-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表2。
陽(yáng)0測(cè)實(shí)施例3
[0029] 將PPP(0. 74g)與混合的游離脂肪酸（1. 76g)摩爾比1:7混合后，加入sn-1，3位 特異性脂肪酶LipozymeRMIM6% (0.15g)，放入60°C水浴搖床中反應(yīng)化。
[0030] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0. 5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表3。
[0031]
陽(yáng)0巧實(shí)施例4
[0033] 將PPP(0. 74g)與混合的游離脂肪酸（1. 76g)摩爾比1:7混合后，加入sn-1，3位 特異性脂肪酶LipozymeRMIM10% (0.25g)，放入70°C水浴搖床中反應(yīng)化。
[0034] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0. 5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表4。
[0036] 實(shí)施例5
[0037] 將PPP(0. 93g)與混合的游離脂肪酸（1. 57g)摩爾比1:5混合后，加入sn-1，3位 特異性脂肪酶LipozymeRMIM10% (0. 25g)，反應(yīng)溫度為60°C，微波強(qiáng)化功率為100W，時(shí) 間 60min。
[0038] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0.5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表5。
1^0040] a:未檢測(cè)到 陽(yáng)OW 實(shí)施例6
[0042] 將PPP(0. 62g)與混合的游離脂肪酸（1. 88g)摩爾比1:9混合后，加入sn-1，3位 特異性脂肪酶LipozymeRMIM8% (0. 20g)，反應(yīng)溫度為50°C，微波強(qiáng)化功率為100W，時(shí)間 60min。
[0043] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0. 5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表6。
W45]a:未檢測(cè)到
[0046] 實(shí)施例7
[0047] 將PPP(0. 74g)與混合的游離脂肪酸（1. 76g)摩爾比1:7混合后，加入sn-1，3位 特異性脂肪酶LipozymeRMIM10% (0. 25g)，反應(yīng)溫度為50°C，微波強(qiáng)化功率為100W，時(shí) 間 30min。
[0048] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0. 5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表7。
[0050] a:未檢測(cè)到 陽(yáng)0川 實(shí)施例8
[0052] 將PPP(0. 74g)與混合的游離脂肪酸（1. 76g)摩爾比1:7混合后，加入sn-1，3位 特異性脂肪酶LipozymeRMIM10% (0. 25g)，反應(yīng)溫度為30°C，微波強(qiáng)化功率為100W，時(shí) 間 60min。
[0053] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0.5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表8。
[0054]
陽(yáng)〇5引 a:未檢測(cè)到
[0056] 實(shí)施例9
[0057] 將PPP(0. 74g)與混合的游離脂肪酸（1. 76g)摩爾比1:7混合后，與sn-1，3位特異 性脂肪酶LipozymeRMIM10% (0.25g)，分別放在盛有3A分子篩（aw<〇. 01)的密閉玻璃容 器內(nèi)，室溫下平衡3天后取出并混合。反應(yīng)溫度為50°C，微波強(qiáng)化功率為100W，時(shí)間60min。
[0058] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0. 5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表9
W60]a:未檢測(cè)到 陽(yáng)OW] 實(shí)施例10 陽(yáng)06引將PPP(0.74g)與混合的游離脂肪酸（1.76g)摩爾比1:7混合后，與sn-l，3位特 異性脂肪酶LipozymeRMIM10% (0.25g)，分別放在盛有飽和化Cl溶液（aw= 0.75)的 密閉玻璃容器內(nèi)，室溫下平衡3天后取出并混合。反應(yīng)溫度為50°C，微波強(qiáng)化功率為100W， 時(shí)間60min。
[0063] 反應(yīng)結(jié)束后取出500yL，加入60mg豬膜脂肪酶水解3min，用乙酸萃取，取有機(jī)層 進(jìn)行薄層層析，刮取sn-2位單甘脂條帶。加入2血正己燒和2血0. 5molKOH-甲醇溶液在 65°C水浴搖床中反應(yīng)60min進(jìn)行甲醋化，然后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，測(cè)得產(chǎn)物油脂中各脂肪 酸含量如下表10。
W65]a:未檢測(cè)到 [0066] 實(shí)施例11
[0067] 本方法定向合成的HMFS中總脂肪酸及sn-2位脂肪酸含量與母乳脂肪的對(duì) 比情況如表11所示。與母乳脂肪相比，本方法制得的反應(yīng)終產(chǎn)物中油酸結(jié)合率高達(dá) 54. 40 + 1. 76%，富含短碳鏈脂肪酸，且其sn-2位棟桐酸含量相對(duì)較高，有利于促進(jìn)嬰幼兒 的消化吸收。
[0068] 表11.本方法制備的HMFS中總脂肪酸及sn-2位脂肪酸與母乳脂肪對(duì)比
陽(yáng)070] a：未檢巧Ij|^;b:JournalofAgriculturalandFood Qiemistry. 2012, 61(I):167-175.
