9(2.3)；
[0037] 3)^IR(KBr)vmax(cm_1) :3172,1700,1603,1516,1444,1372,1281,1146,1021,983, 819,761；
[0038] 4)、HR-ESI-MS:m/z 451 · 10320( [M-H]-，C24Hi9〇9-的理論計算值為451 · 10291);核 磁共振光譜數(shù)據(jù)見表1。
[0039] 表1:表兒茶素反式咖啡酸酯（epicatechin 3-0-caffeate)的核磁共振光譜數(shù)據(jù) (咕NMR在600MHz，13C NMR在125MHz條件下測試，δ單位為ppm，耦合常數(shù)J單位為Hz，溶劑為 氘代DMS0)。
[0040]表1 .epicatechin 3-〇-caffeate的核磁共振光譜數(shù)據(jù)
[0043] 所有波譜數(shù)據(jù)均通過1HNMR，13CNMR，ESI-HR-MS，DEPT譜，1H- 1HCOSY，HSQC和HMBC 等二維核磁共振譜歸屬，證明了所得化合物的結(jié)構(gòu)。
[0044] 二、表兒茶素反式咖啡酸酯（epicatechin 3-〇-caffeate)的體外抑制大鼠主動脈 血管平滑肌細胞炎癥試驗
[0045]細胞培養(yǎng):取SD大鼠胸主動脈剪碎，用彈性蛋白酶和膠原酶消化，于100mm培養(yǎng)皿 中用含10%胎牛血清和1%雙抗的Dulbeccc/s modified Eagle(DMEM)培養(yǎng)基，以一定條件 (溫度37°C，二氧化碳濃度5%，濕度95%)培養(yǎng)于二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中。當細胞密度至 80 % -90 %時傳入六孔板中，每孔細胞個數(shù)約105個。
[0046]對血管緊張素 II誘導(dǎo)的大鼠主動脈血管平滑肌細胞(Rat VSMC)炎癥模型的體外 抗炎試驗:待細胞密度至80 % -90 %時更換無血清的培養(yǎng)基饑餓24h，加入表兒茶素反式咖 啡酸酯(終濃度40μΜ)孵育lh后再加入血管緊張素11(終濃度100nM)，lh后吸去培養(yǎng)基，加入 裂解液，按Trizol法提取RNA，將得到的RNA反轉(zhuǎn)錄并進行熒光定量PCR的檢測，重復(fù)實驗三 次，以確定表兒茶素反式咖啡酸酯對抑制主要炎癥因子IL-6的mRNA的表達水平。
[0047]如圖2所示，相對于對照組(Basal)，加入血管緊張素 II后能成功誘導(dǎo)炎癥基因 IL-6高表達(Angll)，炎癥模型建立成功。加入已知的茶葉活性物質(zhì)EGCG后，炎癥基因 IL-6的表 達得到明顯抑制(EGCG);加入表兒茶素反式咖啡酸酯(Epicatechin 3-〇-caffeate)后，炎 癥基因 IL-6的表達也顯著降低(Epicatechin 3-〇-caffeate)，從而說明表兒茶素反式咖啡 酸酯對由血管緊張素 II誘導(dǎo)的血管炎癥有一定的抑制作用。
[0048]上述試驗證明，本發(fā)明制備得到的產(chǎn)物表兒茶素反式咖啡酸酯（印icateChin3-0-caff eate)對血管平滑肌細胞炎癥有較強的抑制效果。
[0049] 因此本發(fā)明名為表兒茶素反式咖啡酸酯的兒茶素類衍生物可應(yīng)用于抗血管炎癥 藥物方面的制備。
[0050] 具體地說是將如上本發(fā)明的表兒茶素反式咖啡酸酯的兒茶素類衍生物按醫(yī)學(xué)上 可接受的劑量和藥學(xué)上所通用的輔料制成一種抗血管炎癥藥物。該藥物劑型包括口服型、 外用型和注射型等。所述口服型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑等;所述外用型包括栓 劑、徐劑、洗劑、膏劑、透皮貼劑等;所述注射型包括注射液、混旋液、凍干粉等。具體制備方 法參照制藥領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
【主權(quán)項】
