、6/4、7/3、8/2、9/1和10/0的混合菌懸液以10%(v/v)的量分別接種于含有200mg/ L苯酚的無機鹽培養(yǎng)液中，于30°C，150rpm搖床中振蕩培養(yǎng)12h后測定殘留的苯酚和TOC 濃度，同時通過倍比稀釋法依據(jù)菌落形態(tài)特征對生物降解反應結束后體系中PRl和PR2的 數(shù)量進行計量；定義CFUpri為PRl在10/0體系中的活菌數(shù)，即僅接種PRl的體系，CFU PR2為 PR2在0/10體系中的活菌數(shù)，即僅接種PR2的體系，CFUpri .PR2為PRl在PR2存在時的活菌數(shù)，CFUpr2 .PR1為PR2在PRl存在時的活菌數(shù)，PRl的相對活菌數(shù) 的相對活菌數(shù)當RCFU < 1時，代表一株菌生長和繁殖受到了另一株 菌的抑制，而當RCFU > 1時，代表另一株菌的存在對該菌株的生長和繁殖起到了促進作用； 根據(jù)兩株菌在不同初始活菌比例下的苯酚降解率、TOC降解率以及RCFU計算結果，選擇苯 酚降解率、TOC降解率最高且RCFU pri和RCFUpr2計算結果均大于1的初始活菌比例作為苯酚 生物降解二元復合菌群的構建比例，此時二元復合菌群對苯酚的降解效果最佳且形成了互 利共生的關系。2. 根據(jù)權利1所述的用于廢水中苯酚生物降解的二元復合菌群的構建方法，其特征在 于：所述的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的組分為牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，蒸餾水lOOOmL， pH7. 0,121°C滅菌20min后備用，制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時加入20g瓊脂。3. 根據(jù)權利1所述的用于廢水中苯酚生物降解的二元復合菌群的構建方法，其特征在 于：所述的馴化培養(yǎng)基的組分為（NH4) 2S043g，KH2PO4O. 5g，NaHPO4O. 5g，MgSO4 · 7H20 0· 3g， 微量元素液lmL，蒸餾水lOOOmL，pH 7. 5,121°C滅菌20min，待冷卻后加入經(jīng)過濾除菌的 10%(w/v)苯酸溶液。4. 根據(jù)權利1所述的用于廢水中苯酚生物降解的二元復合菌群的構建方法，其特 征在于：所述的微量元素液的組分為FeSO4 · 7H20 0. 5g，MnSO4 · H2O 0. 15g，ZnSO4O. 14g， CoCl2O. 2g，蒸餾水 1000mL。5. 根據(jù)權利I所述的用于廢水中苯酚生物降解的二元復合菌群的構建方法，其特征在 于：所述的苯酚降解率及TOC降解率采用以下公式進行計算：6. -種用于廢水中苯胺生物降解的二元復合菌群的構建方法，其特征在于：它包括以 下內容： 1) 選擇菌株：選擇惡臭假單胞菌和乙酸鈣不動桿菌，惡臭假單胞菌和乙酸鈣不動桿菌 均來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心，糞產(chǎn)堿菌的菌株編號為CGMCC No. 1. 1003,乙 酸鈣不動桿菌的菌株編號為CGMCC No. 1. 3615,將惡臭假單胞菌的菌株簡稱為BA1、乙酸鈣 不動桿菌的菌株簡稱為BA2 ; 2) 菌株的活化：從營養(yǎng)肉汁瓊脂斜面上挑取BAl和BA2的菌苔分別接種于IOOmL牛肉 膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，置于30°C，150rpm搖床中振蕩培養(yǎng)24h進行菌株的活化； 3) 菌株的馴化：取活化后的BAl和BA2培養(yǎng)液各10mL，分別接種于含有苯胺的馴化培 養(yǎng)基中，置于30°C，150rpm搖床中振蕩培養(yǎng)，進行菌株的馴化，培養(yǎng)36h后再重復上述過程 進行第二個周期的馴化，共馴化5個周期，180h，前兩個馴化周期加入I. 5mL經(jīng)過濾除菌的 10% (w/v)苯胺溶液，第三個周期加入3. OmL經(jīng)過濾除菌的10% (w/v)苯胺溶液，最后兩個馴 化周期加入8mL經(jīng)過濾除菌的10%(w/v)苯胺溶液； 4) 菌株的保存：將馴化后的菌株采用倍比稀釋法在平板上得到單菌落后，挑取單菌落 接種到斜面培養(yǎng)基上，待菌苔長出后放入4°C冰箱中低溫保存?zhèn)溆茫? 5) 菌落形態(tài)觀察：采用平板劃線的方法將菌株分別接種于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 中，置于30°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，觀察其菌落形態(tài)，主要通過菌落的顏色、透明度、表 面光滑性和邊緣形態(tài)對用于苯胺生物降解的二元復合菌群構建的BAl和BA2菌株進行區(qū) 分； 6) 菌懸液制備：將馴化后的BAl和BA2分別接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，置于 30°C，150rpm搖床中振蕩培養(yǎng)24h，將培養(yǎng)液置于臺式高速冷凍離心機中以1000 Orpm離心 5min后，棄去上清液后用0. lmol/L，pH8. 