一種青蒿琥酯微球的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種青蒿琥酯微球的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 上世紀(jì)70年代初，中國(guó)科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)了青蒿素（Artemisinin)，后來(lái)又相 繼開(kāi)發(fā)出了雙氫青蒿素Oihvdmartemisinin)，青蒿琥醋（Artesunate)，青蒿琥醋 (Artemether)，蒿乙醚（Arteethe)等幾種青蒿素的衍生物。這類(lèi)藥物分子中均含有一個(gè)倍 半萜結(jié)構(gòu)，對(duì)許多血液原蟲(chóng)類(lèi)疾病具有很好的治療作用。其中青蒿琥酯化學(xué)名為二氫青蒿 素-1，2-a-琥泊酸單醋，分子式為C19H2808，相對(duì)分子質(zhì)量384,其分子中獨(dú)特的過(guò)氧橋結(jié) 構(gòu)，在血紅素的作用下可引發(fā)大量氧自由基，一些原蟲(chóng)體內(nèi)缺少清除自由基的酶系統(tǒng)，體內(nèi) 過(guò)多的自由基可直接作用于原蟲(chóng)的膜系統(tǒng)或氧化紅細(xì)胞膜的不飽和脂肪酸，引起膜的脂 質(zhì)過(guò)氧化等一系列變化；產(chǎn)生的丙二醛（MDA)等產(chǎn)物有很高的反應(yīng)活性，可交聯(lián)脂質(zhì)和蛋 白，導(dǎo)致原蟲(chóng)膜系統(tǒng)的損傷，使原蟲(chóng)損失大量胞漿而死亡。藥理作用廣泛，在獸醫(yī)臨床上主 要用于防治牛、羊泰勒焦蟲(chóng)病，牛、羊巴貝斯蟲(chóng)病，豬附紅細(xì)胞體病等疾病，療效十分顯著。 但由于青蒿琥酯自身分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，其在水溶液中難以溶解且很不穩(wěn)定，因此，很難將青蒿 琥酯制作成液體制劑。目前獸醫(yī)臨床上使用的青蒿琥酯多為粉針劑或一些地方標(biāo)準(zhǔn)的片 劑、散劑等。微球(microspheres)是近年來(lái)發(fā)展較快的一種新劑型，是以天然或人工合成 的高分子材料將藥物包裹其中，具有控制釋放、降低毒副作用等特點(diǎn)。微球與微囊的主要區(qū) 別在于，微球是將藥物溶解或分散在輔料中形成的小球狀實(shí)體；而微囊是則將固態(tài)或液態(tài) 藥物用輔料特別是可生物降解的高分子材料包封成的微小膠囊，它通過(guò)囊壁的降解而緩慢 釋放藥物。
[0003]目前高分子聚合物的輻射加工，是指利用輻射加工方法制備聚合物或者對(duì)已有的 聚合物進(jìn)行改性。具體的工藝有輻射聚合、輻射交聯(lián)、輻射固化和輻射接枝等。輻射交聯(lián)技 術(shù)作為高分子輻射加工業(yè)的一個(gè)重要的組成部分，隨著輻射加工業(yè)的發(fā)展，也得到了長(zhǎng)足 的進(jìn)步，取得了較多成果，但研宄集中于電線電纜等方面，作為生物藥物的制備方面特別是 青蒿琥酯新制劑的研制方面，未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種青蒿琥酯微球的制備方法。
[0005] 本發(fā)明提供一種青蒿琥酯微球的制備方法，是將青蒿琥酯和聚乳酸混合后，通過(guò) 電子束輻照后得到的。
[0006] 優(yōu)選地，采用的步驟如下： (1) 將青蒿琥酯和聚乳酸加入二氯甲烷溶劑中，配制成有機(jī)溶液； (2) 將步驟（1)得到的有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，吸收劑量5-25Gy后，將二氯甲烷揮 發(fā)，過(guò)濾，干燥得到青蒿琥酯微球；所述電子束為lOMeV。
[0007] 優(yōu)選地，所述青蒿琥酯與聚乳酸的質(zhì)量比為1 :(2-10);更優(yōu)選地，質(zhì)量比為1:10。 在該范圍內(nèi)制備得到的微球包封率、載藥量較高；當(dāng)1:10時(shí)，載藥量和包封率最高。
[0008] 優(yōu)選地，所述聚乳酸的分子量為25000-87000。在這個(gè)范圍內(nèi)適合動(dòng)物體內(nèi)的吸收 與緩釋?zhuān)瑑r(jià)格也合適。
[0009] 優(yōu)選地，所述有機(jī)溶液中聚乳酸的濃度為0. 02-0. 2g/ml。根據(jù)反應(yīng)條件的初始及 后處理的方便，選用這個(gè)濃度范圍，在該濃度范圍內(nèi)便于進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)及后處理。
[0010] 優(yōu)選地，所述輻照時(shí)吸收劑量為15Gy。此時(shí)微球的載藥量和包封率最高。
[0011] 優(yōu)選地，輻照時(shí)采用能量l〇MeV，功率4KW以上的電子直線加速器。為了在短時(shí)間 進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，必須用大功率的電子加速器，否則不能產(chǎn)生充分反應(yīng)。
[0012] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供應(yīng)用上述方法制備的青蒿琥酯微球。
[0013] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供青蒿琥酯含量的測(cè)定方法，采用高效液相色譜法進(jìn)行 測(cè)定，具體色譜條件為：色譜柱：KromasilODSC18，規(guī)格為：250mmX4.6mm，5ym;流動(dòng) 相為：乙腈和水，乙腈和水的體積比為40 :60 ;流速：1. 0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：237nm;柱溫： 30°C;進(jìn)樣量：25yL。
