液體高鹽高 酪選擇培養(yǎng)基(鹽度5%、苯酪濃度700mg/L)的錐形瓶中，置于30°C、轉(zhuǎn)速為16化/min的恒 溫振蕩器上振蕩培養(yǎng)4化獲得馴化菌液。
[0025] (5)梯度稀釋馴化菌液，稀釋梯度分別為10 1、10 2、10 3、10 4、10 5,分別取ImL馴化 菌液加到固體高鹽高酪選擇培養(yǎng)基(鹽度5%、苯酪濃度700mg/L)平板中，涂布法涂勻，置于 3(TC恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7化左右，獲得單菌落。
[00%] (6)利用之字劃線、=區(qū)劃線繼續(xù)純化所獲得單菌落，液體、固體高鹽高酪選擇培 養(yǎng)基(鹽度5%、苯酪濃度700mg/L)交替培養(yǎng)馴化，加速篩菌過程，重復(fù)多次操作獲得白色、 圓形、表面和邊緣較為光滑的純菌落，將其命名為脫酪嗜鹽菌JS4。 W27] 脫酪嗜鹽菌JS4ITS區(qū)域rDNA序列如沈QIDNO. 1所示，經(jīng)提交Genbank數(shù) 據(jù)庫化ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov)進行對比，鑒定菌株JS4為德己利氏酵母屬 (化化TJO巧rcessp.)。菌株JS4于2015年10月13日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、(地 址：中國.武漢.武漢大學(xué))，其分類命名為化AsiTO巧rcesSP.JS4,保藏編號為CCTCCNO: M2015603。 陽02引菌株JS4可在苯酪濃度0~1200mg/L范圍內(nèi)、鹽度0%~15%范圍內(nèi)、pH值4. 0~ 10. 0范圍內(nèi)W苯酪為唯一碳源和能源穩(wěn)定存在并降解苯酪。
[0029] 實施例2 通過試驗對脫酪嗜鹽菌JS4在高鹽環(huán)境中的脫酪特性進行研究。方法為：將平板上的JS4單菌落W2接種環(huán)/IOOmL的接種量接種于盛有牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基（IOg蛋白腺、5g牛 肉膏、5gNaCl,加蒸饋水至1000 mL)的搖瓶中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為16化/min的條件下培 養(yǎng)2d后再W10%接種量接種于盛有液體高鹽高酪選擇培養(yǎng)基(鹽度5%、苯酪濃度700mg/L) 的搖瓶中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為16化/min的條件下培養(yǎng)2d作為種液。將種液隨后W5% 的接種量接種于盛有液體高鹽高酪選擇培養(yǎng)基(鹽度5%、苯酪濃度700mg/L)的搖瓶中，在 溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為16化/min的條件下培養(yǎng)72h，期間連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液中苯酪濃度及培養(yǎng) 液ODe。。的變化情況，研究菌株JS4對苯酪的降解及W苯酪為唯一碳源和能源的生長情況， 結(jié)果如圖1所示。
[0030] 從圖1可W看出，在抑6. 8~7. 2、溫度30°C、鹽度5%的條件下，7化內(nèi)菌株JS4對 700mg/L苯酪的去除率超過99%。ODe。。可反映菌株的生長情況，而ODe。。的升高伴隨著苯酪 濃度的降低說明脫酪嗜鹽菌JS4可利用苯酪為唯一碳源和能源合成自身營養(yǎng)物質(zhì)W進行 繁殖。 陽0川 實施例3 通過試驗對脫酪嗜鹽菌JS4在不同苯酪濃度、抑及鹽度中的生長及脫酪特性進行研 究。
[0032] (1)不同苯酪濃度對菌株生長及脫酪效果影響情況試驗方法為：將JS4種液（JS4 種液的制備同實施例2)W5%的接種量分別接種于盛有不同苯酪濃度的液體高鹽高酪選擇 培養(yǎng)基(鹽度5% ;苯酪濃度lOOmg/L~1300mg/l，苯酪濃度梯度為lOOmg/L)的搖瓶中，在溫 度為30°C、轉(zhuǎn)速為16化/min的條件下培養(yǎng)72h，期間連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液中苯酪濃度及培養(yǎng)液 ODe。。的變化情況。
[0033] 菌株JS4在不同苯酪初始濃度下的生長情況如圖2所示，當(dāng)苯酪濃度低于1300mg/ L時，培養(yǎng)液ODe。。具有不同程度的增長，由此說明，菌株JS4能夠生長的苯酪濃度范圍是 0 ~1200mg/L。
[0034] 通過分析菌株JS4對不同初始濃度苯酪的平均去除速率可知，500mg/L為最適苯 酪濃度，在5%鹽度下，菌株JS4在36h內(nèi)可將初始濃度為500mg/L的苯酪降解。
