1，檢測時(shí)間35分 鐘。
[0068] 其中，相對(duì)分子量測定使用HPLC法，該方法為常規(guī)公知技術(shù)（例如可見魏遠(yuǎn)安等 人，"高效凝膠滲透色譜法測定多糖純度及分子量"，《藥學(xué)學(xué)報(bào)》，1989, 24 (7)，523-524)，在 此不再一一贅述。
[0069] 第三個(gè)方面，本發(fā)明涉及上述提純方法所得到的紅毛五加多糖。
[0070] 第四個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種紅毛五加多糖的組成分析方法，所述方法包括如下 步驟：
[0071] (1)按照上述方法得到提純后的紅毛五加多糖，也即進(jìn)行上述步驟S1-S3而得到 提純后紅毛五加多糖；
[0072] (2)將步驟（1)的提純后紅毛五加多糖加入到三氟乙酸水溶液中進(jìn)行水解、蒸干， 再加入甲醇、蒸干，得到殘留物；
[0073] (3)向殘留物中加入雙蒸水和硼氫化鈉進(jìn)行還原，然后加入冰醋酸進(jìn)行中和，再加 入甲醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到粉末；
[0074] (4)將粉末真空干燥，然后加入乙酸酐，在90-110°C下反應(yīng)0? 5-1. 5小時(shí)，冷卻，加 入甲苯，減壓濃縮至干，重復(fù)加入甲苯并減壓濃縮至干的操作3-5次，以完全除去乙酸酐， 從而得到乙酰化產(chǎn)物；
[0075] (5)將乙?；a(chǎn)物用氯仿溶解，然后加入蒸餾水，充分振蕩，除去水層，將氯仿層用 無水硫酸鈉干燥，得到進(jìn)樣樣品，按照如下的操作進(jìn)行GC分析：
[0076] 使用邱-5色譜柱，其參數(shù)為3〇11^0.2511111^320 _;進(jìn)樣量為1111;程序升溫條 件為：起始溫度140°C，以1. 5°C /分鐘升溫至200°C，再以10°C /分鐘升溫至250°C，在該 溫度下保持5分鐘；進(jìn)樣口溫度為250°C，檢測器溫度為250°C，氫氣流量30ml/分鐘，空氣 流量400ml/分鐘；載氣為氮?dú)?，流速為lml/分鐘，從而分析出該提純的紅毛五加多糖的組 成成分。
[0077] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（2)中，所述三氟乙酸水溶 液的摩爾濃度為 1. 5-2. 5mol/L，例如可為 1. 5mol/L、2mol/L 或 2. 5mol/L〇
[0078] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（2)中，所述提純后紅毛五 加多糖與三氟乙酸水溶液的質(zhì)量體積比為1:0. 3-0. 7mg/ml，即每lmg提純后紅毛五加多糖 加入到〇? 3-0. 7ml三氟乙酸水溶液中，例如可為1:0. 3mg/ml、l:0. 5mg/ml或1:0. 7mg/ml。
[0079] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（2)中，水解時(shí)間為80-100 分鐘，例如可為80分鐘、90分鐘或100分鐘。
[0080] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（2)中，所述三氟乙酸水溶 液與甲醇的體積比為1:0. 5-1. 5,例如可為1:0. 5、1:1或1:1. 5。
[0081] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（3)中，所述雙蒸水與步驟 (2)中三氟乙酸水溶液的體積比為2:1 ;硼氫化鈉與步驟（2)中提純后紅毛五加多糖的質(zhì)量 比為 25-35:1，例如可為 25:1、30:1 或 35:1。
[0082] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（3)中，還原時(shí)間為6-10小 時(shí)，例如可為6小時(shí)、8小時(shí)或10小時(shí)。
[0083] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（3)中，加入冰醋酸的量并 沒有特別的限制，只要中和后體系的pH值為6. 5-7. 5即可。
[0084] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（3)中，所述甲醇與雙蒸水 的體積比為1-2:1，例如可為1:1、1. 5:1或2:1。
[0085] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（4)中，所述乙酸酐與步驟 (1)中三氟乙酸水溶液的體積比為1:1，所述甲苯與乙酸酐的體積比為2-4:1，例如可為 2:1、3:1 或 4:1〇
