制霉菌素的提純方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗生素的提純方法，具體地，涉及一種制霉菌素的提純方法。
【背景技術】
[0002] 制霉菌素是一種具有共輒多烯大環(huán)內酯結構的多烯型抗生素，主要用于內服治療 消化道真菌感染或外用于表面皮膚真菌感染炎、雞和火雞哺囊真菌病等，對曲霉菌、毛霉菌 引起的乳腺炎，乳管灌注也有效。是一種常用的抗生素。
[0003]目前，現(xiàn)有技術制備的制霉菌素主要是通過發(fā)酵諾爾斯鏈霉菌，提純諾爾斯鏈霉 菌的發(fā)酵液制成，現(xiàn)有的提純主要是單純的利用乙醇對制霉菌素進行萃取，這種提純方法 不能除去諾爾斯鏈霉菌的發(fā)酵液中存在的很多雜質，從而使得提取的制霉菌素純度較低， 極大的降低了制霉菌素的藥效。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種制霉菌素的提純方法，通過該方法提純的制霉菌素具有 優(yōu)異的純度，且提純過程簡便易行，成本低廉。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種制霉菌素的提純方法，該提純方法包括：
[0006] (1)將醇加入諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液中進行萃取取上層液體得到萃取液Ml;
[0007] (2)將所述萃取液Ml蒸發(fā)制得沉淀物M2 ;
[0008] (3)將所述沉淀物M2置于丙酮溶液中熱處理制得混合物M3 ;
[0009] (4)將所述混合物M3第一冷卻后取上清液并過濾得到沉淀物M4 ;
[0010] (5)將所述沉淀物M4置于焦磷酸鹽的異丁醇溶液中加熱制漿得到混合物M5 ;
[0011] (6)將所述混合物M5第二冷卻至25 °C、過濾制得制霉菌素。
[0012] 通過上述技術方案，本發(fā)明將諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液在醇中進行萃取反應，蒸發(fā)萃 取劑得到沉淀物，再將沉淀物置于丙酮溶液中進行熱處理，將得到的混合物冷卻靜置，取上 清液并過濾，接著將過濾產物在焦磷酸鹽的異丁醇水溶液中加熱制漿，最后將漿液冷卻、過 濾得到純度較高的制霉菌素，通過上述提純方法制得了高純度的制霉菌素。
[0013] 本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【具體實施方式】
[0014] 以下對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體 實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0015] 本發(fā)明提供了一種制霉菌素的提純方法，該提純方法包括：
[0016] (1)將醇加入諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液中進行萃取取上層液體得到萃取液Ml;
[0017] (2)將所述萃取液Ml蒸發(fā)制得沉淀物M2 ;
[0018] (3)將所述沉淀物M2置于丙酮溶液中熱處理制得混合物M3 ;
[0019] (4)將所述混合物M3第一冷卻后取上清液并過濾得到沉淀物M4 ;
[0020] (5)將所述沉淀物M4置于焦磷酸鹽的異丁醇溶液中加熱制漿得到混合物M5 ;
[0021] (6)將所述混合物M5第二冷卻至25°C、過濾制得制霉菌素。
[0022] 上述提純方法將諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液在醇中進行萃取反應，蒸發(fā)萃取劑得到沉淀 物，再將沉淀物置于丙酮溶液中進行熱處理，將得到的混合物冷卻靜置，取上清液并過濾， 將過濾產物在焦磷酸鹽的異丁醇水溶液中加熱制漿，將漿液冷卻至25°C后過濾得到純度較 高的制霉菌素，通過上述提純方法制得了高純度的制霉菌素。
