,J= 8. 4Hz), 7. 806-7. 778 (m, 2H), 7. 6 35-7. 539 (m, 4H)，7. 365-7. 126 (m, 2H)，5. 500 (s, 2H)。
[0320] 實施例23 :4-(4-(2, 6-二氯苯甲?；?8-氟-3, 4-二氫喹喔啉-1(2H)_基）苯 甲酸
[0321]
[0322] 本實施例化合物可以按照與前述實施例22類似的步驟方法進(jìn)行制備，不同 之處在于步驟2中使用1，2-二溴乙烷為原料代替2-溴代乙酰氯進(jìn)行氨基的取代反 應(yīng)。相關(guān)表征數(shù)據(jù)如下：MS+H+= 445. 2 ; 1H-NMR(O)Cl3, 300MHz)S:ppm, 4. 10 (t,J= 5. 7Hz, 2H), 4. 30 (t,J= 5. 7Hz, 2H), 6. 61-6. 70 (m, 1H), 6. 97 (d,J= 8. 4Hz, 2H), 7. 25-7. 35 ( m, 5H)，7. 97 (d,J= 8. 4Hz, 2H)。
[0323] 體外牛物活性篩選
[0324] 本發(fā)明的化合物可以調(diào)節(jié)（抑制）核受體RORY的生物活性，此調(diào)節(jié)（抑制）作 用的強弱能通過TR-FRET篩選體系來評價。核受體輔因子（共激活因子和共抑制因子）通 過與核受體的相互作用可以調(diào)節(jié)目的基因的轉(zhuǎn)錄。如果配體（受試化合物）影響了核受體 和輔因子的相互作用，那么這種配體（受試化合物）就可以調(diào)節(jié)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。
[0325]本方法米用LifeTechnologies公司的LanthaScreenTR-FRET(時間分辨焚 光能量共振轉(zhuǎn)移）技術(shù)測定化合物對RORy與其共激活因子相互作用的調(diào)節(jié)能力（激 動或反向激動）。鉞（Tb)標(biāo)記的抗GST抗體（LifeTechnologies#PV3550)通過結(jié)合在 RORy-LBD(LifeTechnologies#PV5887)的GST標(biāo)簽上而對RORy-LBD進(jìn)行非直接標(biāo)記。 沒有配體存在時RORy可以與熒光素標(biāo)記的共激活因子持續(xù)結(jié)合，激動劑與RORy結(jié)合后 可以增強RORy與熒光素標(biāo)記的共激活因子的相互作用；反向激動劑與RORy結(jié)合后可以 抑制RORy與熒光素標(biāo)記的共激活因子的相互作用。熒光素標(biāo)記的共激活因子與鋱標(biāo)記的 抗GST抗體-ROR標(biāo)記的共激復(fù)合物相互接近到一定距離即可發(fā)生能量轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生TR-FRET 信號。本方法使用的共激活因子不限于Fluorescein_D22(LifeTechnologies#PV4386)、 Fluorescein-SRC1-2(LifeTechnoIogies#PV4578)、Fluorescein-SRC1-4(Life Technologies#PV4582)等。
[0326] (I)本方法反應(yīng)體系的終濃度和反應(yīng)條件如下表：（表I)
[0327]
[0328] (2)實驗方法
[0329]配制CompleteTR-FRETCoregulatorBufferD(以下簡稱完全緩沖液D): 向TR-FRETCoregulatorBufferD(LifeTechnologies#PV4420)加入DTT(Life Technologies#P2325)至DIT終濃度為 5mM。
[0330] 使用完全緩沖液D配制2XFluorescein-D22 (0. 3yM，使用其它共激活肽時 參照表1)和2XTb標(biāo)記的抗GST抗體（4nM)的混合溶液，10yL/孔加入到384-孔板 (Corning3376)中。
[0331] 使用DMSO配制100X終濃度梯度稀釋的待測化合物，然后使用完全緩沖液D將待 測化合物稀釋至4X (DMS0含量為4%)，5 y L/孔加入到上述384-孔板中，混合均勻。陽性 對照孔中以5 y L/孔加入含有4% DMSO的完全緩沖液D(無待測化合物）。
[0332] 使用完全緩沖液D配制4XRORy-LBD(8nM)，5yL/孔加入到上述384-孔板中，混 合均勻。陰性對照孔中加入5yL/孔完全緩沖液D(無RORy-LBD)。將384-孔板置于恒溫 振蕩器中，于23°C避光孵育4~5小時。
[0333] 使用TecanMlOOOPr0測定熒光強度：1)激發(fā)波長332/20nm，發(fā)射波長490/10nm， 增益值：優(yōu)化，閃光：模式2 (IOOHz)，延遲時間100ys，整合時間200ys;2)激發(fā)波長 332/20nm，發(fā)射波長520/20nm，增益值：優(yōu)化，閃光：模式2 (IOOHz)，延遲時間100ys，整合 時間200ys。
[0334] (3)數(shù)據(jù)分析
[0335] 使用程序GraphPad Prism繪制TR-FRET比值F520/F490-化合物濃度的對數(shù)曲 線，并計算出EC50值，此數(shù)值越小說明化合物對受體RORy調(diào)節(jié)（在本實施例中為抑制） 作用的越強。
