描述中將變得明顯和容易理解，其中:
[0019]圖1顯示Vicenin-Ι的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；
[0020]圖2顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的步驟流程；
[0021]圖3顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的步驟流程；
[0022]圖4顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的提取分離圖1所示化合物的系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0023]圖5顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的流程圖；
[0024]圖6顯示本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中的提取純化產(chǎn)物的ES1-MS質(zhì)譜圖；
[0025]圖7顯示本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中的提取純化產(chǎn)物的H1-NMR譜圖；以及
[0026]圖8顯示本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中的提取純化產(chǎn)物的C13-NMR譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0028]需要說(shuō)明的是，術(shù)語(yǔ)“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對(duì)重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個(gè)或者更多個(gè)該特征。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說(shuō)明，“多個(gè)”的含義是兩個(gè)或兩個(gè)以上。
[0029]下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方案進(jìn)行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下面的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0030]實(shí)施例1
[0031]圖5顯示本發(fā)明方法的一般流程，包括以下:
[0032]1、原料處理:選用豆科植物廣金錢草45000-50000重量份，切成5-10cm小段，飲用水清洗掉泥沙，瀝干，投料。
[0033]2、乙醇提取:80%乙醇回流提取兩次，第一次12倍量2h，第二次10倍量1.5h ;合并兩次醇提液，回收乙醇至無(wú)醇味。
[0034]3、減壓濃縮:提取濃縮液加水稀釋至藥材重量的5倍體積；200目濾布過(guò)濾；得上柱液；將事先用95%乙醇處理過(guò)的凈品樹脂裝柱，純化水替換；將上柱液用泵打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完畢后，靜置2h ;用純化水沖洗，洗脫流速3-4BV/h，洗脫量1BV ;再用60%乙醇洗脫，洗脫流速2-3BV/h，洗脫量5BV ;60%洗脫液合并，打入濃縮罐，回收乙醇至無(wú)醇味，至真空干燥箱中50-70°C干燥，得廣金原料藥300-400重量份。
[0035]4、多級(jí)色譜分離
[0036](I)將廣金原料藥300-400重量份用AB_8大孔樹脂色譜分離，即色譜分離I，具體為:用乙醇-水混合溶劑20:80, 30:70, 40:60, 60:40梯度洗脫，每個(gè)梯度沖到無(wú)顏色即可，合并各流份得20 %，30 %，40 %，60 %共四個(gè)部位。
[0037](2)將色譜分離I得到的20%部位用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離II，具體為:用乙醇-水，條件為10%等度30min，10-30%梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集40-50個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份。
[0038](3)將色譜分離II得到的10-29流份合并，進(jìn)一步用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離III，具體為:用乙醇-水，條件為8%等度30min，8-15%梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集35-45個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份。
[0039](4)將色譜分離III得到的第25-35流份合并，減壓濃縮至有少量沉淀即可停止。進(jìn)一步放置至析出淡黃色沉淀，過(guò)濾得到Vicenin-1粗品。最后用葡聚糖凝膠色譜分離(Sephadex G-75)，即色譜分離IV，將圖1所示化合物加入至甲醇-水(體積比為1:1)中，超聲溶解，進(jìn)樣體積為10毫升，用純甲醇沖柱，分份收集，每5體積份收集一份，共收集20-30個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離IV得到的第9-20流份合并，回收溶劑得到黃色粉末。
[0040]其中，(2)和(3)即色譜分離II和色譜分離III都是利用ODS反相中壓色譜，對(duì)應(yīng)上述所稱的第二色譜分離。
[0041]5、結(jié)構(gòu)鑒定
[0042]經(jīng)電噴霧電離質(zhì)譜(ES1-MS)和光譜法(H1-NMR和C13-NMR)對(duì)得到黃色粉末進(jìn)行鑒定，結(jié)合ES1-MSj1-NMR和C13-NMR譜圖信息推斷該化合物的分子式為C26H28O14,確定上述從廣金錢草中提取分離出的黃色粉末為Vicenin-Ι，經(jīng)HPLC純度檢驗(yàn)，純度達(dá)到95%以上，作為廣金錢草鑒別和含量測(cè)定用的對(duì)照品，以及廣金錢草及其相關(guān)藥物制劑如廣金錢草總黃酮膠囊的質(zhì)量控制用。
[0043]圖6為Vicenin-1進(jìn)行電噴霧電離質(zhì)譜的質(zhì)譜圖，ES1-MS m/z:565[M+H]+，顯示黃色粉末中各成分的分子量。
[0044]圖 7 顯示 Vicenin-1 的 H1-NMR 譜圖，H1-NMR (DMSO, 400HZ)δ:13.76 (5-OH),8.01 (2H, d, J = 8.4Hz, H-2 ? , 6 ? ),6.92 (2H, d, J =8.4Hz, H-3，，5，)，6.78 (1Η, s, Η_3)。
[0045]圖 8 顯示 Vicenin-1 的 C13-NMR 譜圖，C13-NMR(DMSO，100HZ) δ: 163.7(C_2), 102.5 (C-3)，182.2 (C-4), 161.1 (C-5)，108.1 (C-6)，159.2 (C-7)，103.4 (C-8)，155.2 (C-9)，102.5 (C-10), 121.5(0-Γ )，128.9(C_2，6，)，115.9(C_3，5，)，161.3(C_4，)，74.9 (C_l” ofXyl)，70.3(C-2，，of Xyl)，77.8 (C_3，，of Xyl)，69.9 (C_4，，of Xyl)，69.6 (C_5，，of Xyl)，72.3(C-1，，，of Glc)，71.3(C-2，，，of Glc)，78.8 (C_3，，，of Glc)，70.5 (C_4，，，of Glc)，81.8 (C-5，，，of Glc)，60.6 (C-6，，，of Glc)。其中所述 Xyl 代表木糖，Glc 代表葡萄糖。
[0046]實(shí)施例2
[0047]選用豆科植物廣金錢草45000-50000重量份，切成5_10cm小段，飲用水清洗掉泥沙，瀝干，投料。80%乙醇回流提取兩次，第一次12倍量2h，第二次10倍量1.5h ;合并兩次醇提液，回收乙醇至無(wú)醇味。提取濃縮液加水稀釋至藥材重量的5倍體積；200目濾布過(guò)濾；得上柱液；將事先用95%乙醇處理過(guò)的凈品樹脂裝柱，純化水替換；將上柱液用泵打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完畢后，靜置2h ;用純化水沖洗，洗脫流速3-4BV/h，洗脫量1BV ;再用60%乙醇洗脫，洗脫流速2-3BV/h，洗脫量5BV ;60%洗脫液合并，打入濃縮罐，回收乙醇至無(wú)醇味，至真空干燥箱中50-70°C干燥，得廣金原料藥300-400重量份。
[0048]將廣金原料藥300-400重量份用AB_8大孔樹脂色譜分離，即色譜分離I，乙醇-水混合溶劑25:75, 35:65, 45:55, 65:35梯度洗脫，每個(gè)梯度沖到無(wú)顏色即可，合并各流份得25 %，35 %，45 %，65 %共四個(gè)部位；色譜I得到的25 %部位用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離II，用乙醇-水，條件為8%等度30min，8-30%梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集40-50個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離II得到的15-30流份合并，進(jìn)一步用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離III，用乙醇-水，條件為6%等度30min，6-15%梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集35-45個(gè)流份，高效液相色譜檢識(shí)后合并相同流份；色譜分離III得到的第20-35流份合并，回