[0035] (2)不同抑對菌株生長及脫酪效果影響情況試驗方法為：將JS4種液W5%的接種 量分別接種于盛有不同抑的液體高鹽高酪選擇培養(yǎng)基（抑分別為3. 0、4. 0、5. 0、6. 0、7. 0、 8. 0、9. 0、10. 0、11. 0,鹽度5%，苯酪濃度500mg/L)的搖瓶中，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為160r/ min的條件下培養(yǎng)72h，期間連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液中苯酪濃度及培養(yǎng)液ODe。。的變化情況。
[0036] 菌株JS4在不同抑下的生長情況如圖3所示，當(dāng)抑為6. 0時培養(yǎng)液ODe。。值最大， 故抑=6. 0為菌株JS4最適生長抑。當(dāng)抑達到10. 0時，菌株JS4生長明顯受到抑制，而在 抑為3. 0或11. 0時，未發(fā)現(xiàn)菌株JS4生長，故菌株JS4能夠生長的抑范圍是4. 0~10. 0。
[0037] 通過分析苯酪的平均去除速率可知，當(dāng)抑范圍為5. 0~8. 0,初始苯酪濃度為 500mg/L時，菌株JS4在36h內(nèi)的苯酪去除率可達到99%W上。
[0038] (3)不同鹽度對菌株生長及脫酪效果影響情況試驗方法為：將JS4種液W5%的接 種量分別接種于盛有不同鹽度的液體高鹽高酪選擇培養(yǎng)基（鹽度分別為〇%、1%、3%、5%、7%、 9%、11%、13%、15%、17%，苯酪濃度50〇111旨/1)的搖瓶中，在溫度為30°(：、轉(zhuǎn)速為16化/111111的條 件下培養(yǎng)72h，期間連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液中苯酪濃度及培養(yǎng)液ODe。。的變化情況。
[0039] 菌株JS4在不同鹽度下的生長情況如圖4所示，當(dāng)鹽度為1%時培養(yǎng)液ODe。。值最 大，故1%鹽度為菌株JS4最適生長鹽度。當(dāng)鹽度達到13%時，菌株JS4生長明顯受到抑制， 而在鹽度達到17%時，未發(fā)現(xiàn)菌株JS4生長，故菌株JS4能夠生長的鹽度范圍是0%~15%。
[0040] 通過分析苯酪的平均去除速率可知，當(dāng)鹽度范圍為0%~5%、初始苯酪濃度為 500mg/L時，菌株JS4在36h內(nèi)的苯酪去除率可達到99%W上。
【主權(quán)項】
1. 一種脫酚嗜鹽菌，其特征在于：保藏編號為CCTCCNO:M2015603。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫酚嗜鹽菌，其特征在于：所述的脫酚嗜鹽菌在苯酚濃度 0~1200mg/L范圍內(nèi)、鹽度0%~15%范圍內(nèi)、pH值4. 0~10. 0范圍內(nèi)以苯酚為唯一碳源 和能源穩(wěn)定存在并降解苯酚。3. 權(quán)利要求1所述的脫酚嗜鹽菌在含苯酚廢水處理中的應(yīng)用。4. 權(quán)利要求1所述的脫酚嗜鹽菌在制備生物脫酚菌劑中的應(yīng)用。5. -種生物脫酚菌劑，其特征在于：包含權(quán)利要求1所述的脫酚嗜鹽菌。6. -種用于篩選高效脫酚嗜鹽菌的高鹽高酚選擇培養(yǎng)基，其特征在于：其配制為：取 2. Og KH2PO4U. 3g K2HPO4、一定量NaCl、0.1 g NH4CU-定量苯酚和ImL微量元素液，加蒸 餾水至lOOOmL，調(diào)節(jié)pH 6. 8~7. 2,121°C下滅菌20min ;其中，微量元素液的配制為：取 0? Olg FeCl3 ? 6H20、0. 15g H3B03、0. 03g CuSO4 ? 5H20、0. 18g KI、0. 12g MnCl2 ? 4H20、0. 06g Na2MoO4 ? 2H20、0. 12g ZnSO4 ? 7H20、0. 15g CoCl2 ? 6H20、IOg EDTA，加蒸餾水至 lOOOmL。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脫酚嗜鹽菌及其應(yīng)用，屬于生物工程、環(huán)境工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的脫酚嗜鹽菌為保藏編號為CCTCC？NO：M？2015603的JS4菌株，該菌株可在苯酚濃度0～1200mg/L范圍內(nèi)、鹽度0%～15%范圍內(nèi)、pH值4.0～10.0范圍內(nèi)以苯酚為唯一碳源和能源穩(wěn)定存在并降解苯酚。菌株JS4在好氧條件下對苯酚具有較強降解能力，可用于含苯酚廢水的處理，去除廢水中的苯酚；也可用于制備生物脫酚菌劑。菌株JS4作為脫酚嗜鹽菌，通過自身氧化分解過程降解目標有機污染物苯酚，具有能耗低、投資成本和運行費用少，工藝簡單等特點。CCTCC NO：M 201560320151013
【IPC分類】C12R1/01, C02F3/34, C12N1/20, C02F101/34
【公開號】CN105219685
【申請?zhí)枴緾N201510761411
【發(fā)明人】姜宇, 王弘宇, 尚宇, 楊開
【申請人】武漢大學(xué)
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2015年11月10日