一種活性豬腦多肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及化工生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腦多肽制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肽是α —氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物，肽主要控制人體的生長、發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)和新陳代謝，它在人體處于一種平衡狀態(tài)，若活性肽減少后，人體的機能發(fā)生重要變化，對于兒童來說，他的生長、發(fā)育變得緩慢，甚至停止，長久下去就形成了侏儒，對成年人或老年人，缺少活性肽后，自身的免疫力就會下降，新陳代謝紊亂，內(nèi)分泌失調(diào)，引起各種疾病的產(chǎn)生，如失眠、身體消瘦或浮腫。由于活性肽還作用于神經(jīng)系統(tǒng)，因此人體就會變得動作遲緩，頭腦不再聰慧，更主要的是活性肽減少，直接引起人身體各部位逐漸出現(xiàn)全面衰老，引發(fā)各種疾病。腦多肽是一種良好的健腦補腦的生物制劑，豬腦，因其成本低，豐富易得，因此用于制成腦多肽系列產(chǎn)品，現(xiàn)有的腦多肽提取工藝存在活性差，病毒消滅不徹底，生產(chǎn)過程中不安全環(huán)保等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于改進現(xiàn)有工藝技術(shù)中的不足，提供一種活性腦多肽的制備方法，可有效地解決了目前腦多肽活性差、病毒消滅不徹底等難題。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下工藝技術(shù)方案:
本發(fā)明提供一種活性豬腦多肽的制備方法，包括以下工段:(一)豬腦組織的收集、(二)豬腦膠原蛋白的提取、(三)豬腦膠原蛋白的酶解、(四)豬腦多肽的分離、(五)豬腦多肽的活化:
(一)豬腦組織的收集
將新鮮或冷凍的胎豬腦組織在室溫下用超純凈水洗凈，加入質(zhì)量百分比為3-5倍的無菌超存水，采用渦輪式攪拌器進行攪拌，形成均勻的豬腦蛋白漿液，脫水后得到純凈的豬腦組織；
(二)豬腦膠原蛋白的提取
用質(zhì)量百分比為1.0-5.0%的醋酸對所述的豬腦組織進行浸泡預(yù)處理，水洗后用60-85°C的熱水抽提4-10h得到豬腦明膠提取液，將所述提取液濃縮至膠原蛋白質(zhì)量百分比濃度為15-25%的豬腦膠原蛋白；
(三)豬腦膠原蛋白的酶解
在所述的豬腦膠原蛋白中加入絲氨酸蛋白酶，采用酶解得到豬腦多肽混合液；
(四)豬腦多肽的分離
將所述的豬腦多肽混合液加入有機溶劑，充分?jǐn)嚢韬箪o置5-8h，離心去除沉淀，用切向流超濾設(shè)備截留上清液，取分子量小于3000 Da的多肽提取物，進行除菌過濾；
(五)豬腦多肽的活化將所述的豬腦多肽提取物采用二苯酯磷酰雜環(huán)化合物對豬腦多肽中的羥基進行活化，得到活性豬腦多肽。
[0005]在步驟(三)所述酶解工藝條件:絲氨酸蛋白酶添加量為豬腦膠原蛋白質(zhì)量百分比的 1.0-6.0%，pH 值 3-7，溫度為 45-600C，時間為 4_10h。
[0006]在步驟(四)所述有機溶劑為二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、醋酸、乙腈中的一種。
[0007]在步驟(四)所述除菌過濾采用膜過濾法，所述膜的孔徑為0.45- 0.2 μπι。
[0008]在步驟(四)所述離心去除沉淀，離心速率為7000-9000轉(zhuǎn)/min，離心分離時間為10_30min 。
