括以下幾個方面：
[0056] (1)所述具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的最大吸收波長隨著pH降低由 670nm紅移到760nm，能有效避開組織自吸收和自焚光，最大發(fā)射波長為790nm-800nm， stocks位移高達130nm，背景干擾少；
[0057] (2)所述具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針有較低的pKa值，在pH3.5~7.5時， 在激發(fā)光760nm、670nm下的熒光強度比隨著pH的降低而逐漸增強，很適合用來進行極酸環(huán) 境下pH的檢測。而且該探針在結(jié)合H+前后顏色變化較明顯，可方便地通過裸眼識別；
[0058] (3)所述具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的制備方法簡單易操作；
[0059] (4)所述具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針有較低的pKa值，所述探針帶正電， 在細胞膜負電的作用下能很快進入細胞內(nèi)檢測酸性細胞內(nèi)pH。
【附圖說明】
[0060]圖1為實施例1制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的高分辨質(zhì)譜圖；
[0061 ]圖2為實施例2制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的高分辨質(zhì)譜圖；
[0062] 圖3為實施例1制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的吸收光譜隨pH的變 化曲線；
[0063] 圖4為實施例2制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的吸收光譜隨pH的變 化曲線；
[0064] 圖5為實施例1制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的熒光強度隨pH的變 化曲線；
[0065]圖6為實施例2制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的熒光強度隨pH的變 化曲線；
[0066] 圖7為實施例1制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的選擇性熒光光譜；
[0067] 圖8為實施例2制得的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的選擇性熒光光譜。
【具體實施方式】
[0068] 以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術(shù)領域的普通技術(shù)人員 來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為 本發(fā)明的保護范圍。
[0069] 實施例1:
[0070] -種具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0072]將 25.8mg(0.3mmol)的
和 63 · 8mg(0 · lmmol，分子量為 638 · 19)的化合物
溶解在2ml的無水DMF溶劑中，在氬氣氣體氛圍下，在80°C 進行反應lh，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過硅膠柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進行梯 度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從40:1變至20:1，除去溶劑，得藍色固體產(chǎn)品 55mg，產(chǎn)率80 %，該藍色固體產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)式為
[0073] (2)制備具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針：
[0074] 將化學式為
的68.8mg(0. lmmo1)與 68·4mg (0.4mmol)的
加入三口燒瓶中，加入3mL無水DMF作溶劑，再加35yL的三乙胺 (0.25mmol)做縛酸劑，氬氣保護下，于溫度60°C下反應4h，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過 硅膠柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進行梯度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從 30:1變至10:1，除去溶劑，得靛藍色固體產(chǎn)品58mg，即具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針
[0076]對實施例1得到的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針進行ABI Q-star Elite質(zhì) 譜（四級桿飛行時間質(zhì)譜)測試，測試結(jié)果如圖1所示，從圖1中可以看出，通過質(zhì)譜測出的分 子尚子峰M+為652.4376，符合C44H54N5+的理論分子量。
[0077] 實施例2:
[0078] -種具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0080]
.的化合物1.02g(5mmol)溶解在15ml的1,4-二氧六 環(huán)中，加入1.05g的Fmoc-Cl，再加入10%的碳酸鈉水溶液，實時控制反應溶液的pH值在8.0-9.0之間，室溫下攪拌過夜即可。然后加入10mL蒸餾水，用乙酸乙酯多次萃取，收集有機相， 旋去溶劑，真空干燥12h，即得到化學式
白色絮狀產(chǎn)品。
[0082] (3)將化學式為
的34 · 4mg(0 · 05mmol)與41mg(0 · 2mmol)
加入三口燒瓶中，加入2mL無水DMF作溶劑，再加14yL的三乙胺 (O.lmmol)做縛酸劑，氬氣保護下，于溫度40°C下反應4h，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過硅 膠柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進行梯度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從30: 1變至10:1，除去溶劑，之后用乙腈和乙二胺的體積比1:1混合溶液攪拌15min，脫去Fmoc，旋 去溶液，得藍色固體產(chǎn)品1 5 m g，即具有極酸性p Η響應的近紅外熒光探針
[0083]對實施例2得到的具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針進行質(zhì)譜測試，測試結(jié)果 如圖2所示，從圖2中可以看出，通過質(zhì)譜測出的分子離子峰M+為604.4375,符合C4〇H54N5+的 理論分子量。
[0084] 實施例3:
[0085] -種具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0087]將 52mg(0.6mmol)的
和 63.8mg(0.1mmol)的化合物
溶解在3ml的無水DMF溶劑中，在氬氣氣體氛圍下，在70°C 進行反應1.5h，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過硅膠柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進行 梯度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從40:1變至20:1，除去溶劑，得藍色固體產(chǎn)品 55mg，產(chǎn)率80 %，該藍色固體產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)式為
[0088] (2)制備具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針：
[0089] 將化學式為
的 68.8mg(0.1mmol)與 102mg
加入三口燒瓶中，加入3mL無水DMF作溶劑，再加35yL(0.25mmol)的三 乙胺做縛酸劑，氬氣保護下，于溫度60°C下反應4h，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過硅膠柱， 用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進行梯度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從30:1變至 10 : 1，除去溶劑，得靛藍色固體產(chǎn)品5 8 m g，即具有極酸性p Η響應的近紅外熒光探針
[0090] 實施例4:
[0091 ] -種具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0093] 將 41.62mg(0.48mmol)的
和 77.2mg(0.12mmol)的化合物
溶解在3.5ml的無水DMF溶劑中，在氬氣氣體氛圍下，在60 °〇進行反應2h，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過硅膠柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液進行 梯度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從40:1變至20:1，除去溶劑，得藍色固體產(chǎn)品 68mg，產(chǎn)率80 %，該藍色固體產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)式為
[0094] (2)制備具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針：
[0095] 將化學式
：的68 · 8mg(0 · lmmol)與85mg(0 · 5mmol)
入三口燒瓶中，加入3.5mL無水DMF作溶劑，再加35yL(0.25mmol)的三乙胺做縛 酸劑，氬氣保護下，于溫度60°C下反應4h，旋蒸除去溶劑，真空干燥12h，過硅膠柱，用二氯甲 烷和甲醇的混合溶液進行梯度洗脫，洗脫劑二氯甲烷和甲醇的體積比從30:1變至10:1，得 靛藍色固體產(chǎn)品5 8 m g，即具有極酸性p Η響應的近紅外熒光探針
[0096] 實施例5:
[0097 ] -種具有極酸性pH響應的近紅外熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
[0098；
|的制備同實施例4;
[0099]
的制備同實施例1;
[0100]
的34mg(0·05mmol)與51mg(0·25mmol)的
加入三口燒瓶中，加入2.5mL無水DMF作溶劑，再加28yL(0.2mmo 1)的三乙 胺做縛酸劑，氬