. 6Hz,lH),8.40 (s,lH),8.18 (d,J= 13.0Hz,1H),8.00 (d,J=3. 2Hz, 1H), 7. 93 (d,J= 8. 9Hz, 1H), 7. 8 1 (d,J= 7. 9Hz, 2H), 7. 46 (t,J= 10. 0Hz, 1H), 7. 42(s, 1H), 7. 38(d,J= 7. 9Hz, 2H), 7. 22 (d,J= 2. 9Hz, 1H), 2. 80 (d,J= 4. 6Hz, 3H), 2. 39 (s, 3H).
[0173] 實施例17
[0174]N-(3-氟-4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-4-(4-叔丁基苯基) 吡啶酰胺
[0175]ESI-MS[M+K]m/z: 537. 2.
[0176] 實施例18
[0177]N-(3-氟-4-(2-(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-4-對三氟甲基苯基 吡啶酰胺
[0178]ESI-MS[M+H]m/z:511. 1NMR(400MHz,DMSO)S11. 13(s, 1H), 8. 89(s, 1H), 8. 78 (s, 1H), 8. 55 (s, 2H), 8. 49 (s, 1H), 8. 15 (d,J= 7. 4Hz, 2H), 8. 10 (s, 1H), 7. 94 (d,J= 8. 1Hz, 2H), 7. 87 (s, 1H), 7. 48 (s, 1H), 7. 41 (s, 1H), 7. 23 (s, 1H), 2. 79 (s, 3H).
[0179] 實施例19
[0180] N-(3_氟-4-(2_(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-4_苯基吡啶酰胺
[0181] ESI-MS[M+K]m/z:481. 1NMR(400MHz,DMSO) 8 11.l〇(s, 1H), 8. 83 (d,J =5. 0Hz, 1H), 8. 79 (s, 1H), 8. 55 (d,J= 5. 3Hz, 1H), 8. 43 (s, 1H), 8. 18 (d,J= 13. 4Hz, 1H), 8. 04 (s, 1H), 7. 92 (t,J= 9. 2Hz, 3H), 7. 63 - 7. 52 (m, 3H), 7. 47 (t,J= 8. 9Hz, 1 H), 7. 42 (s, 1H), 7. 23 (s, 1H), 2. 80 (d,J= 3. 8Hz, 3H).
[0182] 實施例20
[0183] N-(2,6_二氟-4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-4_苯基吡啶酰 胺
[0184]ESI-MS[M+K]m/z:499. 1.
[0185]實施例21
[0186]N-(2, 6-二氟-4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-4-對氟苯基吡 啶酰胺
[0187]ESI-MS[M+Na]m/z:501. 1.
[0188] 實施例22
[0189]N-(2, 6-二氟-4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-4-對甲苯基吡 啶酰胺
[0190]ESI-MS[M+K]m/z:513. 1.
[0191] 實施例23
[0192]N-(2, 6-二氟-4-(2-(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-4-(3-氟苯基) 吡啶酰胺
[0193]ESI-MS[M+K]m/z:517. 1.
[0194] 實施例24
[0195]N-(2-氟-4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-4-(2, 4-二甲基苯 基)吡啶酰胺
[0196]ESI-MS[M+K]m/z: 509. 2.
[0197] 實施例25
[0198] N-(2_氟-4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-4_苯基吡啶酰胺
[0199]ESI-MS[M+K]m/z:481. 1.
[0200] 實施例26
[0201]N-(2-氟-4-(2-(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-4-對甲苯基吡啶酰 胺
[0202] ESI-MS[M+H]m/z:495. 1.
[0203] 實施例27
[0204] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)_6_苯基嘧啶-4-甲酰胺
[0205]ESI-MS[M+H]m/z:426. 1.
[0206] 實施例28
[0207] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)_6_對甲苯基嘧啶-4-甲 酰胺
[0208]ESI-MS[M+K]m/z:478. 1.
[0209]實施例29
[0210] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)_6_對甲氧基苯基嘧 啶-4-甲酰胺
[0211] ESI-MS[M+K]m/z:494. 1.
