收至溶劑中有少量沉淀即可停止。進(jìn)一步放置至析出淡黃色沉淀，過(guò)濾得到Vicenin-1粗品。最后用葡聚糖凝膠色譜分離(SephadexG-75)，即色譜分離IV，用純甲醇沖柱，分份收集，每5體積份收集一份，共收集20-30個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離IV得到的第10-20流份合并，回收溶劑得到黃色的粉末。利用電噴霧電離質(zhì)譜(ES1-MS)和光譜法(H1-NMR和C13-NMR)對(duì)得到黃色粉末進(jìn)行鑒定，鑒定黃色粉末為Vicenin-Ι，純度88.7%。
[0049]實(shí)施例3
[0050]選用豆科植物廣金錢(qián)草45000-50000重量份，切成5_10cm小段，飲用水清洗掉泥沙，瀝干，投料。80%乙醇回流提取兩次，第一次12倍量2h，第二次10倍量1.5h ;合并兩次醇提液，回收乙醇至無(wú)醇味。提取濃縮液加水稀釋至藥材重量的5倍體積；200目濾布過(guò)濾；得上柱液；將事先用95%乙醇處理過(guò)的凈品樹(shù)脂裝柱，純化水替換；將上柱液用泵打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完畢后，靜置2h ;用純化水沖洗，洗脫流速3-4BV/h，洗脫量1BV ;再用60%乙醇洗脫，洗脫流速2-3BV/h，洗脫量5BV ;60%洗脫液合并，打入濃縮罐，回收乙醇至無(wú)醇味，至真空干燥箱中50-70°C干燥，得廣金原料藥300-400重量份。
[0051]將廣金原料藥300-400重量份用AB-8大孔樹(shù)脂色譜分離，即色譜分離I，乙醇-水混合溶劑20:80, 30:70, 40:60, 60:40梯度洗脫，每個(gè)梯度沖到無(wú)顏色即可，合并各流份得20%，30%，40%，60%，共四個(gè)部位；色譜I得到的20%部位用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離II，用乙醇-水，條件為12 %等度30min，12-30 %梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集40-50個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離II得到的15-35流份合并，進(jìn)一步用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離III，用乙醇-水，條件為10%等度30min，10-15%梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集35-45個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離III得到的第25-40流份合并，回收至溶劑中有少量沉淀即可停止。進(jìn)一步放置至析出淡黃色沉淀，過(guò)濾得到Vicenin-1粗品。最后用葡聚糖凝膠色譜分離(S^hadex G-75)，即色譜分離IV，用純甲醇沖柱，分份收集，每5體積份收集一份，共收集20-30個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離IV得到的第10-25流份合并，回收溶劑得到黃色的粉末。經(jīng)電噴霧電離質(zhì)譜(ES1-MS)和光譜法(H1-NMR和C13-NMR)對(duì)得到黃色粉末進(jìn)行鑒定，黃色粉末為Vicenin-1，純度90.1 %。
[0052]實(shí)施例2和3的工藝條件生產(chǎn)出的黃色粉末Vicenin-Ι，純度顯著低于實(shí)施例1分離提取的Vicenin-1。
[0053]在本說(shuō)明書(shū)的描述中，參考術(shù)語(yǔ)“一個(gè)實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說(shuō)明書(shū)中，對(duì)上述術(shù)語(yǔ)的示意性表述不一定指的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任何的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。
[0054]盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解:在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種提取分離Vicenin-1的方法，其特征在于，包括以下步驟: 利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物； 利用醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行多級(jí)色譜分離，其中包括， 利用第一醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行第一色譜分離，獲得第一分離部分， 利用第二醇體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分， 利用第三醇體系對(duì)所述第二分離部分進(jìn)行第三色譜分離，以獲得所述Vicenin-1。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物，包括: 利用濃度50-95%的乙醇對(duì)所述廣金錢(qián)草進(jìn)行兩次回流提取，合并兩次回流提取所得的提取液，獲得合并提取液， 除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和離子，以及任選的，進(jìn)行干燥，以獲得所述提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述兩次回流提取，其中 一次的乙醇和廣金錢(qián)草的重量比為12:1，回流提取的時(shí)間為1.5h-3h，任選的為2h， 另一次的乙醇和廣金錢(qián)草的重量比為10:1，回流提取的時(shí)間為lh-2h，任選的為1.5h。