，3H，Ph)，7.85 - 7.93(m，2H，Ph)，8.05 - 8.08(d，2H，Ph)，12.53(brs，lH，NH); MS(ESI) ：m/z540. 4(M++1).
[0043] 2- ((4-環(huán)己基一 5-乙基一 6-羰基一 1，6-二氫嘧啶）一2-巰基）一N - (4一甲氧基苯基）乙酰胺51^，白色粉末，產(chǎn)率：31%，111?:233.4 - 234.2°(：。1!1匪1?(0130， 300MHz)，δ (ppm) :〇· 91 - 0· 96 (t，3H，J = 7. 2Hz，CH3)，1. 14 - 1. 25 (m，2H，cyclohexyl)， I. 36 - I. 86(m，8H，cyclohexyl)，2. 32 - 2. 36(q，2H，J1= 6. 6Hz，J 2= 7. 5Hz，CH 2CH3)， 3.69(s，3H，0CH3)，3.96(s，2H，SCH 2)，6.84 - 6.87(d，2H，Ph)，7.49 - 7.52(d，2H，Ph)， 10. 13 (s，1H，NH)，12. 52 (brs，1H，NH) ;MS (ESI) :m/z402. 3 (M++l) ·
[0044] N -（4 一氯一 3 -（三氟甲基）苯基）一 2 -（(4 一環(huán)己基一 5 -乙基一 6 - 羰基一 1，6 -二氫嘧啶）一 2 -巰基）乙酰胺51，白色粉末，產(chǎn)率：33%，mp :189. 7 - 190.8 cC。1Hnmr(DmsojoomHz), δ (ppm) :1.08 - 1. 13 (t，3H，J = 7.2Hz，CH3)，1· 17 - I. 35 (m，3H，cyclohexyl)，I. 66 - I. 98 (m，7H，cyclohexyl)，2· 51 - 2· 56 (q，2H，J1= 6. 6Hz， J2= 7. 5Hz，CH2CH3)，2· 75 - 2. 87(m，1H，cyclohexyl)，4· 06(s，2H，SCH2)，7· 36(s，1H，Ph)， 7. 40 - 7. 43 (d，1H，Ph)，7. 76 - 7. 79 (d，1H，Ph)，7. 91 (s，1H，NH)，9. 52 (s，1H，NH) ;MS (ESI): m/z474(M++l).
[0045] 2- ((4-環(huán)己基一 5-乙基一 6-羰基一 1，6-二氫嘧啶）一2-巰基）一N - (4 -磺酰胺苯基）乙酰胺5m，白色粉末，產(chǎn)率：32%，mp :204. 6 - 205. 5°C。iNMlUDMSO， 300MHz)，δ (ppm) :0.94 (t，3H，J = 6.8Hz，CH3)，I. 16- 1.55 (m，10H，cyclohexyl)，2.35 (q， 2H，J = 7.0Hz，CH2CH3)，4.04 (s，2H，SCH2)，7.24 (s，2H，NH2)，7.76 (s，4H，Ph)，10.61 (s，lH， NH)，12.51(brs，lH，NH) ;MS(ESI) :m/z451.2(M++l).