[0212] 實施例30
[0213] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)_6_對氯苯基嘧啶-4-甲酰 胺
[0214]ESI-MS[M+K]m/z:498. 1.
[0215]實施例31
[0216] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)_6_對乙基苯基嘧啶-4-甲 酰胺
[0217]ESI-MS[M+K]m/z: 492. 2.
[0218] 實施例32
[0219] N-(4-(2_(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)_5_對氯苯基吡啶酰胺
[0220] ESI-MS[M+Na]m/z: 481. 1NMR(400MHz,DMSO) 8 10. 88(s, 1H),9. 04(s, 1H), 8. 7 7 (s, 1H), 8. 51 (d,J= 5. 5Hz, 1H), 8. 37 (d,J= 8. 1Hz, 1H), 8. 25 (d,J= 8. 2Hz, 1H), 8. 07 (d,J =8. 8Hz, 2H), 7. 88 (d,J= 8. 4Hz, 2H), 7. 62 (d,J= 8. 4Hz, 2H), 7. 41 (s, 1H), 7. 25 (d,J= 8. 8Hz, 2H), 7. 17 (d,J= 3. 0Hz, 1H), 2. 79 (d,J= 4. 5Hz, 3H).
[0221] 實施例33
[0222] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-5_對甲苯基吡啶酰胺
[0223]ESI-MS[M+Na]m/z:461. 1 匪R(400MHz,DMSO)S10. 85(s, 1H), 9. 01 (s, 1H), 8. 77(s, 1H),8. 51(d,J= 5. 5Hz, 1H), 8. 31 (s, 1H), 8. 22 (d,J= 8. 1Hz, 1H), 8. 08 (d,J= 8. 7Hz, 2H), 7. 73(d,J= 7. 8Hz, 2H), 7. 42 (s, 1H), 7. 36 (d,J= 7. 8Hz, 2H), 7. 24 (d,J= 8. 7Hz, 2H), 7. 16 (d,J= 3. 0Hz, 1H), 2. 79 (d,J= 4. 5Hz, 3H), 2. 38 (s, 3H).
[0224] 實施例34
[0225] N- (4- (2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-5-苯基吡啶酰胺
[0226] ESI-MS[M + K]m/z:463. 2 NMR(400MHz, DMSO) 8 10. 88 (s, 1H), 9. 04 (s, 1H), 8. 77 (d, J = 4. 6Hz, 1H), 8. 51 (d, J = 5. 4Hz, 1H), 8. 36 (d, J =8. 1Hz, 1H), 8. 25 (d, J = 8. 3Hz, 1H), 8. 08 (d, J = 8. 8Hz, 2H), 7. 84 (d, J = 7. 4Hz, 2H), 7. 56 (t, J = 7. 3Hz, 2H), 7. 52 - 7. 47 (m, 1H) ,7.41 (s, 1H), 7. 25 (d, J = 8. 8Hz, 2H), 7. 17 (d, J = 2. 8Hz, 1H), 2. 79 (d, J = 4. 5Hz, 3H).
[0227] 實施例35
[0228] N-(4-(2_(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-5_對氟苯基吡啶酰胺
[0229] ESI-MS[M+K]m/z:481. 2 NMR(400MHz, DMSO) 8 10. 87 (s, 1H), 9. 02 (s, 1H), 8. 77 (s, 1H), 8. 51 (d, J = 5. 5Hz, 1H), 8. 34 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 8. 24 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 8. 08 (d, J =8. 7Hz, 2H) ,7.93 - 7. 87 (m, 2H) ,7.43 - 7. 39 (m, 2H), 7. 37 (s, 1H), 7. 25 (d, J = 8. 8Hz, 2H), 7. 18 - 7. 12 (m, 1H), 2. 79 (d, J = 4. 5Hz, 3H).