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一醇體系為乙醇-水體系，所述乙醇-水體系中的乙醇的濃度為18-25%， 任選的，所述乙醇-水體系中的乙醇的濃度為20%， 所述第一色譜為大孔樹(shù)脂。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二醇體系為乙醇-水體系， 所述乙醇-水體系中的乙醇的濃度為6-30%， 所述第二色譜為反向色譜。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述反向色譜為反向中壓色譜， 任選的，所述反向中壓色譜為C18柱，其柱壓為l-10bar，洗脫流速為5?30ml/min。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述利用第二醇體系對(duì)第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，包括: 利用乙醇濃度為a的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行等度洗脫25-40min，接著換用乙醇濃度為[a，b]的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行梯度洗脫180-250min，收集以獲得所述第二分離部分，其中， a的取值范圍為6-12%，b的取值范圍為15-30%。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述利用第二醇體系對(duì)第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，包括: 利用乙醇濃度為c的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行等度洗脫30min，接著換用乙醇濃度為[c，d]的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行梯度洗脫200min，收集獲得初級(jí)第二分離部分， 利用乙醇濃度為e的乙醇-水體系對(duì)所述初級(jí)第二分離部分進(jìn)行等度洗脫30min，接著換用乙醇濃度為[e，f]的乙醇-水體系對(duì)所述初級(jí)第二分離部分進(jìn)行梯度洗脫200min，收集獲得所述第二分離部分，其中， c和e的取值范圍為6-12%，d和f的取值范圍為15-30%，c>e，d>f。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述第三醇體系為純甲醇，所述第三色譜為凝膠色譜。10.一種提取分離Vicenin-1的系統(tǒng)，其特征在于，包括: 回流提取裝置，用以利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物； 色譜分離裝置，用于利用醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行多級(jí)色譜分離，其包括， 第一色譜分離單元，與所述回流提取裝置相連，用于利用第一醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行第一色譜分離，獲得第一分離部分， 第二色譜分離單元，與所述第一色譜分離單元相連，用于利用第二醇體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分， 第三色譜分離單元，與所述第二色譜分離單元相連，用于利用第三醇體系對(duì)所述第二分離部分進(jìn)行第三色譜分離，以獲得所述Vicenin-1。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種提取分離Vicenin-1的方法，該方法包括以下步驟：利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物；利用醇體系對(duì)提取物進(jìn)行多級(jí)色譜分離，其中包括，利用第一醇體系對(duì)提取物進(jìn)行第一色譜分離，獲得第一分離部分，利用第二醇體系對(duì)第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，利用第三醇體系對(duì)第二分離部分進(jìn)行第三色譜分離，以獲得所述Vicenin-1。本發(fā)明還提供一種實(shí)施上述方法的系統(tǒng)。利用本發(fā)明的方法和/或系統(tǒng)從廣金錢(qián)草中分離提取Vicenin-1，工藝操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)時(shí)間短，產(chǎn)品收率高，純度高，能夠獲得純度達(dá)到95％以上的Vicenin-1。
【IPC分類】C07H1/08, C07H17/07
【公開(kāi)號(hào)】CN104926896
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510347049
【發(fā)明人】王學(xué)海, 許勇, 李莉娥, 楊仲文, 馮蕓, 余通, 楊婷, 尹海龍, 黃璐, 曹儒賓, 謝長(zhǎng)
【申請(qǐng)人】武漢光谷人福生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月19日