br>[0050] 可使用任何合適的聚合引發(fā)劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能容易地選擇合適的引發(fā)劑， 例如自由基引發(fā)劑或陽離子引發(fā)劑，適于與表1中例舉的單體一同使用。在各個實施方式 中，使用UV光以產(chǎn)生自由基單體來引發(fā)鏈聚合。
[0051] 可使用任何合適的引發(fā)劑。聚合引發(fā)劑的例子包括有機過氧化物、偶氮化合物、 醌、亞硝基化合物、酰基鹵、腙、疏基化合物、吡喃洋（pyrylium)化合物、咪挫、氯三嗪、苯偶 姻、苯偶姻烷基醚、二酮、苯基酮或其混合物。合適的市售紫外活化和可見光活化的光引發(fā) 劑的例子例如 IRGACURE 651、IRGACURE 184、IRGACURE 369、IRGACURE 819、DAR0CUR 4265 和DAR0QJR 1173,得自紐約州塔利頓希巴特殊化學品公司（Ciba Specialty Chemicals)， 以及LUCIRIN TPO和LUCIRIN TP0-L，得自巴斯夫公司（BASF，北卡羅來納州夏洛特）。
[0052] 光敏劑也可包括在合適的引發(fā)劑體系中。有代表性的光敏劑具有羰基或叔氨基或 其混合物。具有羰基的光敏劑包括二苯甲酮、苯乙酮、苯偶酰、苯醛、鄰氯苯醛、咕噸酮、噻噸 酮、9, 10-蒽醌和其它芳香酮。具有叔胺的光敏劑包括甲基二乙醇胺、乙基二乙醇胺、三乙 醇胺、苯基甲基乙醇胺和二甲基氨基乙基苯甲酸酯。市售的光敏劑包括QUANTI⑶RE ITX、 QUANTICURE QTX、QUANTICURE PTX、QUANTICURE EPD，得自比德爾索爾公司（Biddle Sawyer Corp.)〇
[0053] 通常，光敏劑或光引發(fā)劑體系的量了為約0. 01-10重量％。
[0054] 陽離子引發(fā)劑的例子包括鑰陽離子的鹽，如芳基锍鹽，以及有機金屬鹽如離子芳 烴體系。
[0055] 在各個實施方式中（其中單體在沉積在基材表面上之前稀釋在溶劑中），在聚合 之前去除溶劑。所述溶劑可以通過任何合適的機制或方法去除。如共同待審的申請中所述， 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在固化之前去除基本上所有的溶劑允許更好地控制固化動力學和轉(zhuǎn)化的單體的 量。當單體的轉(zhuǎn)化率增加時，減少了廢物產(chǎn)生和細胞毒性。
[0056] 無論在體相（基本上不含溶劑）或溶劑相中聚合，單體通過合適的引發(fā)機制聚合。 許多這些機制是本領(lǐng)域所熟知的。例如，可增加溫度以活化熱引發(fā)劑，通過暴露在合適的光 波長下來活化光引發(fā)劑等。根據(jù)許多實施方式，單體或單體混合物使用UV光固化。固化宜 在惰性氣體保護（如氮氣保護）下發(fā)生，以防止氧氣抑制。合適的UV光與氣體保護的結(jié)合 可增加聚合轉(zhuǎn)化率，確保涂層完整性并減少毒性。
[0057] 固化的合成聚合物層可用溶劑清洗一次或多次以去除雜質(zhì)如未反應的單體或低 分子量聚合物質(zhì)。在各個實施方式中，用乙醇溶劑清洗該層，例如大于約70%乙醇、大于約 90%乙醇、大于約95%乙醇或大于約99%乙醇。使用乙醇溶劑進行清洗不僅能夠用于去除 雜質(zhì)（該雜質(zhì)是毒性），還可用于在用細胞培養(yǎng)之前對表面進行消毒。
[0058] 3.在合成聚合物層上培養(yǎng)細胞
[0059] 如上所述，根據(jù)任何合適的方案，干細胞衍生的心肌細胞可在合成聚合物層上培 養(yǎng)。本文中使用的"干細胞衍生的心肌細胞"是指得自干細胞的分化的心肌細胞。在一些實 施方式中，干細胞是多能的（multipotent)，全能的或多能性（pluripotent)的干細胞。在 一些實施方式中，所述細胞可存在于個體的器官或組織中。在許多實施方式中，所述干細胞 是胚胎干細胞，如人類胚胎干細胞。
[0060] 因為人類胚胎干細胞（hES)具有在未分化的狀態(tài)下在培養(yǎng)物中連續(xù)生長的能力， 用于本發(fā)明中的hES細胞可得自創(chuàng)建的細胞系。已創(chuàng)建的人類胚胎干細胞系的例子包 括，但不限于Hl、H7、H9、H13或H14(得自威斯康星大學創(chuàng)建的WiCell) (Thompson(1998) Science 282:1145) ;hESBGN-01、hESBGN-02、hESBGN-03(佐治亞州雅典（Athens)的布雷 莎基因股份有限公司（BresaGen, Inc·)) ;HES-l、HES-2、HES-3、HES-4、HES-5、HES-6(得自 新加坡的ES細胞國際股份有限公司（ES Cell International，Inc·)) ;HSF-l、HSF-6(得 自舊金山的加州大學）3、I 3. 