[0086] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（5)中，所述氯仿與步驟（4) 中乙酸酐的體積比為2-4:1，例如可為2:1、3:1或4:1。
[0087] 在本發(fā)明的紅毛五加多糖的組成分析方法中，在步驟（5)中，蒸餾水的加入量并 沒有特別的限定，只要便于后處理即可，本領(lǐng)域技術(shù)人員可進(jìn)行合適的選擇。
[0088] 經(jīng)本發(fā)明的組成分析方法進(jìn)行分析可知，所述提純后的紅毛五加多糖由鼠李糖、 阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為〇. 11:〇. 26:0. 06:0. 10:0. 48。
[0089] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過使用本發(fā)明的所述組成分析方法，可以得到良好的分離效果，從 而鑒定出本發(fā)明提純后紅毛五加多糖的具體組成，為該類多糖的成分組成分析提供了全新 的方法，具有良好的科研價(jià)值和研宄意義。
[0090] 第五個(gè)方面，本發(fā)明涉及通過上述提純方法后得到的提純后紅毛五加多糖的用 途。
[0091]發(fā)明人經(jīng)過研宄發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的所述提純后紅毛五加多糖具有優(yōu)異的調(diào)節(jié)T細(xì)胞 亞群和提高IgM表達(dá)水平的能力，也即本發(fā)明還涉及了通過上述提純方法后得到的提純后 紅毛五加多糖在制備用于調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群和/或提高IgM表達(dá)水平的藥物中的用途。
[0092] 如上所述，本發(fā)明提供了一種紅毛五加多糖的提取方法、提純方法、通過該提純方 法得到的紅毛五加多糖、組成分析方法及其制藥用途。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過獨(dú)特的 提取方法而以高收率得到了紅毛五加粗多糖，然后通過優(yōu)異的提純方法而得到了高純度的 紅毛五加多糖，并提供了該提純后紅毛五加多糖的組成分析方法，發(fā)現(xiàn)如此得到的紅毛五 加多糖具有優(yōu)異的調(diào)節(jié)或提高某些特定細(xì)胞活性的醫(yī)藥用途，從而可用于相應(yīng)的藥物開發(fā) 中。
【附圖說明】
[0093] 附圖1是本發(fā)明實(shí)施例19的離子柱層析洗脫曲線圖；
[0094] 附圖2為本發(fā)明實(shí)施例19所得到的提純后多糖進(jìn)行純度鑒定方法時(shí)的HPLC洗脫 圖；
[0095] 附圖3是本發(fā)明實(shí)施例19所得到的提純后多糖的紫外掃描圖；
[0096] 附圖4是本發(fā)明實(shí)施例21進(jìn)行組成分析時(shí)的GC圖譜；
[0097] 附圖5是本發(fā)明實(shí)施例19得到的提純后多糖以及其它組對(duì)于提高小鼠血清中IgM 表達(dá)水平的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0098] 下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，但這些例舉性實(shí)施方式的用途和 目的僅用來例舉本發(fā)明，并非對(duì)本發(fā)明的實(shí)際保護(hù)范圍構(gòu)成任何形式的任何限定，更非將 本發(fā)明的保護(hù)范圍局限于此。
[0099] 紅毛五加粗多糖的提取方法
[0100] 實(shí)施例1
[0101] A、原料預(yù)處理
[0102] 將干燥的紅毛五加莖皮粉碎，過100目篩，得到紅毛五加粉末；將該粉末用丙酮浸 泡（兩者的質(zhì)量體積比為1:6g/ml)，使其充分膨脹，然后過濾，得到膨脹后粉末；將該膨脹 后粉末加入到索氏抽提器中，用乙酸乙酯與氯仿的混合溶劑（乙酸乙酯與氯仿的體積比為 1:2. 5,膨脹后粉末與混合溶劑的質(zhì)量體積比為1:6. 5g/ml)回流提取90分鐘，趁熱過濾，得 到料渣；將料渣充分干燥完全，得到干燥殘?jiān)?br>[0103] B、分步酶解
[0104] B1 :室溫下，將步驟A的干燥殘?jiān)尤肴ルx子水中（干燥殘?jiān)c去離子水的質(zhì)量比 為1:7)，再加入纖維素酶與木聚糖酶的混合酶（纖維素酶與木聚糖酶的質(zhì)量比為1:0. 4,所 述干燥殘?jiān)c混合酶的質(zhì)量比為1:0. 007)，攪拌完全，得到殘?jiān)溉芤?；調(diào)節(jié)該溶液的pH 為7,在溫度T1為40°C下保溫酶解80分鐘，得到初次酶解液