蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株ph40在治療糖尿病中的醫(yī)用用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明公開了蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40在治療糖尿病的醫(yī)用用途，屬于中藥 和保健品技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0003] 糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，長(zhǎng)期存在的高血糖，導(dǎo)致患者各種 組織，特別是眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害、功能障礙。國(guó)際糖病聯(lián)盟統(tǒng)計(jì)，20世紀(jì)90 年代，全球糖尿病患者約1億人，到2007年，該數(shù)字增長(zhǎng)到2. 46億，預(yù)計(jì)到2025年，全球?qū)?有3. 8億人受糖尿病的困擾。我國(guó)是僅次于印度的糖尿病第二大國(guó)，據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部調(diào)查顯 示，我國(guó)每天約新增糖尿病患者3000例，每年約新增120萬(wàn)糖尿病患者，糖尿病直接醫(yī)療費(fèi) 以年均19. 90%的比例迅速增長(zhǎng)。糖尿病不斷增長(zhǎng)的患病率和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)已引起全社會(huì)的廣 泛關(guān)注。
[0004]目前糖尿病治療藥物主要分為口服藥物和注射胰島素類，口服藥物給藥方便，但 伴隨較大的副作用，同時(shí)目前市售的抗糖尿病藥物對(duì)糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防作用弱，且不能 徹底治愈。注射胰島素類藥物難以控制，易引起胰島素耐受，增加疾病的治療難度。
[0005] 蝙蝠蛾擬青霉為天然冬蟲夏草中分離到的內(nèi)寄生菌，是天然冬蟲夏草中普遍存在 的一種蟲草的無(wú)性型，其菌絲體發(fā)酵物具有廣泛的藥理活性，可以作為天然冬蟲夏草有效 成分和功效的原料，開發(fā)前景廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40在糖尿病的醫(yī)用用途，具有明顯的醫(yī) 療效果。
[0007] 本發(fā)明所述的蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40是以蝙蝠蛾擬青霉菌株（RCEF1429)為 原始菌株，經(jīng)誘變篩選獲得，已于2014年12月26日保藏《中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心》，命名 為 cAe/7PH40 ;蝙蝠蛾擬青霉菌株P(guān)H40,保藏號(hào)為：CCTCCNO:M 2014670。
[0008] 本發(fā)明所述的蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉是通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0009] (a)液體深層發(fā)酵方法發(fā)酵生產(chǎn)蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40,收集發(fā)酵液，5000r/ min離心lOmin，收集沉淀，凍干，得蝙蝠蛾擬青霉高產(chǎn)菌株菌絲體。
[0010] (b)取蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌絲體，加入藥用輔料，制備得到蝙蝠蛾擬青 霉誘變菌株P(guān)H40菌粉制劑。
[0011] (C)蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制劑具有抗糖尿病活性。
[0012] 本發(fā)明采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合小劑量鏈脲霉素注射方法建立二型糖尿病大 鼠模型，采用該大鼠模型證明蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40抗糖尿病活性。該研宄屬于菌類 藥物在中藥和保健品研發(fā)領(lǐng)域，為以蝙蝠蛾擬青霉高產(chǎn)誘變菌株P(guān)H4tl為主要原料的新產(chǎn)品 的開發(fā)提供依據(jù)。
[0013] 本發(fā)明的積極效果在于：提供了蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40制備治療糖尿病藥 物中的用途，對(duì)糖尿病晚期腎炎并發(fā)癥具有很好的預(yù)防作用。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 為了能夠更好地了解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，下面通過(guò)具體實(shí)施案例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳 細(xì)描述。