2、I 3. 3、I 4、I 6、I 6. 2、J 3、J 3. 2(得自以色列海 法的技術(shù)-以色列技術(shù)學院（Technion-Israel Institute of Technology)) ;UCSF_1 和 UCSF-2(Genbacev 等，F(xiàn)ertil. Steril. 83(5) :1517-29, 2005);系 HUES 1-17 (Cowan 等，NEJM 350(13):1353-56,2004);以及系 ACT-14 (Klimanskaya 等，Lancet，365 (9471): 1636-41， 2005)。用于本發(fā)明的胚胎干細胞也可直接得自原生胚胎組織。通常，在胚胞階段使用冷凍 的體外受精卵來進行，其可以另外地丟棄。
[0061] 本發(fā)明的心肌細胞也可從誘發(fā)的靈長類多能干（iPS)細胞分化。iPS細胞稱為得 自幼年或成年哺乳動物如人類的細胞，是基因改性的，例如通過用一種或多種合適的載體 轉(zhuǎn)染，使得其重組以獲得多能干細胞如hES細胞的表型。由這些重組的細胞獲得的表型特 點包括分離自胚胞的類似形態(tài)的干細胞，以及表面抗原表達、基因表達和未端酶活性類似 的胚胞衍生的胚胎干細胞。iPS細胞通常具有分化為至少一種細胞類型的能力，所述類型 選自原生胚層中的每一種：外胚層、內(nèi)胚層和中胚層，因此適于分化為心肌細胞。iPS細胞 如hES細胞在注入免疫缺陷的老鼠如SCID老鼠中時也形成畸胎瘤（Takahashi等，（2007) Celim (5):861 ;Yu 等，（2007)科學（Science) 318:5858)。
[0062] 干細胞衍生的心肌細胞可通過合適的方法得到。獲得這些細胞的一種方式描述 在 Laflamme 等的''Cardiomycocytes derived from human embryonbic stem cells in pro-survival factors enhance function of infracted rats'，，Nature Biotechnology, 25 :1015-1024(2007)。簡言之，未分化的人類胚胎干細胞如得自磁性H7人類胚胎干細胞系 的那些細胞可做種在涂覆有MATRIGEL的板上，密度約為100000細胞/cm 2,每日用hES細胞 生長介質(zhì)（K0 DMEM+20%血清置換，ImM 1-谷氨酰胺，1%NEAA，0.1 mM 2-ME+hbFGF(80ng/ ml)和TGFbl(0. 5ng/ml))重復進料。為了誘發(fā)分化，可用補充有約100ng/ml人類重組苯 丙酸諾龍A(得自R&D體系公司（R&D Systems))的RPMI-B27介質(zhì)（得自英威特根公司 (Invitrogen))置換生長介質(zhì)約24小時，然后用10ng/ml人類重組BMP4(得自R&D體系公 司）置換4天。當然，也可使用任何其它合適的方法（參見，例如美國專利7, 425, 448)。
[0063] 在種植細胞之前，所述細胞可以是收獲的并懸浮在合適的介質(zhì)中，所述介質(zhì)例如 生長介質(zhì)，其中要培養(yǎng)的細胞一次種植在表面上。例如，所述細胞可懸浮并培養(yǎng)在含血清的 介質(zhì)中、條件培養(yǎng)基中或化學限定的介質(zhì)中。本文中使用的"化學限定的介質(zhì)"是指不含未 知組合物的成分的細胞培養(yǎng)介質(zhì)。在各個實施方式中，化學限定的介質(zhì)可不含蛋白質(zhì)、水解 物（hydrosylate)或未知來源的肽。在一些實施方式中，條件培養(yǎng)基含有未知組成的多肽 或蛋白質(zhì)，例如重組的生長激素。由于化學限定的介質(zhì)的所有成分具有已知的化學結(jié)構(gòu)和 組成，可減少培養(yǎng)條件的可變性，因此細胞響應可變得更有再現(xiàn)性。另外，減少了污染的可 能性。此外，放大實驗的能力增強了，至少是因為上述原因?；瘜W限定的細胞培養(yǎng)介質(zhì)可購 自英威特根公司（Invitrogen Corporation，1600法拉第大街，PO Box 6482,卡爾斯巴德， 加州92008)，商品名為StemProli,-種完全限定的，不含血清和飼養(yǎng)物的介質(zhì)（SFM)，特別 配制用于人類胚胎干細胞（hESC)的生長和擴展；以及干細胞技術(shù)股份有限公司（StemCell Technologies, Inc.)，商品名為