[0336] 部分實施例化合物對RORy作用的EC50值見下表：（表2)
[0337]
[0338] 已經(jīng)通過舉例說明和實施例的方式詳細(xì)描述了上述發(fā)明，以用于闡述和理解的目 的。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可以在后附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)進(jìn)行改變和改進(jìn)。 因此，應(yīng)該理解上述說明是舉例說明性的而不是限制性的。因此，本發(fā)明的范圍不應(yīng)該參考 上述說明書而確定，而應(yīng)該參考下列后附的權(quán)利要求以及由權(quán)利要求授權(quán)的等價物的全部 范圍而確定。
【主權(quán)項】
1. 一種化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑化物或其 前藥，所述化合物具有結(jié)構(gòu)式I;其中： X選自-C做-、-c&c(0)-或-邸2邸2-; L選自-C(0)-、-S(0)-、-S做 2-或-CHg-; A選自芳基或雜芳基，所述芳基或雜芳基任選獨立地被W下的一個或多個基團取代： 面素、氨基、氯基、哲基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基橫酷基、 橫酷氨基、酷氨基、氨基甲酯基、烷基氨基甲酯基、二烷基氨基甲酯基或烷基酷基； B為選自W下的二價環(huán)；環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基，所述環(huán)烷基、雜環(huán)基、或芳基 或雜芳基任選獨立地被W下的一個或多個基團取代；面素、氨基、氯基、哲基、駿基、硝基、燒 基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基橫酷基、烷基橫酷氨基、氨基橫酷基、燒 基氨基橫酷基、二烷基氨基橫酷基、氨基甲酯基、烷基氨基甲酯基、二烷基氨基甲酯基、酷氨 基或烷基酷基； m是 0、1、2、3 或 4 ; n是0、1或2 ; Ri選自-C做Ra或-S做2於； R3選自哲基、烷氧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； Rb選自烷基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基；且 R2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、硝基、哲基、烷基酷基氧基、烷基、烷氧基、面代烷基 或面代烷氧基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽 或其溶劑化物或其前藥，其中所述化合物具有結(jié)構(gòu)式II:其中： Q選自N或-CR4; X選自-C(0) -、-C&C(0)-或-邸2邸2-; L選自-C做-、-S做廠或-邸2-; A選自Ce_i2芳基或5-12元雜芳基，所述Ce_i2芳基或5-12元雜芳基任選獨立地被W下 的一個或多個基團取代；面素、氨基、氯基、哲基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、 二烷基氨基、烷基橫酷基、橫酷氨基、酷氨基、氨基甲酯基、烷基氨基甲酯基、二烷基氨基甲 酷基或烷基酷基； m是0、1、2、3或4 ;n是0、1或2; Ri選自-C做Ra或-S做2於； R3選自哲基、烷氧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； Rb選自烷基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； R2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、硝基、哲基、烷基酷基氧基、烷基、烷氧基、面代烷基 或面代烷氧基； Rs選自氨、面素、氯基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基甲酯 基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基；且 尺4選自氨、面素或烷基。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽 或其溶劑化物或其前藥，其中，在式II中： Q是N或-CR4; X選自-C(0) -、-C&C(0)-或-邸2邸2-; L選自-C做-、-S做廠或-邸2-; A選自Ce_i(|芳基或5-10元雜芳基，所述Ce_i(i芳基或5-10元雜芳基任選獨立地被W下 的一個或多個基團取代；面素、氨基、氯基、哲基、駿基、Ci_4烷基、C1_4烷氧基、面代C1_4烷基、 Ci_4烷基氨基、二C1_4烷基氨基、氨基甲酯基、C1_4烷基氨基甲酯基或二C1_4烷基氨基甲酯基； m是0或1; n是0、1或2; Ri選自-C做Ra或-S做2於； R3選自哲基、C1_4烷氧基、氨基、C1_4烷基氨基或二C1_4烷基氨基； Rb選自C1_4烷基、氨基、C1_4烷基氨基或二C1_4烷基氨基； 尺2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、哲基、C1_4烷基、C1_4烷氧基、面代C1_4烷基或面代C1_4 烷氧基； Rs選自氨、面素、氯基、駿基、C1_4烷基、C1_4烷氧基、面代C1_4烷基、C1_4烷基氨基、二C1_4 烷基氨基、氨基甲酯基、Ci_4烷基氨基甲酯基或二C1_4烷基氨基甲酯基；且 尺4選自氨、面素或C1-4烷基。