[0009]本發(fā)明涉及一種活性豬腦多肽的制備方法，采用醋酸進行初步水解得到豬腦膠原蛋白；采用絲氨酸蛋白酶進行定向酶解，得到豬腦多肽混合液，采用有機溶劑沉淀、離心分離以及膜除菌相結(jié)合的分離工藝，既分離得到水解多肽產(chǎn)品，又同時實現(xiàn)去雜、去色、去味和除菌，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量；通過控制適宜的酶解條件，使膠原蛋白大分子斷裂成活性多肽；采用二苯酯磷酰雜環(huán)化合物對豬腦多肽中的羥基進行活化，增加了多肽的水溶性，便于在化妝品、醫(yī)藥、食品等工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0010]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，并非對本發(fā)明的限制，凡是依照本發(fā)明公開內(nèi)容所進行的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
【具體實施方式】
[0011]實施例1:
本【具體實施方式】采取以下技術(shù)方案，它的工藝流程為:
(一)豬腦組織的收集
將新鮮胎豬腦組織在室溫下用超純凈水洗凈，加入質(zhì)量百分比為3倍的無菌超存水，采用渦輪式攪拌器進行攪拌，形成均勻的豬腦蛋白漿液，脫水后得到純凈的豬腦組織；
(二)豬腦膠原蛋白的提取
用質(zhì)量百分比為1.0%的醋酸對所述的豬腦組織進行浸泡預(yù)處理，水洗后用60°C的熱水抽提1h得到豬腦明膠提取液，將所述提取液濃縮至膠原蛋白質(zhì)量百分比濃度為15%的豬腦膠原蛋白；
(三)豬腦膠原蛋白的酶解
采用酶解得到豬腦多肽混合液，在所述的豬腦膠原蛋白中加入絲氨酸蛋白酶，酶解工藝條件:絲氨酸蛋白酶添加量為豬腦膠原蛋白質(zhì)量百分比的5.0 %，pH值6.0，溫度為45°C，時間為1h0
[0012](四)豬腦多肽的分離
將所述的豬腦多肽混合液加入醋酸，充分?jǐn)嚢韬箪o置5h，離心去除沉淀，用切向流超濾設(shè)備截留上清液，取分子量小于3000 Da的多肽提取物，進行除菌過濾，所述除菌過濾采用膜過濾法，所述膜的孔徑為0.45 μπι，所述離心去除沉淀，離心速率為7000轉(zhuǎn)/min，離心分離時間為30min。
[0013](五)豬腦多肽的活化
將所述的豬腦多肽提取物采用二苯酯磷酰雜環(huán)化合物對豬腦多肽中的羥基進行活化，得到活性豬腦多肽。
[0014]實施列2 一種活性豬腦多肽的制備方法，包括以下工段:(一)豬腦組織的收集、(二)豬腦膠原蛋白的提取、(三)豬腦膠原蛋白的酶解、(四)豬腦多肽的分離、(五)豬腦多肽的活化，其特征在于:
(一)豬腦組織的收集
將冷凍的胎豬腦組織在室溫下用超純凈水洗凈，加入質(zhì)量百分比為5倍的無菌超存水，采用渦輪式攪拌器進行攪拌，形成均勻的豬腦蛋白漿液，脫水后得到純凈的豬腦組織；
(二)豬腦膠原蛋白的提取
用質(zhì)量百分比為5.0%的醋酸對所述的豬腦組織進行浸泡預(yù)處理，水洗后用80°C的熱水抽提4h得到豬腦明膠提取液，將所述提取液濃縮至膠原蛋白質(zhì)量百分比濃度為25%的豬腦膠原蛋白；
(三)豬腦膠原蛋白的酶解
采用酶解得到豬腦多肽混合液，在所述的豬腦膠原蛋白中加入絲氨酸蛋白酶，酶解工藝條件:絲氨酸蛋白酶添加量為豬腦膠原蛋白質(zhì)量百分比的1.0 %，pH值3.5，溫度為60°C，時間為4ho
[0015](四)豬腦多肽的分離
將所述的豬腦多肽混合液加入二甲基亞砜，充分?jǐn)嚢韬箪o置5h，離心去除沉淀，用切向流超濾設(shè)備截留上清液，取分子量小于1000 Da的多肽提取物，進行除菌過濾，所述除菌過濾采用膜過濾法，所述膜的孔徑為0.25 μπι，所述離心去除沉淀，離心速率為9000轉(zhuǎn)/min，離心分離時間為25 min。
