一種用于深層發(fā)酵生產(chǎn)蝙蝠蛾擬青霉菌粉專用蛋白胨的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及大宗藥用真菌品種發(fā)酵技術領域，特別涉及一種專用于深層發(fā)酵蝙蝠蛾擬青霉菌粉蛋白胨產(chǎn)品的制備方法。
技術背景
[0002]冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)是我國傳統(tǒng)的中藥材，具有抑制腫瘤生長、增強機體免疫力等的作用，與人參、鹿茸并稱為“中藥寶庫的三大瑰寶”。由于冬蟲夏草生長環(huán)境極為苛刻，且采挖又在蟲草菌孢子成熟脫落之前，給冬蟲夏草野生資源帶來毀滅性打擊，此外冬蟲夏草的人工培育技術還沒有得到突破。這些因素導致野生冬蟲夏草資源有限和價格十分昂貴。如何解決這個問題呢？
[0003]研究人員利用從西藏那曲產(chǎn)地的新鮮冬蟲夏草[Cordyccps sinensis (berksacc)]中分離所得的蟲草菌-蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepiali chen&dai)菌株，通過深層發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵產(chǎn)物過濾干燥制成發(fā)酵菌粉。經(jīng)多年研究認為該菌粉核心功效成分包括多糖、腺苷、蟲草酸、蟲草素等，與青海產(chǎn)優(yōu)質天然冬蟲夏草對照，進行成分對比分析結果證明，蝙蝠蛾擬青霉菌粉與天然冬蟲夏草化學成分基本一致，藥理作用也和天然冬蟲夏草基本相同。野生冬蟲夏草價格昂貴，另外由于生長環(huán)境無法嚴格控制，較易產(chǎn)生重金屬超標、污染等問題，導致其不適宜普通老百姓長期服用。蝙蝠蛾擬青霉菌粉作為天然蟲草的升級替代品，較好地解決了上述問題。目前蝙蝠蛾擬青霉菌粉于1989年獲衛(wèi)生部批準的一類中藥新藥(原料)批準文號為[(89)衛(wèi)藥準字Z-17號]，這也是國家衛(wèi)生部實行“新藥審批辦法”以來生產(chǎn)的第一個中藥一類新藥。在二十年的臨床應用當中，其良好的臨床效果以及可靠的安全性深獲國內(nèi)外醫(yī)藥專家學者的認可。2001年3月23日國家衛(wèi)生部發(fā)文:衛(wèi)法監(jiān)發(fā)(2001)84號文，確認為可用于保健食品的真菌名單。目前生產(chǎn)蝙蝠蛾擬青霉菌粉的企業(yè)有江西國藥責任有限公司、浙江萬豐企業(yè)集團制藥有限公司、江蘇神華藥業(yè)股份有限公司等企業(yè)，年銷售菌粉3000噸左右，估計以其為主要原料的產(chǎn)品市場銷售額超過50億
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[0004]工業(yè)生產(chǎn)中常用豆柏作為蝙蝠蛾擬青霉菌粉的發(fā)酵底物，由于豆柏的可溶性較差，往往導致菌粉中含有較多未能溶解的豆柏殘渣，嚴重的甚至導致一半的發(fā)酵菌粉是豆柏殘渣，影響了產(chǎn)品的質量。隨著越來越多的客戶對產(chǎn)品質量提出了更高的要求，一些企業(yè)改用蛋白胨作為發(fā)酵原料，蛋白胨具有較高的可溶性，避免了菌粉中大量的殘渣。目前市場上蛋白胨產(chǎn)品尚無針對蝙蝠蛾擬青霉菌粉的發(fā)酵開發(fā)專用蛋白胨，也無相關專利報道。為此，本發(fā)明專門針對蝙蝠蛾擬青霉菌粉的發(fā)酵生產(chǎn)制備一種保證在等同成本條件下，具有較高菌絲體干重和較高品質的蛋白胨制備工藝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的是提供一種制備應用于蝙蝠蛾擬青霉菌粉發(fā)酵蛋白胨的方法，并要求該蛋白胨相比于常用于該菌粉發(fā)酵的蛋白胨在等同成本條件下使用，具有更高的菌絲體生物量和更尚的廣品品質。
[0006]本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的:
[0007](I)將新鮮豬與牛的骨、內(nèi)臟、精肉作為原料。各重量比例范圍為牛骨22-28%，豬骨22-28%，牛內(nèi)臟8-12%，豬內(nèi)臟8-12%，豬精肉5_15%，牛精肉15-25% ；
