或減緩或阻止其癥狀的進(jìn)一步發(fā)展或惡化，或預(yù)防處于發(fā)生 疾病或障礙風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體疾病或障礙或?qū)ζ涮峁╊A(yù)防。個(gè)體是可以得益于施用如本文所公 開(kāi)的任意形式的式I的化合物或包括它的組合物的任意動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，個(gè)體是 哺乳動(dòng)物，例如人、靈長(zhǎng)類、狗、貓、馬、牛、豬、嚙齒動(dòng)物例如大鼠或小鼠。典型地，所述的哺 乳動(dòng)物是人。
[0066] 治療有效量的本技術(shù)的無(wú)水或水合晶型或無(wú)定形形式或包含任意這種形式的組 合物可以根據(jù)施用途徑和劑型的不同而改變。式I化合物的的無(wú)水或水合晶型或無(wú)定形形 式的有效量典型地在約0. 01 - l〇〇mg/kg/天的范圍，且更典型地在約0. 05 - 25mg/kg/天 的范圍。典型地，選擇本技術(shù)的無(wú)水或水合晶型或無(wú)定形形式或包含這種形式的組合物，以 提供顯示高治療指數(shù)的藥物組合物。治療指數(shù)是毒性效應(yīng)與治療效應(yīng)的劑量比，表示為L(zhǎng)D 5q 與ED5。之比。LD 5。是使50%群體致死的劑量，ED 5。是在50%群體中治療有效的劑量。通過(guò) 標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中測(cè)定LD5。和ED 5。。
[0067] 將本說(shuō)明書(shū)中涉及的全部公開(kāi)文獻(xiàn)、專利申請(qǐng)、授權(quán)專利和其他對(duì)比文件引入本 文作為參考，就如同將它們特別和各自完整引入作為參考一樣。文本中包含的引入?yún)⒖嫉?定義不包括它們與本說(shuō)明書(shū)的定義矛盾的情況。
[0068] 由此一般性描述的本技術(shù)將通過(guò)參照下列實(shí)施例更易于理解，這些實(shí)施例作為示 例提供，但不預(yù)以限制本技術(shù)。 實(shí)施例
[0069] 在本說(shuō)明書(shū)上下文中的化學(xué)和生物學(xué)術(shù)語(yǔ)方面使用如下縮寫(xiě)：
[0070] DCM: 二氯甲烷
[0071] DMSO: 二甲亞砜
[0072] DSC: 示差掃描量熱法
[0073] DVS: 動(dòng)態(tài)水蒸氣吸附
[0074] ESI-MS: 電噴霧-質(zhì)譜法
[0075] FT-IR: 傅里葉轉(zhuǎn)換-紅外
[0076] HPLC: 高效液相色譜法
[0077] IPA: 異丙醇
[0078] M: 摩爾
[0079] MeOH: 甲醇
[0080] N HCl: 標(biāo)準(zhǔn) HCl
[0081] NMR: 核磁共振波譜法
[0082] RH: 相對(duì)濕度
[0083] RT: 室溫
[0084] SEM: 掃描電子顯微鏡檢查
[0085] TGA: 熱重量分析法
[0086] UV: 紫外線
[0087] XRPD: X-射線粉末衍射
[0088] 使用的一般方法、儀器和標(biāo)準(zhǔn)
[0089] pH 值
[0090] 以如下為典型測(cè)定溶液的pH :將約IOmg的游離堿或其鹽轉(zhuǎn)入20ml小瓶，向其中 加入IOml相應(yīng)的緩沖液或水。連續(xù)攪拌該溶液，同時(shí)測(cè)定pH?？梢酝ㄟ^(guò)各種方法，例如用 微pH電極進(jìn)行pH測(cè)定。
[0091] 溶解度測(cè)定
[0092] 在25±0· 5°C將過(guò)量游離堿（式I的游離堿）、其磷酸鹽（游離堿的一磷酸鹽）或 另一種酸式鹽在溶劑中平衡1天。過(guò)濾得到的淤漿，通過(guò)HPLC測(cè)定用于溶解度測(cè)定的濾液。
[0093] 內(nèi)在溶出度
[0094] 在0· 5cm2VanKel模頭和沖頭組合中以2000鎊的圓球壓力進(jìn)行內(nèi)在溶出速率測(cè) 定。使用光導(dǎo)纖維溶出系統(tǒng)（C technologies Inc.)和Cary UV/VIS光分先光度計(jì)與 200rpm攪拌速率測(cè)定溶出度。將溶液介質(zhì)保持在37±0. 5°C，在260nm進(jìn)行濃度測(cè)定。
[0095] 吸濕性
[0096] 使用表面測(cè)量系統(tǒng)DVS-I在25±0. 5°C從吸附/解吸等溫線測(cè)定吸濕性。在不同 濕度包括75%、85%和95%下評(píng)價(jià)樣品。
[0097] 多態(tài)特性
[0098] 在25±0. 5°C以高速將樣品淤漿攪拌24小時(shí)，過(guò)濾，通過(guò)XRH)分析采集的固體。
[0099] HPLC 法