[0016](五)豬腦多肽的活化
將所述的豬腦多肽提取物采用二苯酯磷酰雜環(huán)化合物對豬腦多肽中的羥基進行活化，得到活性豬腦多肽。
【主權(quán)項】
1.一種活性豬腦多肽的制備方法，包括以下工段:(一)豬腦組織的收集、(二)豬腦膠原蛋白的提取、(三)豬腦膠原蛋白的酶解、(四)豬腦多肽的分離、(五)豬腦多肽的活化，其特征在于: (一)豬腦組織的收集 將新鮮或冷凍的胎豬腦組織在室溫下用超純凈水洗凈，加入質(zhì)量百分比為3-5倍的無菌超存水，采用渦輪式攪拌器進行攪拌，形成均勻的豬腦蛋白漿液，脫水后得到純凈的豬腦組織； (二)豬腦膠原蛋白的提取 用質(zhì)量百分比為1.0-5.0%的醋酸對所述的豬腦組織進行浸泡預(yù)處理，水洗后用60-85°C的熱水抽提4-10h得到豬腦明膠提取液，將所述提取液濃縮至膠原蛋白質(zhì)量百分比濃度為15-25%的豬腦膠原蛋白； (三)豬腦膠原蛋白的酶解 在所述的豬腦膠原蛋白中加入絲氨酸蛋白酶，采用酶解得到豬腦多肽混合液； (四)豬腦多肽的分離 將所述的豬腦多肽混合液加入有機溶劑，充分?jǐn)嚢韬箪o置5-8h，離心去除沉淀，用切向流超濾設(shè)備截留上清液，取分子量小于3000 Da的多肽提取物，進行除菌過濾； (五)豬腦多肽的活化 將所述的豬腦多肽提取物采用二苯酯磷酰雜環(huán)化合物對豬腦多肽中的羥基進行活化，得到活性豬腦多肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述活性豬腦多肽的制備方法，其特征在于:在步驟(三)所述酶解工藝條件:絲氨酸蛋白酶添加量為豬腦膠原蛋白質(zhì)量百分比的1.0-6.0%，ρΗ值3-7，溫度為45-60 0C，時間為 4-1 Oh。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述活性豬腦多肽的制備方法，其特征在于:在步驟(四)所述有機溶劑為二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、醋酸、乙腈中的一種。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述活性豬腦多肽的制備方法，其特征在于:在步驟(四)所述除菌過濾采用膜過濾法，所述膜的孔徑為0.45- 0.2μπι。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述活性豬腦多肽的制備方法，其特征在于:在步驟(四)所述離心去除沉淀，離心速率為7000-9000轉(zhuǎn)/min，離心分離時間為10_30min。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種活性豬腦多肽的制備方法，采用醋酸進行初步水解得到豬腦膠原蛋白；采用絲氨酸蛋白酶進行定向酶解，得到豬腦多肽混合液，采用有機溶劑沉淀、離心分離以及膜除菌相結(jié)合的分離工藝，既分離得到水解多肽產(chǎn)品，又同時實現(xiàn)去雜、去色、去味和除菌，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量；通過控制適宜的酶解條件，使膠原蛋白大分子斷裂成活性多肽；采用二苯酯磷酰雜環(huán)化合物對豬腦多肽中的羥基進行活化，增加了多肽的水溶性，便于在化妝品、醫(yī)藥、食品等工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用。
【IPC分類】C07K1/30, C07K1/08, C12P21/06
【公開號】CN105039482
【申請?zhí)枴緾N201510545539
【發(fā)明人】劉冬明
【申請人】劉冬明
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年8月31日