[0023] 在上述提純方法中，醇可以在寬的范圍內選擇，可以是C1-C6中的任意一種醇，為 了能溶解更多的制霉菌素，優(yōu)選地，醇為正丙醇、異丙醇、甲醇中的一種或多種。
[0024] 同樣地，醇和諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液的用量的用量均可以在寬的范圍內選擇，為了 使萃取反應進行的更快，優(yōu)選地，相對于100體積份的醇，所述諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液的用量 為45-55體積份。
[0025] 當然，對萃取反應的溫度、時間均不作進一步限定，為了使萃取反應進行的更快， 優(yōu)選地，萃取反應至少滿足以下條件：反應溫度為25-40°C，反應時間為l_3h。
[0026] 同樣地，蒸發(fā)的溫度和時間均可以在寬的范圍內選擇，為了能更快的除去萃取劑， 優(yōu)選地，蒸發(fā)滿足以下條件：蒸發(fā)溫度為100-120°C，蒸發(fā)時間為l-2h。
[0027] 同時，沉淀物M2和丙酮溶液的用量均可以在寬的范圍內選擇，為了去除更多的雜 質，優(yōu)選地，相對于100重量份的沉淀物M2,所述丙酮溶液的用量為250-350重量份。
[0028] 在上述提純方法中，丙酮溶液的濃度和溶劑均不作進一步的限定，為了使制得的 制霉菌素具有較高的濃度，優(yōu)選地，丙酮溶液為丙酮水溶液，并且含有33-55重量％的丙 酮。
[0029] 同樣地，步驟（3)中熱處理的溫度和時間均可以在寬的范圍內選擇，為了使制得 的制霉菌素具有較高的濃度，優(yōu)選地，熱處理的條件為：加熱溫度為35-45°C，加熱時間為 30-60min〇
[0030] 同時，步驟（4)中第一冷卻的溫度和時間可以在寬的范圍內選擇，為了使沉淀物 加快析出，優(yōu)選地，第一冷卻的條件為：冷卻溫度為15_25°C，冷卻時間為30-60min。
[0031] 當然，沉淀物M4和焦磷酸鹽的異丁醇溶液的用量可以在寬的范圍內選擇，為了使 制得的制霉菌素具有較高的濃度，優(yōu)選地，相對于100重量份的所述沉淀物M4,所述焦磷酸 鹽的異丁醇溶液的用量為150-250重量份。
[0032] 同樣，焦磷酸鹽的種類可以在寬的范圍內選擇，可以是焦磷酸鉀、焦磷酸鈉、焦磷 酸鈣和酸式焦磷酸鈉中的一種或多種，為了使制得的制霉菌素的濃度更高，優(yōu)選地，磷酸鹽 選自焦磷酸鉀、焦磷酸鈉和焦磷酸鈣中的一種或多種。
[0033] 另外，焦磷酸鹽的異丁醇溶液中焦磷酸鹽濃度可以在寬的范圍內選擇，優(yōu)選地，焦 磷酸鹽的異丁醇溶液中焦磷酸鹽濃度為5-15重量％。
[0034] 在上述提純方法中，步驟（5)中加熱的溫度和時間均未做進一步限定，為了使制 得的制霉菌素具有較高的濃度，優(yōu)選地，步驟（5)中加熱的條件為：加熱溫度為50-70°C，加 熱時間為40-80min。
[0035] 以下將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述。以下實施例中，諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液 為沈陽華飛有限公司的市售品，丙酮溶液為中潤化工有限公司的市售品，焦磷酸鹽購自銀 河化工科技有限公司，異丁醇購自惠豐化工有限公司。制霉菌素的純度（w)通過分光光度 法測定而得。
[0036] 實施例1
[0037] (1)在35°C下，將正丙醇加入諾爾斯鏈霉菌發(fā)酵液中（體積比為100 :50)，萃取2h 后取上層液體得到萃取液Ml;
[0038] (2)在IKTC下，蒸發(fā)萃取液M12h以制得沉淀物M2 ;
[0039] (3)在40°C下，將沉淀物M2置于40重量％的丙酮溶液（質量比為100 :300)中熱 處理40min制得混合物M3 ;
[0040] (4)將混合物M3在20°C下第一冷卻40min，取上清液并過濾得到沉淀物M4 ;
[0041] (5)在60°C下，將沉淀物M4置于10重量％的焦磷酸鉀的異丁醇溶液（質量比為 100 :200)中加熱60min制漿得