1. 一種名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物，其特征在于具有如下所示結(jié) 構(gòu)：2. -種如權(quán)利要求1所述的名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物的制備方 法，其特征在于包括W下步驟： 1) 、原料粉碎 取紫娟茶，并將紫娟茶粉碎； 2) 、浸提 用甲醇提取粉碎后的紫娟茶，提取液經(jīng)過減壓濃縮制得膏狀提取物； 3) 分離純化 將甲醇提取后的膏狀提取物分離純化得到表兒茶素反式咖啡酸醋。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物的制備方法， 其特征在于:步驟2)浸提中，粉碎后的紫娟茶先用石油酸浸提，再用乙酸乙醋浸提、最后再 將經(jīng)乙酸乙醋浸提的紫娟茶用甲醇提取。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物的制備方 法，其特征在于:步驟3)中所述的分離純化是將所述甲醇提取制得的膏狀提取物溶解后依 次經(jīng)MCI柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析、聚酷胺柱層析，最后經(jīng)HPLC制備分離純化得 到表兒茶素反式咖啡酸醋。5. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物的制備方 法，其特征在于:步驟2)浸提中，有機溶劑提取采用浸泡方式提取，即將粉碎后的紫娟茶浸 泡在有機溶劑中72小時;或者將粉碎后的紫娟茶用有機溶劑超聲波振蕩提取。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物的制備方法， 其特征在于：步驟3)中所述的分離純化的具體步驟為:將甲醇提取物溶解后使用MeOH-此O 體積比0 :100到100 :0作為梯度洗脫，收集其中MeOH-此0體積比70:30到80: 20的洗脫組分； 然后將所得的洗脫組分經(jīng)S邱hadex LH-20凝膠柱層析，WMeOH-出0體積比50:50到100:0作 為梯度洗脫，收集其中MeOH-此0體積比70:30的洗脫組分;所得洗脫組分再經(jīng)MCI柱層析，W MeOH-此0體積比30:70到100:0作為梯度洗脫，收集其中MeOH-出0體積比70:30到80:20的洗 脫組分;然后經(jīng)聚酷胺柱層析，W二氯甲燒-甲醇體積比1:1洗脫，收集相應(yīng)洗脫組分，最后 經(jīng)HPLC制備純化，得到表兒茶素反式咖啡酸醋。7. -種如權(quán)利要求1所述名為表兒茶素反式咖啡酸醋的兒茶素類衍生物的在制備抗血 管炎癥藥物方面的應(yīng)用。8. -種抗血管炎癥藥物，其特征在于，所述藥物由如權(quán)利要求1所述的表兒茶素反式咖 啡酸醋的兒茶素類衍生物和藥學(xué)上所通用的輔料制成。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種抗血管炎癥藥藥物，其特征在于，所述藥物劑型包括口服 型、外用型和注射型。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種抗血管炎癥藥藥物，其特征在于，所述口服型包括片劑、 膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑;所述外用型包括栓劑、徐劑、洗劑、膏劑、透皮貼劑;所述注射型包 括注射液、混旋液、凍干粉。
【專利摘要】本發(fā)明屬于化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種名為表兒茶素反式咖啡酸酯的兒茶素類衍生物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明首先提供了一種從紫娟茶中分離制備得到的名為表兒茶素反式咖啡酸酯的兒茶素類衍生物；在制備上述名為表兒茶素反式咖啡酸酯的兒茶素類衍生物時，首先取紫娟茶，并將紫娟茶粉碎；然后依次用石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取粉碎后的紫娟茶，提取液經(jīng)過減壓濃縮制得膏狀提取物；再將甲醇提取后的膏狀提取物分離純化得到表兒茶素反式咖啡酸酯。本發(fā)明中的制備方法簡單，成本較低；制備得到的名為表兒茶素反式咖啡酸酯的兒茶素類衍生物可應(yīng)用于制備抗血管炎癥藥物，對農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的意義，也為有效開發(fā)利用紫娟茶提供了廣闊的前景。
【IPC分類】A61K31/353, C07D311/62, A61P29/00, A61P9/14
【公開號】CN105503807
【申請?zhí)枴緾N201610051758
【發(fā)明人】鮑官虎, 王威, 付熙雯, 利恩樂, 謝忠穩(wěn)
【申請人】安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月25日