[0071] 注：表11中所述HMFS具體數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)實(shí)施例10。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種微波中酶促混合脂肪酸合成母乳脂肪替代品的制備方法，其特征在于其步驟 為： 1) 水活度的控制方法：分別將3A，分子篩及LiBr、LiCl、CH3C00K、Mg(NO3)2? 6H20、 NaCl、KCl、K2Cr2O7配制成飽和溶液放置于密閉的容器中，室溫下3A分子篩用于控制水活度 < 0? 01，各個(gè)飽和溶液所控制的水活度分別為0? 05、0. 11、0. 23、0. 54、0. 75、0. 85、0. 95 ;將 通過(guò)尿素包合法純化得到的游離脂肪酸橄欖油、椰子油和藻油按照質(zhì)量比為70:15:15~ 98:1:1混合，與棕櫚酸甘三酯一起作為脂肪酶酶促酯交換的底物，并將游離脂肪酸混合物 和棕櫚酸甘三酯混合置于同一反應(yīng)瓶中，將反應(yīng)瓶及盛有脂肪酶的濾紙分別放入各個(gè)密閉 的容器中于室溫下平衡2-3d; 2) 脂肪酶催化酸解：上步平衡結(jié)束后，取出底物、脂肪酶放入螺口玻璃瓶密閉，分別在 恒溫水域搖床及微波反應(yīng)器中進(jìn)行酶法酯交換反應(yīng)，所述棕櫚酸甘三酯與混合游離脂肪酸 的混合質(zhì)量比為1:1~1:15,酯交換反應(yīng)后，經(jīng)減壓蒸餾分離出反應(yīng)所得到的油脂并精煉， 即得母乳脂肪替代物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述微波中酶促混合脂肪酸合成母乳脂肪替代品的制備方法，其 特征在于所述脂肪酶為L(zhǎng)ipozymeRMIM、LipozymeIM60、LipozymeIM20、LipaseSP435、 LipaseSP382、Candidarugosalipase、LipaseMC7、LipozymeTLIM、Novozym435、 CandidaantarcticalipaseB、R275Alipase或豬膜脂肪酶。3. 根據(jù)權(quán)利要求I所述微波中酶促混合脂肪酸合成母乳脂肪替代品的制備方法，其特 征在于所述配制成飽和溶液的溶劑為乙醇、正丁醇、正己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯或乙酸丁酯。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述微波中酶促混合脂肪酸合成母乳脂肪替代品的制備方法，其特 征在于所述脂肪酶占反應(yīng)體系的質(zhì)量比例為1%~15%，所述酶法酯交換反應(yīng)的反應(yīng)溫度 為30~80°C，反應(yīng)時(shí)間為15~120min。5. 權(quán)利要求1~4任一所述方法制備得到的母乳脂肪替代品。
【專利摘要】一種微波中酶促混合脂肪酸合成母乳脂肪替代品及其制備方法，分別將分子篩及飽和鹽溶液放置于密閉的容器中以控制水活度；將通過(guò)尿素包合法純化得到的游離脂肪酸橄欖油、椰子油和藻油混合，與棕櫚酸甘三酯一起作為脂肪酶促酯交換的底物，混合置于同一反應(yīng)瓶中，將反應(yīng)瓶及盛有脂肪酶的濾紙分別放入各個(gè)密閉的容器中于室溫下平衡；上步平衡結(jié)束后，取出底物、脂肪酶放入螺口玻璃瓶密閉，分別在恒溫水域搖床及微波反應(yīng)器中進(jìn)行酶法酯交換反應(yīng)，經(jīng)減壓蒸餾分離出反應(yīng)所得到的油脂并精煉，即得母乳脂肪替代物。本發(fā)明反應(yīng)終產(chǎn)物中富含DHA且其sn-2位上的棕櫚酸含量也相對(duì)較高，可以保證與天然母乳脂肪中sn-2位上棕櫚酸含量相當(dāng)。
【IPC分類】C12P7/64
【公開號(hào)】CN105219811
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510528796
【發(fā)明人】朱蔚杰, 王彥齋, 邢星星, 劉曦, 趙星宇, 朱丹, 梅藝苑, 王俊
【申請(qǐng)人】江蘇科技大學(xué)
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年8月25日