管理
[0132] 接種后將菌瓶放在恒溫培養(yǎng)室內(nèi)，避光培養(yǎng)。溫度控制在23°C，相對(duì)濕度70%~ 75%。此階段用于栽培料中的養(yǎng)分完全分解和積累。發(fā)菌期管理的關(guān)鍵是保溫、保濕，前期 如果溫度過(guò)低，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，會(huì)降低菌種活力，菌絲生產(chǎn)速度減慢。所有菌瓶菌絲濃白后 再持續(xù)培養(yǎng)15d，使養(yǎng)分徹底分解，菌絲達(dá)到生理成熟。
[0133] 3. 2開瓶、搔菌
[0134] 菌瓶后熟期過(guò)后，按常規(guī)方法進(jìn)行開瓶、搔菌處理。搔菌過(guò)程中，液體菌種搔菌時(shí) 去掉表面薄薄一層即可。搔菌完成后將菌瓶移入出菇房，菌瓶倒置，使菌絲恢復(fù)生長(zhǎng)。待 菌絲恢復(fù)后，溫度控制在14°C~16°C，相對(duì)濕度為90~95%，光照500~800Lx，CO 2濃度 600~1500ppm，待現(xiàn)蕾出葫。
[0135] 3. 3子實(shí)體生長(zhǎng)管理
[0136] 溫度控制在15~18°0，空氣濕度保持在85%~90%，0)2濃度在1500~1800??111 之間，子實(shí)體生長(zhǎng)迅速。當(dāng)菇蓋基本展開，孢子尚未彈射時(shí)采收一潮菇。
[0137] 4.質(zhì)量及產(chǎn)量指標(biāo)測(cè)定
[0138] 觀察記錄試驗(yàn)組和對(duì)照組栽培瓶的菌絲濃度、菌絲顏色、發(fā)菌時(shí)間、雜菌感染狀 況，觀察比較子實(shí)體性狀，測(cè)量子實(shí)體菌柄長(zhǎng)度、菌蓋大小和菌柄直徑、單瓶產(chǎn)量，并統(tǒng)計(jì)計(jì) 算雜菌感染率、一級(jí)菇率和生物轉(zhuǎn)化率，結(jié)果如表1-3 :
[0139] 生物學(xué)轉(zhuǎn)化率（％)=子實(shí)體鮮品產(chǎn)量（g)/培養(yǎng)料干重（g) X 100%
[0140] 表 1
[0141]
[0142] 以上結(jié)果表明：本發(fā)明杏鮑菇液體菌種健壯、活力高，生長(zhǎng)速度快，菌絲產(chǎn)量和質(zhì) 量高，抗雜菌能力強(qiáng)，與對(duì)照組相比發(fā)菌時(shí)間縮短22. 22%，雜菌感染率降低96. 67%。
[0143] 表 2
[0145] 以上結(jié)果表明：本發(fā)明杏鮑菇液體菌種栽培后的子實(shí)體菌蓋與菌柄生長(zhǎng)比例合 適，外觀優(yōu)美，質(zhì)量等級(jí)高，與對(duì)照組相比一級(jí)菇率提高5%。
[0146] 表 3
[0148] ^以上結(jié)果表明：本發(fā)明杏鮑菇液體菌種栽培后的子實(shí)體單憑產(chǎn)量高，生物轉(zhuǎn)化率 高，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益，更加適合工廠化、規(guī)?；耘唷Ｅc對(duì)照組相比，生物轉(zhuǎn)化率提高 34. 79 % 〇
[0149] 同時(shí)，本發(fā)明杏鮑菇液體菌種菌絲球密度高為5. 5 X IO5個(gè)/L，市售杏鮑菇液體菌 種菌絲球密度最高為2. 7 X IO5個(gè)/L，與對(duì)照組相比，其生產(chǎn)能力為市售杏鮑菇液體菌種2 倍以上，體現(xiàn)了較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0150] 需要說(shuō)明的是：本發(fā)明實(shí)施例3-7制備的鮑菇液體菌種同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效果， 各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高密度液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)基，包括液體種子培養(yǎng)基、搖瓶培養(yǎng)基、種子罐培養(yǎng)基 和發(fā)酵罐培養(yǎng)基，其特征在于，培養(yǎng)基成分中含有中草藥提取物和木肩粉； 所述中草藥提取物的制備方法，包括如下步驟：按重量份數(shù)計(jì)，稱取黃芪30份，干姜30 份，陳皮30份，牛黃25份，丹皮25份，甘草20份，知母18份，金銀花18份，魚腥草17份， 赤芍15份，黃芩15份，川芎10份，當(dāng)歸8份；置盛有0. 2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中 于200W、30KHz清洗12min，瀝干，將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，置容器中均勻混 合并添加5倍重量的水，得混合物料，控制溫度80°C保持3h，接著降溫至45°C，用乳酸調(diào)節(jié) pH值為4,在功率200W條件下進(jìn)行微波提取12min，同時(shí)在功率250W，頻率35KHz條件下進(jìn) 行超聲波輔助提??；然后加入混合物料總重量1. 〇%的混合酶進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)PH值 為6. 2,酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量 比為1:2,控制溫度至70°C保持3. 5h，過(guò)濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度 90°C保持2h，然后降溫至30°C，過(guò)濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比3:2 合并，濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物； 所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比4:3:3:2均勻混合。2. 如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組成為：黃豆餅 粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物I. 5-2g/L，木肩粉0. 6-1. Og/L，磷酸二 氫鉀 0. 5g/L，硫酸鎂 0. 5g/L，VB1 0. 01g/L，余量為水，pH 值 6. 0。3. 