一種抗腫瘤肽變體nc11及其應用
【專利說明】-種抗腫瘤化變體NC11及其應用
[00(川相關申請 本申請是專利申請?zhí)枮?01410312285. 2、名稱為"一種抗腫瘤膚變體及其應用"的分案 申請。
技術領域
[0002] 本發(fā)明屬于生物技術領域，具體地說，本發(fā)明涉及抗腫瘤膚變體。
【背景技術】
[0003] ND100是由1413、16111、1617、比611、2口1'〇、11'虹、口71'組成的八膚。體外及體內(nèi)試驗 均表明ND100具有明顯的抑制腫瘤細胞生長的作用，可用來制備抗腫瘤藥物，用于治療腫 瘤。
[0004] 在現(xiàn)有技術中，為了提高多膚的活性，針對多膚序列進行特異性的改變，從而尋找 活性更高的變體是常規(guī)的做法。為了進一步提高該多膚的生物活性，申請人通過大量的實 驗，針對多膚序列進行了氨基酸的改變，從而獲得了比原始多膚本身具有更高抑制活性的 變體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明涉及的多膚，序列如下： NC :AlaGluGlyLeu化oProT'hi'Tyr ; (NC1) lAlaGluGlyLeuRroProTlirlle ; (NC2) :AlaSerGlyLeuPro化oThrTyr ; (NC3) :AlaGluGlyLeuRroSerT'h:rTyr ; (NC4) :AlaGluGlyGlyLeuPro化oThrTyr ; (NC5) :AlaGluGlyGlyLeuProRroProT'h:rTyr ; (NC 6) :GlyAlaGluGlyLeu化oPro化oThrTyr ; (NC7) :AlaGlyGlyLeuRroProT'h:rTyr ; (NC8) :GlyAlaGlyGlyLeu化oProT'hi'Tyr ; (NC 9) :AlaGlyGlyLeuRroSerT'h:rTyr ; (NC 10) :GlyAlaGlyGlyLeuProSei'ThrTyr ; (NC 11) :GlyAlaGlyGlyLeuProRroProT'h:rTyr ; (NC 12) :AlaGlyGlyLeu化oPro化oThrTyr ; (NC 13) :AlaGlyGlyLeuRroProRroThrIle ; 對照 1 :AlaGluGlyLeu化oGlyT'hi'Tyr ; 對照 2 :AlaLeuGlyLeuRroProT'h:rTyr ; 本發(fā)明的多獻合成后，可W做成游離態(tài)形式，也可W做成陽離子鹽，如：TFA鹽（蘭氣乙 酸鹽），HC1鹽（鹽酸鹽），醋酸鹽形式。
[0006] 本發(fā)明的多膚，可W選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治 療。該些藥物劑型涵蓋：注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身 給藥。
【具體實施方式】
[0007] 實施例1 ;本發(fā)明多膚的人工化學合成 本發(fā)明的膚的制備采用液相合成法和活化醋逐個增長法，將本發(fā)明的膚的C端的第二 個氨基酸的氨基用Boc基（叔下氧撰醜基）保護，駿基用冊Su (N-羥基玻巧醜亞胺）活化， 然后在KHC03溶液中與C端第一個氨基酸在3(TC水浴，反應2天。抽去有機溶劑，在冰浴中 用2mol/LHCl調(diào)抑3~4 (沉淀最多時），用己酸己醋抽提，飽和化C1洗3次，無水Na2S〇4干 燥，抽干，無水己離研磨，得帶保護基的二膚。用50 % TFA ( H氣醋酸）處理，脫去Boc基，再 與N端帶Boc保護基，C端用冊Su活化的C端的第H個氨基酸縮合，用同樣的方法逐個接 上氨基酸，最后用催化氨化法脫去Glu側鏈上的保護基，用50 % TFA脫去本發(fā)明膚N端的 Boc基，得粗膚，粗膚用HPLC進行分離純化，可得98%純度的本發(fā)明的多膚。經(jīng)過電噴霧質(zhì) 譜測定，其序列與目標序列完全一致。
[000引實施例2 ;ND100的抗腫瘤活性 (1)體外活性測定： 采用細胞培養(yǎng)和細胞計數(shù)的方法，人肝癌細胞7721、胃癌細胞MKN、肺癌細胞A549 W各 自常規(guī)的培養(yǎng)基，視不同情況加入10%左右的小牛血清，用T-25培養(yǎng)瓶在37°C，5% C02 培養(yǎng)箱中單層培養(yǎng)。
[0009] 當細胞生長成單層后消化，用含1 %小牛血清的培養(yǎng)液制成細胞息液，按每孔1ml 接種到24孔培養(yǎng)板上，37°C、5% C〇2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)化后，加入不同劑量的本申請的多膚， 對照組和實驗組均設H個重復孔，對照組加入lOy 1的PBS，試驗組加入不同劑量的本申請 的多膚，繼續(xù)培養(yǎng)72小時后，吸出培養(yǎng)液，用PBS洗，然后每孔加入200 y 1消化液消化，待 細胞變圓后，加入800 y 1的PBS，在倒置顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)。
[0010] 抑制率結果如下：
【主權項】
1. 一種抗腫瘤肽，其氨基酸序列為SEQ ID NO :1，12所示。
2. 如權利要求1所述的腫瘤肽變體在制備抑制腫瘤藥物中的用途。
3. 如權利要求2所述的用途，其特征在于：所述腫瘤為肝癌、胃癌或肺癌。
4. 一種抗腫瘤藥物制劑，它含有權利要求2所述的腫瘤肽變體以及藥學上合適的載 體。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗腫瘤活性肽變體，該蛋白變體相對于野生型具有更強的抑制腫瘤細胞生長的效果。這些變體蛋白質(zhì)和它們的衍生物可以用于包括肝癌、肺癌、乳腺癌等多種腫瘤的治療。
【IPC分類】C07K7-06, A61K38-08, A61P35-00
【公開號】CN104672305
【申請?zhí)枴緾N201510068974
【發(fā)明人】馬海龍
【申請人】馬海龍
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2014年6月27日