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受 的鹽或其溶劑化物或其前藥，其中所述化合物具有結(jié)構(gòu)式Ila: 其中：Q選自N或-CR4; L選自-C(0)-、-S(0) 2-或-CHg-; A選自Ce_i2芳基或5-12元雜芳基，所述Ce_i2芳基或5-12元雜芳基任選獨立地被W下 的一個或多個基團取代；面素、氨基、氯基、哲基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、 二烷基氨基、氨基甲酯基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基； m是 0、1、2、3 或 4 ; n是0、1或2 ; Ri選自-C做Ra或-S做2扔 R3選自哲基、烷氧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； Rb選自烷基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； R2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、哲基、烷基、烷氧基、面代烷基或面代烷氧基； Rs選自氨、面素、氯基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基甲酯 基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基；且 尺4選自氨、面素或烷基。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽 或其溶劑化物或其前藥，其中，在式Ila中； Q是N或-CR4; L選自-C做-、-S做廠或-CHg-; A選自苯基或5-6元雜芳基，所述苯基或5-6元雜芳基任選獨立地被W下的一個或多個 基團取代；面素、氛基、Ci_4烷基、C1_4烷氧基、面代C1_4烷基； m是0、1或2 ; n是0或1 ; Ri選自-C做Ra或-S做2於； R3選自哲基、C1_4烷氧基、氨基、C1_4烷基氨基或二C1_4烷基氨基； Rb選自C1_4烷基、氨基、C1_4烷基氨基或二C1_4烷基氨基； 尺2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、C1_4烷基、C1_4烷氧基、面代C1_4烷基或面代C1_4燒 氧基； Rs選自氨、面素、氯基、C1_4烷基、C1_4烷氧基、面代C1_4烷基、氨基甲酯基、C1_4烷基氨基 甲酯基或二烷基氨基甲酯基；且 尺4選自氨、面素或C1-4烷基。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽 或其溶劑化物或其前藥，其中，在式Ila中； Q選自N或-CR4; L選自-C(0)-或-CHg-; A為苯基，所述苯基任選獨立地被W下的一個或多個基團取代；面素、Ci_4烷基或面代Ci-4烷基； m是0或1 ;n是0 ; Ri為-C00H; 尺2當(dāng)存在時獨立地選自面素、C1_4烷基或面代C1_4烷基； Rs選自氨；且 尺4選自氨、面素或C1-4烷基。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受 的鹽或其溶劑化物或其前藥，其中，所述化合物具有結(jié)構(gòu)式Ilb:其中： Q是N或-CR4; L選自-C(0)-或-S做2-; A選自Ce_i2芳基或5-12元雜芳基，所述Ce_i2芳基或5-12元雜芳基環(huán)任選獨立地被W下 的一個或多個基團取代；面素、氨基、氯基、哲基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、 二烷基氨基、氨基甲酯基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基； m是 0、1、2、3 或 4 ; Ri選自-C做Ra或-S做2於； R3選自哲基、烷氧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； Rb選自烷基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； R2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、硝基、哲基、烷基酷基氧基、烷基、烷氧基、面代烷基 或面代烷氧基； Rs選自氨、面素、氯基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基甲酯 基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基；且 尺4選自氨、面素或烷基。