;
[0092] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的制備方法為：按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料，首先取黃豆 餅粉質量6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6,加入5u/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶，邊攪 拌邊加入黃豆餅粉，升溫至95°C，保溫，液化15min，然后降溫至60°C，保溫，邊攪拌邊加入 40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解30min，邊攪拌邊加入剩余水和其 它原料，均勻混合，調(diào)整pH值為6. 0,121°C滅菌30min即得發(fā)酵罐培養(yǎng)基。
[0093] 經(jīng)上述方法制備的高密度液體菌種菌絲球密度為4. 8 X IO5個/L，菌絲球直徑為 0. 5mm，菌絲球干重為92g/L，胞外多糖為3. lg/L。
[0094] 實施例5
[0095] -種利用發(fā)酵培養(yǎng)基制備高密度液體菌種的方法，包括如下步驟：
[0096] 步驟1)至4)同實施例2 ;
[0097] 5)首先將種子罐種子以8%接種量接種于30L發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)基裝液量15L， 于32°C、通氣量3L/min恒溫發(fā)酵24h，然后以0. 3°C /min的速率降溫至22°C，向發(fā)酵罐中 加入IOg包被殼聚糖和900mL種子罐種子，在通氣量8L/min條件下恒溫發(fā)酵10h，最后以 0. 4°C /min的速率升溫至24°C，在通氣量7L/min條件下恒溫發(fā)酵45h即得高密度液體菌 種；
[0098] 所述平板培養(yǎng)基組成同實施例2 ;
[0099] 所述液體種子培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，瓊脂 2g/L，中草藥提取物0. 3g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 3g/L，VB1O. Olg/ L，余量為水，pH值6.0 ;
[0100] 所述搖瓶培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取 物0. 6g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 3g/L，VB10.0 1g/L，余量為水，pH值 6. 0 ；
[0101] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提 取物0. 8g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 5g/L，VB10.0 1g/L，余量為水，pH 值 6. 0 ;
[0102] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥 提取物I. 5g/L，木肩粉I. 0g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，VB10.0 1g/L，余量為水， pH 值 6. 0 ;
[0103] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的制備方法為：按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料，首先取黃豆 餅粉質量4倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6,加入5u/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶，邊攪 拌邊加入黃豆餅粉，升溫至90°C，保溫，液化15min，然后降溫至50°C，保溫，邊攪拌邊加入 40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解30min，邊攪拌邊加入剩余水和其 它原料，均勻混合，調(diào)整pH值為6. 0,121°C滅菌40min即得發(fā)酵罐培養(yǎng)基。
[0104] 經(jīng)上述方法制備的高密度液體菌種菌絲球密度為4. 6 X IO5個/L，菌絲球直徑為 0. 7mm，菌絲球干重為90g/L，胞外多糖為3. lg/L。
[0105] 實施例6
[0106] -種利用發(fā)酵培養(yǎng)基制備高密度液體菌種的方法，包括如下步驟：
[0107] 步驟1)至4)同實施例2 ;
[0108] 5)首先將種子罐種子以8%接種量接種于30L發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)基裝液量15L， 于30°C、通氣量5L/min恒溫發(fā)酵12h，然后以0. 5°C /min的速率降溫至18°C，向發(fā)酵罐中 加入12g包被殼聚糖和900mL種子罐種子，在通氣量6L/min條件下恒溫發(fā)酵16h，最后以 0. 2°C /min的速率升溫至26°C，在通氣量5L/min條件下恒溫發(fā)酵52h即得高密度液體菌 種；
[0109] 所述平板培養(yǎng)基組成同實施例2 ;
[0110] 所述液體種子培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，瓊脂 2g/L，中草藥提取物0. 5g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. lg/L，VB1O. Olg/ L，余量為水，pH值6.0 ;
[0111] 所述搖瓶培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取 物0. 8g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. lg/L，VB10.0 1g/L，余量為水，pH值 6. 0 ；
[0112] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提 取物I. 2g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 3g/L，VB10.0 1g/L，余量為水，pH 值 6. 0 ;
[0113] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥 提取物2g/L，木肩粉0. 6g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，VB10.0 1g/L，余量為水，pH 值 6. 0 ;
[0114] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的制備方法為：按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料，首先取黃豆 餅粉質量6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5,加入5u/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶，邊攪 拌邊加入黃豆餅粉，升溫至95°C，保溫，液化10min，然后降溫至60°C，保溫，邊攪拌邊加入 40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解20min，邊攪拌邊加入剩余水和其 它原料，均勻混合，調(diào)整pH值為6. 0,123°C滅菌30min即得發(fā)酵罐培養(yǎng)基。
[0115] 經(jīng)上述方法制備的高密度液體菌種菌絲球密度為5. 2 X IO5個/L，菌絲球直徑為 0. 6mm，菌絲球干重為98g/L，胞外多糖為3. 4g/L。
[0116] 實施例7
[0117] -種利用發(fā)酵培養(yǎng)基制備高密度液體菌種的方法，包括如下步驟：
[0118] 步驟1)至4)同實施例2 ;
[0119] 5)首先將種子罐種子以8%接種量接種于30L發(fā)酵罐，發(fā)酵罐培養(yǎng)基裝液量15L， 于31°C、通氣量4L/min恒溫發(fā)酵18h，然后以0.4°C/min速率降溫至20°C，向發(fā)酵罐中加入 Ilg包被殼聚糖和900mL種子罐種子，在通氣量7L/min條件下恒溫發(fā)酵13h，最后以0. 3°C / min速率升溫至25°C，在通氣量6L/min條件下恒溫發(fā)酵48h即得高密度液體菌種；
[0120] 所述平板培養(yǎng)基組成為：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，磷酸二氫鉀 3g/L，硫酸鎂 I. 5g/L，瓊脂 20g/L，VB10.0 2g/L，余量為水，pH 值 6. 0 ;
[0121] 所述液體種子培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，瓊脂 2g/L，中草藥提取物0. 4g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 2g/L，VB1O. Olg/ L，余量為水，pH值6.0 ;
[0122] 所述搖瓶培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取 物0. 7g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. ZgA^VB10.0 1g/L，余量為水，pH值 6. 0 ；
[0123] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提 取物I. 0g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 4g/L，VB10.0 1g/L，余量為水，pH 值 6. 0 ;
[0124] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥 提取物I. 8g/L，木肩粉0. 8g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，VB10.0 1g/L，余量為水， pH 值 6.0。
[0125] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的制備方法為：按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料，首先取黃豆 餅粉質量6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5,加入5u/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶，邊攪 拌邊加入黃豆餅粉，升溫至95°C，保溫，液化lOmin，然后降溫至60°C，保溫，邊攪拌邊加入 40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解20min，邊攪拌邊加入剩余水和其 它原料，均勻混合，調(diào)整pH值為6. 0,123°C滅菌30min即得發(fā)酵罐培養(yǎng)基。
[0126] 經(jīng)上述方法制備的高密度液體菌種菌絲球密度為4. 5 X IO5個/L，菌絲球直徑為 0. 7mm，菌絲球干重為90g/L，胞外多糖為3. Og/L。
[0127] 實施例8本發(fā)明制備的高密度液體菌種的栽培試驗
[0128] 1.試驗菌種：以本發(fā)明實施例2制備的液體菌種和市售的"龍海3號"液體菌種為 試驗菌種，分為試驗組和對照組；
[0129] 2.接種方法：試驗組和對照組以相同的接種量和接種密度采用常規(guī)方法接種，分 別接種2000瓶；
[0130] 3.生產(chǎn)管理：試驗組和對照組采用同樣的管理方法
[0131] 3.1發(fā)菌