[0046] 2 -（(4 一環(huán)己基一 5 -乙基一 6 -羰基一 1，6 -二氫嘧啶）一 2 -巰基）一 N -（3,4 一二甲氧基苯基）乙酰胺5n :白色粉末，產(chǎn)率：24%，mp :209. 3 - 209.8°C。 1HMffi(DMSOJOOMHz), δ (ppm) :0.94 (d，3H，J = 6. 6Hz，CH3)，1.18 - 1.86 (m，10H， cyclohexyl)，2· 35 (d，2H，J = 6. 6Hz，CH2CH3)，2· 57 (s，1H，cyclohexyl)，3· 69 (s，6H，OCH3)， 3. 96(s，2H，SCH2)，6. 87(d，1H，J = 8. 4Hz，Ph)，7. 10(d，1H，J = 8. lHz，Ph)，7. 31(s，lH，Ph)， 10. 12 (s，1H，NH)，12. 52 (brs，1H，NH) ;m/z432. 2 (M++l) ·
[0047] 2 -（(4 一環(huán)己基一 5 -乙基一 6 -羰基一 1，6 -二氫嘧啶）一 2 -巰基）一 N- (4 -氟苯基）乙酰胺 5〇:白色粉末，產(chǎn)率：34%，mp :231. 1 - 232. 4°C。1HNMR(DMS0， 300MHz)，δ (ppm) :0.92 (t，3H，J = 6.9Hz，CH3)，I. 15- 1.60 (m，10H，cyclohexyl)，2.34 (q， 2H，J = 7. 2Hz，CH2CH3)，2. 53(s，lH，cyclohexyl)，3. 97(s，2H，SCH2)，7. 12(t，2H，J = 8. 7Hz， Ph)，7. 60 - 7. 64 (m，2H，Ph)，10. 35 (s，1H，NH)，12. 51 (brs，1H，NH) ;m/z390. 2 (M++l) ·
[0048] 實(shí)施例4 :體外抗HCV活性實(shí)驗(yàn)
[0049] 采用人肝癌細(xì)胞株Huh7. 5. 1進(jìn)行體外細(xì)胞水平抗HCV活性評(píng)價(jià)。方法描述如下：
[0050] MTT法檢測(cè)藥物細(xì)胞毒性：取對(duì)數(shù)生長期的Huh 7. 5. 1細(xì)胞，以9X 103cells/well 細(xì)胞鋪于96孔板，貼壁5小時(shí)后，加入2 μ L DMSO梯度稀釋藥物，5倍稀釋，5個(gè)稀釋度，每 個(gè)梯度設(shè)有三個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照（只含培養(yǎng)基）、細(xì)胞對(duì)照、藥物顏色對(duì)照、DMSO 對(duì)照及抗HCV陽性藥物利巴韋林對(duì)照，終體積200 μ L/we11。將培養(yǎng)板置于37 °C、5 % 0)2培 養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。第三天于實(shí)驗(yàn)孔加入20 μ L的5mg/mL MTT溶液，37°C、5% CO2孵育4小時(shí)。 棄去上清，加入150 μ L/well的DMS0,振蕩溶解10分鐘后，于酶標(biāo)儀上測(cè)定OD49。的值，并以 Graphad Prism 5. 0計(jì)算藥物IC5。(IC5。:半數(shù)抑制濃度，將細(xì)胞生長抑制50%所需的濃度） 的值。計(jì)算公式：細(xì)胞生長抑制率（％) = (1 -試驗(yàn)孔OD值/對(duì)照孔OD值）X 100%。
[0051] HCV復(fù)制抑制試驗(yàn)：取對(duì)數(shù)生長期的Huh 7. 5. 1細(xì)胞，以9X 103cells/well細(xì)胞鋪 于96孔板，貼壁5小時(shí)后，加入2 μ L DMSO梯度稀釋藥物，5倍稀釋，5個(gè)稀釋度，每個(gè)梯度 設(shè)有三個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)加入病毒，設(shè)細(xì)胞對(duì)照、病毒對(duì)照、抗HCV陽性對(duì)照（IFNa - Ib及利 巴韋林）、DMSO對(duì)照，終體積200 μ L/we11。將培養(yǎng)板置于37°C、5 % CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，3 天后收集上清3000rpm/min離心10min，取澄清上清進(jìn)行RNA載量檢測(cè)。以Graphad Prism 5. 0計(jì)算HCV復(fù)制抑制率及EC5。(EC5。:半數(shù)效應(yīng)濃度，引起受試對(duì)象50 %個(gè)體產(chǎn)生一種特定 效應(yīng)的藥物劑量）。計(jì)算公式：HCV復(fù)制抑制率（％) = (1-試驗(yàn)孔HCV RNA載量/對(duì)照 孔 HCV RNA 載量）X 100%