[0008](2)將配好的原料置于盆內(nèi)，用40-50°C水沖洗一遍，將各原料用相應機器進行粉碎，骨頭面積不超過2cmX2cm，內(nèi)臟和精肉用絞肉機絞2_3次，然后所有原料混合再加水浸泡，加水比例為原料的1-1.2倍；
[0009](3)將步驟⑵中制備好的原料，加入到高壓蒸汽爐內(nèi)，將壓力升至0.1Mpa-0.2Mpa，保持壓力平衡，溫度為150_180°C，蒸煮4_7小時，讓其污油分層便于放湯；
[0010](4)將骨湯溫度冷卻并控制在45-55°C，調節(jié)pH到7.0-8.0后，添加牛胰蛋白酶，進行酶解1-3小時，當pH降低到60-7.0時，升高溫度到60-70°C，添加木瓜酶進行酶解2_4小時，降低溫度到40-50°C，調節(jié)pH到9.0-10.0后，添加地衣芽孢桿菌2709產(chǎn)的堿性蛋白酶，進行酶解1-3小時，最后再調節(jié)pH到7.0-8.0后，溫度維持在40-50°C，添加復合酶(由牛胰蛋白酶和枯草桿菌1398產(chǎn)的中性蛋白酶組成，總酶活單位(U/g)比例為1: 3)，進行酶解2-4小時；
[0011](5)酶解結束后，調pH值至6.0-6.5，在不斷攪拌下將料液升溫至75°C _85°C后，并煮開5-10min，加入活性白陶土脫色，用量為原料中蛋白總量的1_2%，時間是1-1.5小時；
[0012](6)將酶解液經(jīng)板框過濾，獲得濾液，經(jīng)過0.3 μπι?0.5 μπι超濾膜過濾，以除去致病菌；
[0013](7)將澄清酶解液經(jīng)雙效蒸發(fā)器，在60°C -80°C減壓濃縮，獲得濃縮液；
[0014](8)將濃縮液經(jīng)噴霧塔中進行噴霧干燥成粉狀，控制進風溫度160°C -175°C，出風溫度85 °C -95 °C，得到產(chǎn)品。
[0015]本發(fā)明的優(yōu)點:一、本發(fā)明以豬和牛的骨頭、內(nèi)臟、精肉為原料，來源豐富，生產(chǎn)成本較低，進行混合保證原料更加均衡的營養(yǎng)；二是本工藝先經(jīng)過單酶水解后，再利用復合酶進行水解，較傳統(tǒng)工藝僅經(jīng)過一次酶水解不同，另外本專利各單酶和復合酶均在較佳的酶解條件下進行，水解更為徹底，有利于提高蛋白胨的質量和得率。三、經(jīng)發(fā)酵試驗驗證，本工藝所生產(chǎn)的蛋白胨相對于常用動物蛋白胨，在相等成本條件下，所獲得更高蝙蝠蛾擬青霉菌菌粉干重和有效成分含量。
【具體實施方式】
[0016]實例I
[0017]將豬與牛的骨、內(nèi)臟、精肉作為原料。各重量比例范圍為牛骨22%，豬骨22%，牛內(nèi)臟8 %，豬內(nèi)臟8 %，豬精肉15 %，牛精肉25 %。將配好的原料置于盆內(nèi)，用40 °C水沖洗一遍，將各原料用相應機器進行粉碎，骨頭面積不超過2cmX2cm，內(nèi)臟和精肉用絞肉機絞2次，然后所有原料混合再加水浸泡，加水比例為原料的1.0倍。將制備好的原料，加入到高壓蒸汽爐內(nèi)，將壓力升至0.1Mpa，保持壓力平衡，溫度為150°C，蒸煮4小時，讓其污油分層便于放湯。將骨湯溫度冷卻并控制在45°C，調節(jié)pH到7.0后，添加牛胰蛋白酶，進行酶解I小時，當pH降低到6.0時，升高溫度到60°C，添加木瓜酶進行酶解2小時，降低溫度到40°C，調節(jié)PH到9.0后，添加地衣芽孢桿菌2709產(chǎn)的堿性蛋白酶，進行酶解I小時，最后再調節(jié)PH到7.0后，溫度維持在40 V，添加復合酶(由牛胰蛋白酶和枯草桿菌1398產(chǎn)的中性蛋白酶組成，總酶活單位比例為1: 3)，進行酶解2小時。酶解結束后，調pH值至6.0，在不斷攪拌下將料液升溫至75°C后，并煮開5min，加入活性白陶土脫色，用量為原料中蛋白總量的I %，時間是1.0小時。將酶解液經(jīng)板框過濾，獲得濾液，經(jīng)過0.3 μ m超濾膜過濾；將澄清酶解液經(jīng)雙效蒸發(fā)器，在60°C減壓濃縮，獲得濃縮液。將濃縮液經(jīng)噴霧塔中進行噴霧干燥成粉狀，控制進風溫度160°C，出風溫度85°C，得到產(chǎn)品。
[0018]在10噸發(fā)酵罐生產(chǎn)條件下，用等同成本的該蛋白胨替代常用于發(fā)酵蝙蝠蛾擬青霉菌粉的動物蛋白胨，所獲得的菌粉干重為28.4g/