[0100] 儀器：Waters ;柱：Symmetry C18, 3. 5 微米粒徑，4. 6x 75mm ;柱溫：35 °C ;流 速：lmL/min ;流動(dòng)相：A = 0. 1% TFA的水溶液和B =乙腈；檢測(cè)：UV 254nm ;進(jìn)樣量：約2 微克；稀釋劑：60:40 (v/v)乙腈/0. 2 %磷酸水溶液；和梯度：10 - 70% B，10分鐘內(nèi)。
[0101] TG 法
[0102] 儀器：TA instrument Q500 ;溫度范圍：室溫一 300°C ;掃描速率：10°C /min ;氮 氣流：60ml/min。Mettler TGA 850 ;溫度范圍：室溫一 300°C ;掃描速率：20°C /min ;氮?dú)?流：40ml/min〇
[0103] SEM 法
[0104] 儀器：Jeol JSM 6300〇
[0105] DSC 法
[0106] 儀器：TA instrument Q1000 ;溫度范圍：室溫一210°C ;掃描速率：10°C /min ;氮 氣流:BOmT,/mi η η
[0107] X-射線結(jié)晶學(xué)法
[0108] 具有來(lái)自精細(xì)焦點(diǎn)密封管發(fā)生器的石墨-單色Cu(Ka)-射線的Bruker AXS 3-循 環(huán)衍射計(jì)和使用SMART軟件的Smart 6000CXD檢測(cè)器。使用Saint進(jìn)行數(shù)據(jù)加工和整體 晶格精制。基于在不同角度設(shè)置下測(cè)定的對(duì)稱關(guān)聯(lián)反射強(qiáng)度應(yīng)用半經(jīng)驗(yàn)吸收校正。通過(guò) 雙重空間再循環(huán)法和隨后的DF合成分離結(jié)構(gòu)并且基于應(yīng)用F2的全矩陣最小二乘法、使用 SHELXTL程序組精制。
[0109] XRF1D 法
[0110] 儀器：Bruker D8Advance ;射線：Cu K α，（30kV, 40mA);可變狹縫 V12mm ;掃描范 圍2-40° (2 Θ值）；掃描速率〇. 3s/步。或者，使用Scintag, Inc.的XDS2000 ;照射：Cu K a (45kV, 40mA);發(fā)散片：3mm和2mm ;測(cè)定片：0· 3mm和0· 2mm ;切光器0· 02grd ;掃描時(shí) 間：6分鐘（3分鐘/結(jié)構(gòu)）；掃描范圍：2° -35°或40° (2Θ值）；掃描速率〇. 5° /min(2 0 值）。
[0111] IR 法
[0112] 儀器：Thermo Magna 560 ;模式：傳輸；掃描范圍：4000cm 1^OOcm 1O
[0113] 拉曼法
[0114] 儀器：Bruker Vertex 70FTIR ;APT: 3. 5mm ;64 掃描；RES 2〇
[0115] 鹽篩選
[0116] 實(shí)施例1:式I的游離堿的酸式鹽的篩選
[0117] 使用式I的游離堿（如下實(shí)施例2中所述制備）和各種不同的酸進(jìn)行鹽的篩選實(shí) 驗(yàn)：乙酸、苯甲酸、檸檬酸、富馬酸、馬尿酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸（D，L)、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸（L)、 丙二酸、甲磺酸、磷酸、萘-1，5-二磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸（D)和酒石酸（L)。將 游離堿（30mg)溶于12mL THF。將該溶液的0.1 ml等分部分配入96孔格（Zinsser Crissy block)結(jié)晶塊。將約0. 25mg游離堿遞送至每個(gè)孔；再向每個(gè)孔中加入0. 044ml 0.0 lM的 相應(yīng)酸的丙酮溶液。用預(yù)先撕開(kāi)的覆蓋物覆蓋，然后在室溫在約10小時(shí)過(guò)程中使溶劑混合 物蒸發(fā)。
[0118] 使用乙酸、苯甲酸、檸檬酸、馬尿酸、乳酸、馬來(lái)酸和蘋(píng)果酸嘗試，得到具有與游離 堿或無(wú)定形固體相同的XRPD圖案的固體。使用富馬酸、氫溴酸、萘-1，5-二磺酸、硫酸或酒 石酸得到低結(jié)晶度固體。就磷酸而言，鹽晶型獲自190試驗(yàn)乙醇。由于結(jié)晶度或最終的合 成便利性，所以進(jìn)一步評(píng)價(jià)由磷酸、鹽酸、丙二酸、甲磺酸和琥珀酸形成的固體的結(jié)晶度和 吸濕性。
[0119] 發(fā)現(xiàn)磷酸鹽是高度結(jié)晶的。通過(guò)DVS吸附/解吸等溫線評(píng)價(jià)的吸濕性顯示甚至在 95% RH，也僅觀察到因吸水導(dǎo)致的2%以下的重量增加。在75%和85% RH，觀察到1%以 下的重量增加。