[0014] 本發(fā)明將電子束或y射線輻照技術(shù)用于交聯(lián)超高分子量化合物，顯著提高了其 交聯(lián)效果。高能射線輻照使聚乳酸中產(chǎn)生大量自由基，在無(wú)定形相中的自由基易相遇復(fù)合， 形成交聯(lián)結(jié)構(gòu)，即可制成微球。本發(fā)明通過(guò)電子束輻照聚乳酸分子量與青蒿琥酯形成交聯(lián)， 成功制備了緩釋微球。本發(fā)明的方法包封率高，在78- 90%;制備的青蒿琥酯微球載藥量達(dá) 35-39%，外觀圓整光滑，分散性好。
[0015] 本發(fā)明的青蒿琥酯含量的測(cè)定方法簡(jiǎn)便高效，青蒿琥酯檢測(cè)濃度在5-50μg/ml 范圍內(nèi)與峰面積積分值成良好線性關(guān)系。此方法日內(nèi)精密度，RSD=0. 943%，日間精密度RSD=0. 945%，加樣回收率為98 ±5.3 %(N=3)，表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)中濃度 為100、50、20yg/ml的對(duì)照品在衍生后0，、3、6、9、12、24h檢測(cè)，RSD分別為0.92%、 0. 96%、0. 91%，表明溶液衍生后在24h內(nèi)穩(wěn)定。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與本發(fā)明的實(shí) 施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中： 圖1為青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)圖譜； 圖2為經(jīng)過(guò)輻照后青蒿琥酯微球樣品圖譜； 圖3為未經(jīng)過(guò)輻照的青蒿琥酯微球樣品圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。
[0018] 本發(fā)明的電子直線加速器購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院近代物理研宄所。
[0019] 實(shí)施例1 按青蒿琥酯與聚乳酸(平均分子量25000)質(zhì)量比為1 :2,將青蒿琥酯和聚乳酸溶解于 二氯甲烷中，制成有機(jī)溶液，其中，聚乳酸的濃度為0.lg/ml。
[0020] 將有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，電子束lOMeV，吸收劑量5Gy后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上盡 可能使二氯甲烷溶劑揮發(fā)完全，洗滌，室溫真空干燥12h，得到青蒿琥酯微球。
[0021] 實(shí)施例2 按青蒿琥酯與聚乳酸(平均分子量50000)質(zhì)量比為1 :6,將青蒿琥酯和聚乳酸溶解于 二氯甲烷中，制成有機(jī)溶液，其中，聚乳酸的濃度為0.lg/ml。
[0022] 將有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，電子束lOMeV，吸收劑量10Gy后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上盡 可能使二氯甲烷溶劑揮發(fā)完全，洗滌，室溫真空干燥12h，得到青蒿琥酯微球。
[0023] 實(shí)施例3 按青蒿琥酯與聚乳酸(平均分子量50000)質(zhì)量比為1 :10,將青蒿琥酯和聚乳酸溶解于 二氯甲烷中，制成有機(jī)溶液，其中，聚乳酸的濃度為0. 05g/ml。
[0024] 將有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，電子束lOMeV，吸收劑量15Gy后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上盡 可能使二氯甲烷溶劑揮發(fā)完全，洗滌，室溫真空干燥12h，得到青蒿琥酯微球。
[0025] 實(shí)施例4 按青蒿琥酯與聚乳酸(平均分子量87000)質(zhì)量比為1 :2,將青蒿琥酯和聚乳酸溶解于 二氯甲烷中，制成有機(jī)溶液，其中，聚乳酸的濃度為0.lg/ml。
[0026] 將有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，電子束lOMeV，吸收劑量20Gy后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上盡 可能使二氯甲烷溶劑揮發(fā)完全，洗滌，室溫真空干燥12h，得到青蒿琥酯微球。
[0027] 實(shí)施例5 按青蒿琥酯與聚乳酸(分子量50000)質(zhì)量比為1 :2,將青蒿琥酯和聚乳酸溶解于二氯 甲烷中，制成有機(jī)溶液，其中，聚乳酸的濃度為0. 1g/ml。
[0028] 將有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，電子束10MeV，吸收劑量25Gy后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上盡 可能使二氯甲烷溶劑揮發(fā)完全，洗滌，室溫真空干燥12h，得到青蒿琥酯微球。
[0029] 實(shí)施例6 按青蒿琥酯與聚乳酸(平均分子量40000)質(zhì)量比為1 :10,將青蒿琥酯和聚乳酸溶解于 二氯甲烷中，制成有機(jī)溶液，其中，聚乳酸的濃度為〇.2g/ml。
[0030] 將有機(jī)溶液通過(guò)電子束輻照，電子束10MeV，吸收劑量5Gy后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上盡 可能使二氯甲烷溶劑揮發(fā)完全，洗滌，室溫真空干燥12h，得到青蒿琥酯微球。
[0031] 實(shí)施例7 按青蒿琥酯與聚乳酸(平均分子量30000)質(zhì)量比為1