8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受 的鹽或其溶劑化物或其前藥，其中，所述化合物具有結(jié)構(gòu)式He;其中： Q是N或-CR4; L選自-C(0)-或-S做2-; A選自Ce_i2芳基或5-12元雜芳基，所述Ce_i2芳基或5-12元雜芳基任選獨立地被W下 的一個或多個基團取代；面素、氨基、氯基、哲基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、 二烷基氨基、氨基甲酯基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基； m是 0、1、2、3 或 4 ; Rl選自-c做Ra或-S做2扔 Ra選自哲基、烷氧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； Rb選自烷基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基； R2當(dāng)存在時獨立地選自面素、氯基、硝基、哲基、烷基酷基氧基、烷基、烷氧基、面代烷基 或面代烷氧基； R3選自氨、面素、氯基、駿基、烷基、烷氧基、面代烷基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基甲酯 基、烷基氨基甲酯基或二烷基氨基甲酯基；且 尺4是氨、面素或烷基。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受 的鹽或其溶劑化物或其前藥，其中所述化合物選自：10. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-9中任一項所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變 異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑化物或其前藥，W及藥學(xué)上可接受的賦形劑。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，還包含一種或多種選自W下的抗炎藥；非醬 體類抗炎藥、非特異性和COX-2特異性環(huán)氧合酶抑制劑、金化合物、皮質(zhì)激素類、腫瘤壞死 因子受體括抗劑、水楊酸醋或鹽、免疫抑制劑和甲胺蝶嶺。12. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué) 上可接受的鹽或者其溶劑化物或其前藥在制備作為ROR丫調(diào)節(jié)劑的藥物中的用途。13. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué) 上可接受的鹽或其溶劑化物或其前藥在制備預(yù)防或治療ROR丫介導(dǎo)的疾病的藥物中的用 途。14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其中所述ROR丫介導(dǎo)的疾病選自；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 多發(fā)性硬化癥、銀屑病、克羅恩病、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性阻塞性肺病、組織移植物排 斥反應(yīng)和移植器官的排斥反應(yīng)、硬皮病、紫藏、自身免疫溶血性和血小板減少性癥狀、應(yīng)激 性腸綜合癥、骨關(guān)節(jié)炎、川崎氏病、橋本氏甲狀腺炎、粘膜利斯曼病、支氣管炎、過敏性鼻炎、 特應(yīng)性皮炎、囊性纖維化、肺代謝排斥反應(yīng)、兒童類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、膜腺炎、自 身免疫性糖尿病、自身免疫性眼病、潰瘍性結(jié)腸炎、sjorgen氏綜合癥、視神經(jīng)炎、糖尿病、視 神經(jīng)脊髓炎、重癥肌無力、葡萄膜炎、格林-己利綜合癥、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、葛瑞夫氏病或鞏 膜炎。
【專利摘要】本發(fā)明涉及可用作視黃酸相關(guān)孤兒受體γ(RORγ)調(diào)節(jié)劑的化合物、其藥物組合物以及其在制藥中的用途。所述化合物具有結(jié)構(gòu)式I：
【IPC分類】C07D241/44, C07D471/04, A61P7/00, A61P1/04, A61P37/02, A61P29/00, C07D235/26, A61K31/498, A61P3/10, A61P19/02, A61P17/06, A61P19/08, A61P1/00, A61K31/4184, A61P17/00, A61P21/04, A61P11/00, A61K31/437, A61P5/14, A61P25/00, A61P27/02, C07D241/42, A61P37/06, A61P11/06, A61P11/02, A61P37/08, A61P1/18
【公開號】CN104926733
【申請?zhí)枴緾N201510117243
【發(fā)明人】薛海, 趙濤, 馬濤, 車美英
【申請人】北京韓美藥品有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年3月17日
【公告號】WO2015139619A1