善卷煙抽吸品質(zhì)的新添加劑制備。
[0029] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明 加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0030] 本發(fā)明所用原料不受地區(qū)和品種限制，任何來源地的煙草均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，下 面以來源于云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司不同產(chǎn)地的煙草原料對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。除非 另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者， 按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注 明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。本發(fā)明中的溶液如果只給出了溶質(zhì)，沒 有公開溶劑，則本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉溶劑為水。本發(fā)明中純甲醇指100 %甲醇，純乙醇 是指100%乙醇，純丙酮是指100 %丙酮。
[0031] 實(shí)施例1
[0032] -種倍半萜類化合物C15H22O2的制備方法，具體包括以下步驟：
[0033] (1)制備煙草提取物浸膏：以煙葉為原料，將煙葉粉碎或切成小段，并用第一溶劑 浸泡并提取所述煙葉4次，每次54h，將提取液合并、過濾并濃縮后得到所述煙草提取物浸 膏；其中所述第一溶劑是選自甲醇、乙醇或丙酮的有機(jī)溶劑與水的混合物，當(dāng)所述第一溶劑 為甲醇或乙醇與水的混合物時(shí)，其中甲醇或乙醇占該第一溶劑的95wt%，當(dāng)所述第一溶劑 為丙酮與水的混合物時(shí)，其中丙酮占該第一溶劑的70wt% ;且第一溶劑：煙草=3:1，重量 比；
[0034] (2)硅膠柱層析：將所述煙草提取物浸膏用其2. 5重量倍的選自純甲醇、純乙醇 或純丙酮的第二溶劑溶解后與為煙草提取物浸膏的1. 2重量倍的80~100目硅膠拌樣， 再與煙草提取物浸膏3重量倍的250目硅膠混合后干法裝柱，然后用體積比依次為1:0、 20:1、9:1、8:2、7:3、6: 4、1:1和1:2的氯仿-丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，將其中體積為8:2的 氯仿-丙酮溶液洗脫時(shí)得到的洗脫液稱為第一洗脫液；
[0035] (3)超臨界流體色譜分離純化：將上述第一洗脫液通入超臨界流體色譜進(jìn)行分離 純化，該超臨界流體色譜采用IOmmX 150mm，5 μ m的Silica 2-EP色譜柱，流動(dòng)相二氧化碳 /甲醇（88/12%，質(zhì)量比），流動(dòng)相流速為28mL/min，紫外檢測器檢測波長為250nm，第一洗 脫液液每次進(jìn)樣200 μ L，收集每次進(jìn)樣后色譜峰保留時(shí)間為10. 20min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫液， 稱為第二洗脫液，將該第二洗脫液脫除溶劑后即得所述倍半萜化合物。
[0036] 所述制備方法還包括以下進(jìn)一步提純的步驟：將在所述超臨界流體色譜分離之后 得到的所述倍半萜化合物再次溶于純甲醇，并以純甲醇為流動(dòng)相，通過凝膠柱進(jìn)行層析分 離，得到進(jìn)一步提純的所述倍半萜化合物。
[0037] 實(shí)施例2
[0038] 所用煙草樣品來源于云南玉溪，品種為玉溪K326。將煙葉取樣2. Okg粉碎以95% 的甲醇提取5次，每次提取24h，提取液合并，過濾，減壓濃縮得煙草提取物浸膏105g。將上 述煙草提取物浸膏用其2. 0重量倍數(shù)的純甲醇溶解后用120g的100目粗硅膠拌樣，再與 0. 6kg的160目硅膠混合后裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用體積配比為1:0、20:1、9:1、8 :2、7:3、 6: 4、I: I、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中體積配 比為8:2的氯仿-丙酮洗脫部分用超臨界流體色譜進(jìn)行分離純化，該超臨界流體色譜采用 IOmmX 150mm，5 μπι的Silica 2-EP色譜柱，流動(dòng)相二氧化碳/甲醇（88/12%，質(zhì)量比），流 動(dòng)相流速為28mL/min，紫外檢測器檢測波長為250nm，每次進(jìn)樣200 μ L，收集每次進(jìn)樣后色 譜峰保留時(shí)間為10. 20min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫液，多次累加后脫除溶劑；所得產(chǎn)物再次用純甲 醇溶解，再以純甲醇為流動(dòng)相，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，即得進(jìn)一步提純的倍半 萜化合物。