[0120] 就鹽酸鹽而言，觀察到幾種XRPD圖案，顯示一種以上多晶型物存在。這些鹽的大 部分具有低結(jié)晶度。將二水合物確定為最具有結(jié)晶性。鹽酸鹽的吸濕性高于磷酸鹽。在鹽 酸鹽的一種晶型中，通過(guò)DVS觀察到約4. 1% (75% RH) -約16. 9% (95% RH)的重量增加。
[0121] 就丙二酸鹽而言，基于其觀察到的XRro圖案鑒定了 4種晶型。進(jìn)一步評(píng)價(jià)顯示為 易脆的結(jié)晶，僅制備一次，具有濕的模式并且是吸濕的（在所有測(cè)試濕度下均具有約10% 的重量增加）。
[0122] 就甲磺酸鹽而言，觀察到幾種XRPD圖案，其中僅可以持續(xù)制成一種，但具有吸濕 性（通過(guò)DVS顯示約2. 6% - 10%重量增加）。類似地，琥珀酸鹽也是吸濕性的（通過(guò)DVS 顯示約4. 1 % - 10 %的重量增加）。
[0123] 在pH 3緩沖液和水中的初始溶解度試驗(yàn)結(jié)果如下表1中所示。磷酸鹽比甲磺酸 鹽、丙二酸鹽和琥珀酸鹽更易溶于PH 3緩沖液和水。磷酸鹽也比游離堿更易溶于水。
[0124] 表 1
[0129] A. N-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基）-苯基]-Ν' -甲基-嘧啶-4, 6-二胺
[0130] 將4- (4-乙基哌嗪-1-基）-苯胺（lg，4. 88mmol)、（6-氯-嘧啶-4-基）-甲基-胺 (I. 81g，12. 68mmol，I. 3eq.)和4N HCl在二噁烷（15ml)中的混合物在密閉試管內(nèi)加熱至 150 °C持續(xù)5h。濃縮該反應(yīng)混合物，用DCM和飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋。分離水層，用DCM萃 取。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥（硫酸鈉），過(guò)濾，濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法純化殘余物（DCM/ MeOH，93:7)，然后在乙醚中研磨，得到標(biāo)題化合物，為白色固體：ES I -MS: 313. 2 [MH]+; t R = I. IOmin(梯度 J) ;TLC:Rf = 0.21(DCM/Me0H，93:7)。
[0131] B. 4-(4-乙基哌嗪-1-基）-苯胺
[0132] 將1-乙基-4-(4-硝基-苯基）-哌嗪（6. 2g，26. 35mmol)和阮內(nèi)鎳（2g)在 Me0H(120mL)中的混懸液在RT在氫氣氣氛中攪拌7h。通過(guò)娃藻土墊過(guò)濾該反應(yīng)混合 物，濃縮至得到5. 3g標(biāo)題化合物，為紫色固體：ESI-MS:206. l[MH]+;TLC:Rf= 0. 15(DCM/ MeOH+1% NH3水，9:1)。
[0133] C. I-乙基-4-(4-硝基-苯基）-哌嗪
[0134] 將 1-溴-4-硝基苯（6g, 29. 7mmol)和 1-乙基哌嗪（7. 6ml, 59. 4mmol, 2eq.)的 混合物加熱至80°C持續(xù)15h。冷卻至RT后，用水和DCM/MeOH, 9:1稀釋該反應(yīng)混合物。分 離水層，用DCM/MeOH，9:1萃取。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥（硫酸鈉），過(guò)濾，濃縮。通過(guò)硅 膠柱色譜法純化殘余物（DCM/MeOH+1 % NH/X，9:1)，得到6. 2g標(biāo)題化合物，為黃色固體： ESI-MS:236. 0[MH]+;tR= 2. 35min(純度：100%，梯度 J) ;TLC:Rf= 0· 50(DCM/Me0H+l% NH3水，9:1)。
[0135] D. (6-氯-嘧啶-4-基）-甲基-胺
[0136] 通過(guò)文獻(xiàn)中公布的改進(jìn)方法制備該物質(zhì)（J. Appl. Chem. 1955, 5, 358):向商購(gòu) 的4, 6-二氯啼啶（20g, 131. 6mmol, 1.0 eq.)在異丙醇（60ml)中的混懸液中以內(nèi)部溫 度不高于50°(：這種速率加入33%甲基胺的乙醇溶液（40.11111，328.9臟〇1，2.569.)。添 加完成后，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)噇h。然后加入水（50ml)，用冰浴將形成的混懸液 冷卻至5°C。過(guò)濾出沉淀的產(chǎn)物，用冷異丙醇/水2:l(45ml)和水洗滌。將采集的物質(zhì) 在45°C真空干燥過(guò)夜，得到標(biāo)題化合物，為無(wú)色粉末：t R= 3. 57min (純度：>99%，梯度 A) ,ESI-MS :144. 3/146. 2 [MH]+。
[0137] Ε· (3- (2, 6-二氯-