如權(quán)利要求2所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的制備方法為：按 照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各原料，首先取黃豆餅粉質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5-6， 加入5u/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶，邊攪拌邊加入黃豆餅粉，升溫至90-95°C，保溫， 液化10-15min，然后降溫至50-60°C，保溫，邊攪拌邊加入40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/ g黃豆餅粉的蛋白酶水解20-30min，邊攪拌邊加入剩余水和其它原料，均勻混合，調(diào)整pH值 為6. 0,121-123°C滅菌30-40min即得發(fā)酵罐培養(yǎng)基。4. 如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述液體種子培養(yǎng)基組成為：葡萄糖 30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，瓊脂2g/L，中草藥提取物0. 3-0. 5g/L，磷酸二氫鉀 〇? 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，木肩粉 0? 1-0. 3g/L，VB1 0? 01g/L，余量為水，pH 值 6. 0。5. 如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述搖瓶培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉 60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物0. 6-0. 8g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，木肩粉 0? 1-0. 3g/L，VB1 0? 01g/L，余量為水，pH 值 6. 0。6. 如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述種子罐培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉 60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物0. 8-1. 2g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，木肩粉 0? 3-0. 5g/L，VB1 0? 01g/L，余量為水，pH 值 6. 0。7. 如權(quán)利要求1-6任一所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述木肩粉的制備方法包括 如下步驟：將無(wú)發(fā)霉、無(wú)病蟲鋸木末或廢木肩除去雜物，置于裝有質(zhì)量百分比濃度0.5%的 碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗10min，沖洗、瀝干，放入蒸汽釜中于 0. 3-0. 4MPa蒸煮20-30min，取出，瀝干，與植物油按質(zhì)量比100:1均勻混合，然后將混合物 置微波干燥機(jī)于2000W、120°C微波福照5min，使之水分達(dá)到8-10%，最后超微粉碎至粒徑 0. 3-0. 5mm，密封包裝即得木肩粉。8. 如權(quán)利要求7所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，微波干燥時(shí)微波輻照10s，停留10s。9. 利用如權(quán)利要求1-8任一所述的發(fā)酵培養(yǎng)基制備高密度液體菌種的方法，其特征在 于，包括如下步驟：將保存的杏鮑菇斜面菌種經(jīng)平板培養(yǎng)基活化后依次經(jīng)液體種子培養(yǎng)基、 搖瓶種子培養(yǎng)基和種子罐培養(yǎng)基逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)得到種子罐種子，首先將種子罐種子以8% 接種量接種于30L發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)基裝液量15L,于30-32°C、通氣量3-5L/min恒溫發(fā) 酵12-24h,然后以0. 3-0. 5°C /min的速率降溫至18-22°C，向發(fā)酵罐中加入10_12g包被殼 聚糖和900mL種子罐種子，在通氣量6_8L/min條件下恒溫發(fā)酵10_16h，最后以0. 2-0. 4°C / min的速率升溫至24-26°C，在通氣量5-7L/min條件下恒溫發(fā)酵45-52h即得高密度液體菌 種； 所述包被殼聚糖的制備方法包括如下步驟：取殼聚糖加入其質(zhì)量30-50%的質(zhì)量百分 比濃度為13-15%的a-環(huán)狀糊精水溶液中，制成軟材，用10-20目篩制粒，得濕顆粒，置微 波干燥機(jī)中于功率2000W、60-80°C干燥4-6min，用10-20目篩快速整粒即得包被殼聚糖。10. 如權(quán)利要求9所述的制備高密度液體菌種的方法，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng) 基的組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物I. 8g/L，木肩粉 〇? 8g/L，磷酸二氫鉀 0? 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，VB1 0? 01g/L，余量為水，pH 值 6. 0。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高密度液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)基，屬于杏鮑菇栽培技術(shù)領(lǐng)域，在液體種子、搖瓶種子、種子罐種子及發(fā)酵罐液體菌種各階段培養(yǎng)基中科學(xué)復(fù)配可提高菌種抗冷、熱應(yīng)激性、免疫性和抗雜菌能力的中草藥提取物，同時(shí)科學(xué)復(fù)配了既具有原料適應(yīng)性，又具有消泡劑功能的木屑粉，并且采用追加接種和分段變溫發(fā)酵的方式，縮短了菌種菌齡及增殖代數(shù)差距，適時(shí)流加包被后的具有特殊功能的殼聚糖，培養(yǎng)出發(fā)酵菌絲粗壯、活性高、菌絲球直徑小、密度大、分布均勻的杏鮑菇液體菌種，其菌絲球密度為4.5-5.5ⅹ105個(gè)/L，菌絲球直徑為0.5-0.7mm，菌絲球干重為90-100g/L，萌發(fā)時(shí)間為4-5h，胞外多糖為3.0-3.5g/L。
【IPC分類】C12R1/645, C12N1/14
【公開號(hào)】CN104946541
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510317940
【發(fā)明人】李建樹
【申請(qǐng)人】天津中天精科科技有限公司, 李建樹
【公開日】2015年9月30日
【申請(qǐng)日】2015年6月11日