[0039] 其中，梯度洗脫時(shí)，每個(gè)比例的混合溶劑洗脫時(shí)，洗脫到?jīng)]有成分洗下為止，然后 換下一個(gè)比例的混合溶劑。
[0040] 實(shí)施例3
[0041] 所用煙草樣品來源于云南大理，品種為云煙200。將煙葉取樣3. 5kg切碎，以95% 的乙醇提取4次，每次提取48h，提取液合并，過濾，減壓濃縮得煙草提取物浸膏250g。將 上述煙草提取物浸膏用其2. O重量倍的純甲醇溶解后用250g的80目粗硅膠拌樣，再與 I. 2kg的200目硅膠混合后裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用體積配比為1:0、20:1、9:1、8 :2、7:3、 6: 4、I: I、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中體積配 比為8:2的氯仿-丙酮洗脫部分用超臨界流體色譜進(jìn)行分離純化，該超臨界流體色譜采用 IOmmX 150mm，5 μπι的Silica 2-EP色譜柱，流動(dòng)相二氧化碳/甲醇（88/12%，質(zhì)量比），流 動(dòng)相流速為28mL/min，紫外檢測器檢測波長為250nm，每次進(jìn)樣200 μ L，收集每次進(jìn)樣后色 譜峰保留時(shí)間為10. 20min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫液，多次累加后脫除溶劑；所得產(chǎn)物再次用純甲 醇溶解，再以純甲醇為流動(dòng)相，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，即得進(jìn)一步提純的倍半 萜化合物。
[0042] 其中，梯度洗脫時(shí)，每個(gè)比例的混合溶劑洗脫時(shí)，洗脫到?jīng)]有成分洗下為止，然后 換下一個(gè)比例的混合溶劑。
[0043] 實(shí)施例4
[0044] 所用煙草樣品來源于云南昆明，品種為紅花大金元。將煙葉取樣5kg粉碎，以 75 %的丙酮用超聲提取3次，每次提取72h，提取液合并，過濾，減壓濃縮得煙草提取物浸膏 380g。將上述煙草提取物浸膏用其1. 6重量倍的純甲醇溶解后用400g的90目粗硅膠拌樣， 再與2.41^的180目硅膠混合后裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用體積配比為1 :0、20:1、9:1、8:2、 7:3、6:4、1 :1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中 體積配比為8:2的氯仿-丙酮洗脫部分用超臨界流體色譜進(jìn)行分離純化，該超臨界流體色 譜采用IOmmX 150mm，5 μπι的Silica 2-EP色譜柱，流動(dòng)相二氧化碳/甲醇（88/12%，質(zhì)量 比），流動(dòng)相流速為28mL/min，紫外檢測器檢測波長為250nm，每次進(jìn)樣200 μ L，收集每次進(jìn) 樣后色譜峰保留時(shí)間為10. 20min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫液，多次累加后脫除溶劑；所得產(chǎn)物再次 用純甲醇溶解，再以純甲醇為流動(dòng)相，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，即得進(jìn)一步提純 的倍半萜化合物。
[0045] 其中，梯度洗脫時(shí)，每個(gè)比例的混合溶劑洗脫時(shí)，洗脫到?jīng)]有成分洗下為止，然后 換下一個(gè)比例的混合溶劑。
[0046] 實(shí)施例5-化合物結(jié)構(gòu)的鑒定
[0047] 取實(shí)施例1制備的化合物，該倍半萜類化合物的結(jié)構(gòu)通過以下方法測定出來的； 化合物為淺黃色膠狀物；紫外光譜（溶劑為甲醇），λ _ (log ε ) 2210 (4. 09)，250 (3. 50) nm ; 紅外光譜（溴化鉀壓片）vnax 3382, 2913,1602,1535,1450,1136,1063,865cm % 高分辨質(zhì) 譜（HRES頂S)給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 233. 1546 [M-H](計(jì)算值233. 1542)。結(jié)合1H和13C NMR譜給出一個(gè)分子式C15H 22O2，不飽和度為5。其紅外光譜顯示有羥基（3382cm1)和苯環(huán) (1602,1535,1450cm 4功能團(tuán)；紫外光譜在250nm處有強(qiáng)吸收，也證實(shí)化合物中存在共輒結(jié) 構(gòu)。從1H和13CNMR譜（數(shù)據(jù)歸屬見表-1)信號(hào)可以看出化合物中有一個(gè)1，2, 3, 4, 5-五取 代的苯環(huán)、一個(gè)3-羥基丙基、三個(gè)甲基、兩個(gè)亞甲基、一個(gè)