0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液重懸，再次離心后棄去 上清液，如此操作兩次清洗菌體，再用0. lmol/L，pH8. 0的Na2HPO4-NaH2POgl沖溶液重懸， 分別制成〇D_=l. 2的菌懸液置于冰箱中冷藏備用，同時通過平板計數(shù)法分別測定菌懸液中 BAl和BA2的活菌數(shù)； 7) 不同BAUBA2初始配比的混合菌懸液的制備：根據(jù)菌懸液中測定的BAl和BA2活菌 數(shù)，吸取BAl和BA2的菌懸液，使混合后的BAl、BA2菌懸液的總活菌量為2 X 10sCFU/mL，并 使 BAl 和 BA2 活菌初始比例分別為 0/10、1/9、2/8、3/7、4/6、5/5、6/4、7/3、8/2、9/1 和 10/0， 其中10/0代表體系中僅有BAl，0/10代表體系中僅有BA2 ; 8) 二元復合菌群最佳配比的選擇：將BAl和BA2活菌初始比例為0/10、1/9、2/8、3/7、 4/6、5/5、6/4、7/3、8/2、9/1和10/0的混合菌懸液分別以10%(v/v)的量分別接種于含苯胺 300mg/L的無機鹽培養(yǎng)液中，于30°C，150rpm搖床中振蕩培養(yǎng)36h后測定殘留的苯胺和TOC 濃度，同時通過倍比稀釋法依據(jù)菌落形態(tài)特征對生物降解反應結束后體系中BAl和BA2的 數(shù)量進行計量；定義CFUbai為BAl在10/0體系中的活菌數(shù)，即僅接種BAl的體系，CFU BA2為 BA2在0/10體系中的活菌數(shù)，即僅接種BA2的體系，CFUbai .BA2為BAl在BA2存在時的活菌 數(shù)，CFUba2.BA1為BA2在BAl存在時的活菌數(shù)，BAl的相對活菌數(shù)的相對活菌數(shù)，當RCFU < 1時，代表一株菌生長和繁殖受到了另一株 菌的抑制，而當RCFU > 1時，代表另一株菌的存在對該菌株的生長和繁殖起到了促進作用； 根據(jù)兩株菌在不同初始活菌比例下的苯胺降解率、TOC降解率以及RCFU計算結果，選擇苯 胺降解率、TOC降解率最高且RCFU bai和RCFUba2計算結果均大于1的初始活菌比例作為苯胺 生物降解二元復合菌群的構建比例，此時二元復合菌群對苯胺的降解效果最佳且形成了互 利共生的關系。7. 根據(jù)權利要求6所述的用于廢水中苯胺生物降解的二元復合菌群的構建方法，其特 征在于：所述的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的組分為牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，蒸餾水 lOOOmL，pH 7. 0,121°C滅菌20min后備用，制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時加入20g瓊脂。8. 根據(jù)權利要求6所述的用于廢水中苯胺生物降解的二元復合菌群的構建方法， 其特征在于：所述的馴化液體培養(yǎng)基的組分為（NH 4) 2S043g，KH2PO4O. 5g，NaHPO4O. 5g， MgSO4 · 7H200. 3g，微量元素液lmL，蒸餾水lOOOmL，pH 7. 5,121°C滅菌20min，待冷卻后加入 經(jīng)過濾除菌的10%(w/v)苯胺溶液。9. 根據(jù)權利要求6所述的用于廢水中苯胺生物降解的二元復合菌群的構建方法，其 特征在于：所述的微量元素液的組分為FeSO4 · 7H20 0. 5g，MnSO4 · H2O 0. 15g，ZnSO4O. 14g， CoCl2O. 2g，蒸餾水 lOOOmL。10.根據(jù)權利要求6所述的用于廢水中苯胺生物降解的二元復合菌群的構建方法，其 特征在于：所述的苯胺降解率及TOC降解率采用以下公式進行計算：
【專利摘要】一種用于廢水中生物降解的二元復合菌群構建方法，其特點是，包括苯酚和苯胺兩種構建方法，均含有：選擇菌株、菌株活化、菌株馴化、菌株保存、菌落形態(tài)觀察、菌懸液制備、不同菌株初始配比的混合菌懸液的制備和二元復合菌群最佳配比選擇，在兩株具有不同菌落特征，對同一種有機污染物具有降解能力的菌株的基礎上，將菌體以不同比例接種于含有目標有機污染物的廢水中，在指定的反應條件下，經(jīng)過指定的生化反應時間后，測定不同接種比例下菌株對目標污染物的降解情況，同時對反應終點時刻培養(yǎng)液中兩種菌的菌落形成單位進行計量，最終通過污染物降解效率及兩株菌的相對菌落形成單位的計算結果確定用于目標污染物生物降解的二元復合菌群的配比。
【IPC分類】C02F101/38, C12R1/40, C12R1/05, C12R1/01, C02F3/34, C12N1/20, C02F101/34
【公開號】CN105062911
【申請?zhí)枴緾N201510423726
【發(fā)明人】郭靜波, 姜麗杰, 王偉卓, 劉明偉
【申請人】東北電力大學
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年7月18日