[0015] 實(shí)施例1 利用液體深層發(fā)酵方法發(fā)酵生產(chǎn)蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40,取蝙蝠蛾擬青霉誘變菌 株P(guān)H40發(fā)酵液1L，5000r/min離心lOmin，收集沉淀，真空冷凍干燥，采用高速粉碎機(jī)粉碎， 過(guò)60目篩，收集菌粉，為蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉1 實(shí)施例2 利用液體深層發(fā)酵方法發(fā)酵生產(chǎn)蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40,取蝙蝠蛾擬青霉誘變菌 株P(guān)H40發(fā)酵液1L，噴霧干燥，收集菌粉，為蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉2。
[0016] 實(shí)施例3 利用液體深層發(fā)酵方法發(fā)酵生產(chǎn)蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40,取蝙蝠蛾擬青霉誘變菌 株P(guān)H40發(fā)酵液1L，5000r/min離心lOmin，收集沉淀，真空冷凍干燥，采用高速粉碎機(jī)粉碎， 過(guò)60目篩，收集菌粉，為蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉3。
[0017] 取菌粉3,加入碳酸氫鈉、羧甲基纖維素鈉等藥用輔料，制備得到蝙蝠蛾擬青霉誘 變菌株P(guān)H40菌粉制劑3。
[0018] 實(shí)施例4 以實(shí)施例1~3制備的蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉為主要成分，加以多種藥用輔 料，制備得到的片劑、粉劑、膠囊劑及口服制劑。
[0019] 以下試驗(yàn)表明本發(fā)明在抗糖尿病保健品中的應(yīng)用： 1、材料和方法 I. 1受試物實(shí)施例1菌粉1、實(shí)施例2菌粉2、實(shí)施例3制劑3。
[0020] 1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供健康SD雄性大鼠200只，體重180-220g。隨機(jī)分為5 組，每組40只。
[0021] 1.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境 溫度22 °C，濕度52%。
[0022] 1. 4劑量選擇 該保健品制劑的推薦劑量為成人(按體重60kg計(jì)算）1.2g，按人體推薦量的12倍對(duì)大 鼠進(jìn)行給藥，三組受試物分別用生理鹽水配置成濃度為〇.〇2g/ml的溶液，建模大鼠灌胃給 藥4周后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，灌胃給藥體積為2.Oml/kg。同時(shí)設(shè)置一空白對(duì)照組，用生理鹽水代 替受試物進(jìn)行給藥，灌胃體積與受試物相同。
[0023] 1.5實(shí)驗(yàn)方法 1. 5. 1二型糖尿病大鼠模型的建立 健康SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后，尚糖尚脂伺料喂養(yǎng)2個(gè)月后，禁食不禁水12h，小劑 量連續(xù)一周尾靜脈注射預(yù)冷的2%STZ(鏈脲霉素，現(xiàn)用現(xiàn)配)，注射劑量為25mg/kg/d。注 射后3h灌胃含25%葡萄糖0.8ml/200g;正常對(duì)照組注射等體積檸檬酸緩沖液（pH4.3)。 72h后尾靜脈采血，測(cè)空腹血糖，以血糖值彡11.Immol/L者為造模成功。
[0024] 1.5. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重及血糖變化 大鼠給藥期間，尾靜脈取血，測(cè)其治療前后血糖指標(biāo)，同時(shí)記錄大鼠治療前后體重變 化。
[0025] 結(jié)果顯示，蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制劑可以顯著降低二型糖尿病 大鼠快速血糖值，與模型組相比具有顯著差異性p〈〇. 01，同時(shí)可以顯著提高大鼠體重 p〈0. 01，證明蝙蝠蛾擬青霉PH4tl具有很好的降血糖作用。
[0026] 對(duì)大鼠胰島素水平的影響 胰島素分泌缺陷是II型糖尿病的顯著特征之一，低的胰島素分泌導(dǎo)致體內(nèi)葡萄糖和 脂質(zhì)代謝的紊亂。在糖尿病大鼠給藥前后，大鼠尾靜脈取血，采用治療前后大鼠血漿胰島素 水平變化。
[0027] 結(jié)果顯示，與模型組相比，蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制劑可以顯著提高 大鼠治療后血漿胰島素水平，結(jié)果P〈〇.005,具有顯著性差異。