[0230] 實施例36
[0231] N-(4-(2-(甲基氨基甲?;┻拎?4-基氧基)苯基)-5-對甲氧基苯基吡啶酰 胺
[0232] ESI-MS [M+Na] m/z: 477. 3 ; :H NMR (400MHz, DMSO) 8 10.83 (s, 1H), 9. 00 (s, 1H), 8. 7 7 (s, 1H), 8. 51 (d, J = 5. 5Hz, 1H), 8. 31 (d, J = 8. 2Hz, 1H), 8. 21 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 8. 07 (d, J =8. 6Hz, 2H), 7. 80 (d, J = 8. 5Hz, 2H), 7. 41 (s, 1H), 7. 25 (d, J = 8. 6Hz, 2H), 7. 17 (d, J = 3. 1Hz, 1H), 7. 11 (d, J = 8. 5Hz, 2H), 3. 83 (s, 3H), 2. 79 (d, J = 4. 2Hz, 3H).
[0233] 本發(fā)明產(chǎn)物的藥理研究
[0234] 體外細胞毒活性
[0235] 對按照本發(fā)明的上述通式的含磺酰脲結(jié)構(gòu)的索拉非尼衍生物進行了體外抑制肺 癌細胞H460、結(jié)腸癌細胞HT-29、前列腺癌PC-3活性篩選,對照品索拉非尼按照文獻所述方 法制備得到。
[0236] 1)細胞復(fù)蘇并傳代2-3次穩(wěn)定后,用胰蛋白酶溶液(0. 25% )使其從培養(yǎng)瓶底部 消化下來。將細胞消化液倒入離心管中后,之后加入培養(yǎng)液以終止消化。將離心管在800r/ min下離心10min,棄去上清液后加入5mL培養(yǎng)液,吹打混勻細胞,吸取10 y L細胞混懸液加 入細胞計數(shù)板中計數(shù),調(diào)整細胞濃度為1〇4個/孔。96孔板中除A1孔為空白孔不加細胞外, 其余皆加入100 y L細胞混懸液。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。
[0237] 2)用50yL二甲基亞砜溶解受試樣品,然后加入適量培養(yǎng)液,使樣品溶解成2mg/ mL藥液,然后在24孔板中將樣品稀釋為20、4、0. 8、0. 16、0. 032 y g/mL。
[0238] 每個濃度加入3孔,其中周圍兩行兩列細胞長勢受環(huán)境影響較大,只和為空白細 胞孔使用。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。
[0239] 3)將96孔板中帶藥培養(yǎng)液棄去,用磷酸緩沖溶液(PBS)將細胞沖洗兩遍,在每孔 中加入MTT (四氮唑)(0? 5mg/mL) 100 y L放入培養(yǎng)箱中4h后,棄去MTT溶液,加入二甲基亞 砜100 y L。在磁力振蕩器上振蕩使存活細胞與MTT反應(yīng)產(chǎn)物甲臜充分溶解,放入酶標儀中 測定結(jié)果。通過Bliss法可求出藥物IC 5。值。
[0240] 化合物的抑制肺癌細胞H460、結(jié)腸癌細胞HT-29、前列腺癌PC-3活性結(jié)果見表2。
[0241] 化合物對VEGFR2/KDR酶抑制活性實驗
[0242] 1、溶液配制
[0243] 1)待測化合物加lmL DMS0,配成10mM儲存溶液。陽性化合物索拉非尼儲存液濃 度為10mM (溶于DMS0),陽性化合物索拉非尼的儲存液濃度為2mM (溶于DMS0);
[0244] 2)用DMS0稀釋化合物儲存液,配成2mM溶液(100X);
[0245] 3)取2 y L 2mM溶液,加入18 y L反應(yīng)液稀釋化合物至200 y M (10X)溶液;
[0246] 4)在工作板中加入2 y L上述溶液及18 y L反應(yīng)液,配成10X溶液;
[0247] 5)取以上板中溶液1 y L到檢測板;
[0248] 6)檢測板的全抑制對照和零抑制對照孔中加入1 y L激酶反應(yīng)液,使得DMS0的濃 度為10%。
[0249] 2、實驗步驟
[0250] 1)孔板的布局
[0251] 根據(jù)實驗需要把384孔板布置好