[0052] 抗HCV藥效評(píng)價(jià)：治療指數(shù)（Therapeutic index，TI)為藥物對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃 度IC5。和對(duì)病毒的半數(shù)效應(yīng)濃度的比值，代表藥物的安全性，此數(shù)值越大越安全。
[0053] 以抗HCV臨床治療藥物Ribavirin和IFN α - lb (IU/ml)作為陽性對(duì)照。按上述 方法對(duì)合成的化合物（5a - 〇)進(jìn)行了藥物細(xì)胞毒性和抗HCV病毒活性篩選，具體測(cè)試數(shù) 據(jù)（IC5。、EC5。及TI值）參見表2,從表中可見，所測(cè)化合物中有11個(gè)化合物治療指數(shù)高于 Ribavirin，其中5a、5b、5d、5e等四個(gè)化合物的治療指數(shù)比Ribavirin高59 - 198倍，可作 為抗HCV的候選物進(jìn)一步研究開發(fā)。
[0054] 表 2 化合物 5a - 1 的 EC5。、IC5。及 TI 值

【主權(quán)項(xiàng)】
1. 多取代1，6 -二氫嘧啶類化合物，其特征在于為2 -（ (4 一環(huán)己基一 5 -乙基一 6 - 羰基一 1，6 -二氫嘧啶）一 2 -巰基）一N-（取代苯基）乙酰胺類化合物，結(jié)構(gòu)通式為：其中：R2為：3'，5'一2Me、2'，4'一2F、2'一CF3、3'，5'一2F、2'一F'、4'一F、2'，5'一2C1、4' 一Br、2' 一Br、4' 一CF3、PhC0NHS02-、4' 一 0Me、3'，4' 一 20Me、4 -S02NH2、3' 一 CF3- 4? -Cl〇2. 如權(quán)利要求1所述的2 -（(4 一環(huán)己基一 5 -乙基一 6 -羰基一 1，6 -二氫嘧 啶）一 2 -巰基）一N-（取代苯基）乙酰胺類化合物的制備方法，其特征在于：以6-環(huán) 己基-5-乙基-2-硫基-2, 3-二氫嘧啶-4 (1H)-酮為原料，在溶劑A中與各2-溴代取代苯 乙酰胺經(jīng)N-氮烷基化反應(yīng)制備目標(biāo)化合物，其中以6-環(huán)己基-5-乙基-2-硫基-2, 3-二 氫嘧啶-4 (1H)-酮與各2-溴代取代苯乙酰胺的摩爾比為1 :1~1.5,反應(yīng)溶劑A為吡啶、 DMF、二氯甲烷其中的一種或它們的混合物，反應(yīng)溫度為25~80°C，反應(yīng)時(shí)間為5~12小 時(shí)。3. 如權(quán)利要求1所述的2 -（(4 一環(huán)己基一 5 -乙基一 6 -羰基一 1，6-二氫嘧啶）一 2-巰基）一N-（取代苯基）乙酰胺類化合物的用途，其特征在于作為制備抗丙型肝炎病 毒藥物的活性成分候選物。
【專利摘要】多取代1，6－二氫嘧啶類化合物、其合成方法及用途，屬藥物技術(shù)領(lǐng)域。產(chǎn)品為一種2－((4－環(huán)己基－5－乙基－6－羰基－1，6－二氫嘧啶)－2－巰基)－N－(取代苯基)乙酰胺類化合物，結(jié)構(gòu)通式：其中，R2為3’，5’－2Me、2’，4’－2F、2’－CF3、3’，5’－2F、2’－F’、4’－F、2’，5’－2Cl、4’－Br、2’－Br、4’－CF3、PhCONHSO2－、4’－OMe、3’，4’－2OMe、4－SO2NH2、3’－CF3－4’－Cl。同時(shí)公開了產(chǎn)品的制備方法。產(chǎn)品用途是作為制備抗丙型肝炎病毒藥物的活性成分候選物。產(chǎn)品合成便利，對(duì)HCV病毒具有明顯的抑制作用。
【IPC分類】C07D239/56, A61P31/14
【公開號(hào)】CN105384696
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510716835
【發(fā)明人】何嚴(yán)萍, 夏雪山, 伍道春, 馮悅, 張艷, 李聰
【申請(qǐng)人】云南大學(xué), 昆明理工大學(xué)
【公開日】2016年3月9日
【申請(qǐng)日】2015年10月29日