[0028] 大鼠糖化血紅蛋白水平變化 糖化血紅蛋白是紅細(xì)胞中血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物，糖化血紅蛋白的生成是不可逆 的，而且其濃度與血糖濃度成相關(guān)，紅細(xì)胞中糖化血紅蛋白的濃度通?？梢苑从郴颊?-12 周內(nèi)血糖濃度的變化，體現(xiàn)糖尿病患者對(duì)血糖的控制情況。大鼠給藥結(jié)束后，心臟取血，測(cè) 定大鼠紅細(xì)胞中糖化血紅蛋白水平。
[0029] 結(jié)果顯示，模型組大鼠糖化血紅蛋白水平顯著升高，p〈0. 01;與模型組相比，實(shí)驗(yàn) 組大鼠糖化血紅蛋白水平均顯著下降，P〈〇. 01。說(shuō)明蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制 劑對(duì)糖尿病大鼠血糖水平控制較好。
[0030] 大鼠血清中丙酮酸激酶活性檢測(cè) 丙酮酸激酶是葡萄糖體內(nèi)分解的限速酶，其活性的變化直接影響機(jī)體葡萄糖分子的分 解利用。大鼠治療結(jié)束后，心臟取血，測(cè)定大鼠血清丙酮酸激酶含量。
[0031] 結(jié)果顯示，模型組大鼠血清丙酮酸激酶水平顯著下降，p〈0. 01，葡萄糖利用率下 降；與模型組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠血清丙酮酸激酶水平均顯著上升，P〈〇. 01。說(shuō)明蝙蝠蛾擬青 霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制劑對(duì)糖尿病大鼠血清丙酮酸激酶水平具有較高的促進(jìn)作用。
[0032] 蝙蝠蛾擬青霉高產(chǎn)菌株對(duì)大鼠腎炎因子的影響 大鼠治療結(jié)束，心臟取血，測(cè)定大鼠血清尿酸、尿素氮、血清白蛋白、總蛋白水平。
[0033] 結(jié)果顯示，與模型組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠血清尿酸、尿素氮、總蛋白水平顯著下降 (p〈0. 01)，白蛋白水平顯著上升（p〈0. 01)，說(shuō)明蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制劑對(duì) 大鼠糖尿病腎病具有很好的預(yù)防和治療作用。
[0034] 綜上結(jié)果證明，蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉及制劑具有很高的抗糖尿病作 用，對(duì)糖尿病晚期腎炎并發(fā)癥具有很好的預(yù)防作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40在制備治療糖尿病藥物中的醫(yī)用用途；所述的菌株已 于2014年12月26日保藏《中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心》，命名為cAe/? PH40 ;蝙蝠蛾擬青霉菌株P(guān)H40,保藏號(hào)為：CCTCCNO:M2014670。2. -種蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉的制備方法，其特征于利用權(quán)利要求1所述 蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40的發(fā)酵液1L，5000r/min離心lOmin，收集沉淀，真空冷凍干燥， 采用高速粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，收集菌粉即得。3. 以權(quán)利要求書2制備的蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40菌粉為主要成分，加以多種藥 用輔料，制備得到的片劑、粉劑、膠囊劑及口服制劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40在糖尿病的醫(yī)用用途，具有明顯的醫(yī)療效果。所述的蝙蝠蛾擬青霉誘變菌株P(guān)H40是以蝙蝠蛾擬青霉菌株（RCEF1429）為原始菌株，經(jīng)誘變篩選獲得，已于2014年12月26日保藏《中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心》，保藏號(hào)為：CCTCC M2014670。CCTCC NO：M201467020141226
【IPC分類】A61P3/10, A61K36/068
【公開號(hào)】CN104906145
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510280983
【發(fā)明人】孟慶繁, 劉艷, 孟令軍, 王娟, 王迪, 李龍圖, 滕利榮, 權(quán)宇彤, 逯家輝
【申請(qǐng)人】吉林大學(xué)
【公開日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年5月28日