專利名稱：蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇的免疫活性研究的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明公開了蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇的免疫活性研究，并采用刀豆蛋白A(ConA)誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和小鼠碳廓清實驗的方法對其進行免疫功能檢驗，研究結(jié)果表明蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇具有對離體T淋巴細胞的抑制作用，并能明顯增強小鼠體內(nèi)單核吞噬細胞的吞噬功能，對小鼠整體具有增強免疫力的作用。該研究屬于菌物生藥在醫(yī)藥與保健品領域的應用方法，對于蝙蝠蛾擬青霉的保健品食品的開發(fā)提供了一定的研究基礎，并對未來麥角甾醇所要開發(fā)的新型產(chǎn)品提供了一定的理論基礎。
背景技術(shù)：
蝙蝠蛾擬青霉是天然冬蟲夏草分離得到無性型菌株，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)，所得菌絲體的作用與天然冬蟲夏草相似。蝙蝠蛾擬青霉中含有豐富的糖類、蛋白質(zhì)、留體化合物、脂肪酸、萜類化合物等。其中，麥角留醇作為留體化合物的I種，為真菌類的特征留醇，卻很少受到關注。本文采采用刀豆蛋白A (ConA)誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和小鼠碳廓清實驗的方法進行免疫功能檢驗，進而來驗證麥角留醇的增強免疫活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇的免疫活性的研究，，方法與結(jié)果如下I、實驗方法(常規(guī)試驗方法)(I)淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗樣品溶液制備精密稱取樣品，30% DMSO溶解，完全培養(yǎng)液稀釋至lOOPg/ml，以O. 22 μ m濾膜過濾除菌，完全培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。取BALB/C小鼠，頸椎脫臼法處死，無菌取脾，制成脾細胞懸液，Hank’ s液洗2次(離心1000rpm，5min)，置于RPMI 1640完全培養(yǎng)液中，計數(shù)，將細胞稀釋成濃度為2 X IO6的細胞懸液，加入96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μ I，每組3個復孔，同時設陰性對照孔、陽性對照孔及空白孔。試驗孔加入ΙΟΟμ I不同濃度的樣品溶液，陰性對照孔及空白孔加入培養(yǎng)液，陽性對照孔加入10 μ g/ml ConA ΙΟΟμ I。37。。，5% C02孵箱中培養(yǎng)48h，加入5mg/ml MTT溶液20 μ 1，繼續(xù)培養(yǎng)4h，終止反應。取出培養(yǎng)板，小心吸去上清液，加入150 μ I DMS0，充分溶解結(jié)晶，酶標儀490nm測定各孔OD值。結(jié)果用轉(zhuǎn)化率表示，計算公式如下轉(zhuǎn)化率=(樣品孔OD值一空白孔OD值)/ (對照孔OD值一空白孔OD值)X 100%。(2)小鼠碳廓清實驗將小鼠分為對照組，低劑量組，高劑量組，分別灌服生理鹽水，5mg/kg/d麥角甾醇，10mg/kg/d麥角留醇。每天I次，連續(xù)15天。于末次給藥I h后，各組小鼠按體重每0. lml/10g尾靜脈注射5倍量稀釋的印度墨汁生理鹽水液，于注射墨汁后2min及l(fā)Omin，用毛細玻璃管從小鼠眼眶后靜脈叢取血20μ1，之后將其立即加入2ml的0. 1% Na2C03溶液中，搖勻，于分光光度計600 nm波長處測吸光度(0D )值，以Na2C03溶液作為空白對照溶液。之后將小鼠處死，取脾臟和肝臟，用濾紙吸取臟器表面的血污，分別稱重并記錄。
廓清指數(shù)K = ( IogOD 2 - IogODlO) / ( tlO - t2 )吞噬指數(shù)a=體重/ (肝重+脾重)X3VK實驗數(shù)據(jù)用 ±5表示，并采用SPSS18. O for Windows統(tǒng)計軟件進行分析。P< O. 05說明在統(tǒng)計學上呈顯著差異，P <0.01說明在統(tǒng)計學上呈極顯著差異。2.結(jié)果與分析(I)麥角甾醇對小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化作用的影響見表I表I麥角甾醇對小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化作用的影響( ± , n=6)
權(quán)利要求
1.本發(fā)明所用的蝙蝠蛾擬青霉是天然冬蟲夏草中分離得到無性型菌株，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)，所得菌絲體中含有豐富的糖類、蛋白質(zhì)、留體化合物、脂肪酸、萜類化合物等，其中，麥角甾醇的含量達到15. 65%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述，從蝙蝠蛾擬青霉中分離得到的麥角留醇是留體化合物的I種，為真菌類的特征留醇，并對其進行免疫力的檢驗來驗證麥角留醇是否能給我們?nèi)梭w帶來好處。本發(fā)明首次驗證了蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇具有對小鼠離體T淋巴細胞的抑制作用，并能明顯增強小鼠體內(nèi)單核吞噬細胞的吞噬功能，對小鼠整體具有增強免疫力的作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇的免疫活性研究。采用刀豆蛋白A(ConA)誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和小鼠碳廓清實驗的方法對其進行免疫功能檢驗，研究結(jié)果表明蝙蝠蛾擬青霉中麥角甾醇具有對離體T淋巴細胞的抑制作用，并能明顯增強小鼠體內(nèi)單核吞噬細胞的吞噬功能，對小鼠整體具有增強免疫力的作用。該研究屬于菌物類藥在醫(yī)藥與保健品領域的應用方法，對于蝙蝠蛾擬青霉的保健品食品的開發(fā)提供了一定的研究基礎，并對未來含有麥角甾醇的新產(chǎn)品的開發(fā)方面提供了一定的理論基礎。
文檔編號C12N1/14GK102978123SQ201210524269
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月8日
發(fā)明者包海鷹, 樊曉飛 申請人:包海鷹