紅毛五加多糖、提取及提純方法、組成分析方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種天然植物活性成分、提取及提純方法、組成分析方法和用途，更特 別地涉及一種紅毛五加多糖、提取及提純方法、組成分析方法及其用途，屬于植物活性成分 及其提取、分析和應(yīng)用領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥紅毛五加皮是五加科五加屬紅毛五加（Acanthopanax giraldii Hams)的莖 皮，是我國傳統(tǒng)的著名藥材，在中藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。
[0003] 紅毛五加皮性溫、味辛，入肝、腎經(jīng)，具有多種藥用功能，如祛風(fēng)濕、通關(guān)節(jié)、強(qiáng)筋骨 等功效，在臨床上主治瘺痹、拘攣疼痛、風(fēng)寒濕痹、足膝無力、皮膚風(fēng)濕及陰瘺囊濕等多種疾 病。
[0004] 雖然對(duì)紅毛五加的研宄的日益深入，人們已經(jīng)從紅毛五加中分離的了多種多糖成 分，該成分具有顯著的藥物活性。大量實(shí)驗(yàn)研宄發(fā)現(xiàn)，紅毛五加中多糖成分具有顯著的抗病 毒、抗腫瘤、抗炎、保肝等作用。
[0005] 也正是由于紅毛五加多糖的如此顯著作用，人們對(duì)其提取和純化方法等進(jìn)行了大 量的深入研宄，取得了一定的成果，例如：
[0006] 施亞琴等人（"紅毛五加多糖的提取及含量測定"，《華西藥學(xué)雜志》，1994年，第9 卷第2期，73-74頁）公開了一種紅毛五加多糖的提取方法，是將紅毛五加皮粉碎，置于索氏 抽提器中，依次用石油醚、乙醚、乙醇進(jìn)行回流；殘?jiān)盟亓魈崛?，合并提取液，滴加NaOH 溶液，減壓濃縮，再加入乙醇，靜置、過濾，沉淀用乙醇、丙酮反復(fù)洗滌，得到疏松的紅毛五加 多糖純品。
[0007] 郭輝等人（"紅毛五加粗多糖脫蛋白工藝比較"，《現(xiàn)代中藥研宄與實(shí)踐》，2004年， 第18卷第6期，53-55頁）公開了一種紅毛五加粗多糖的脫蛋白研宄，首先將紅毛五加莖皮 經(jīng)水提醇沉法得到紅毛五加粗多糖，然后分別考察了 Sevag法脫蛋白和三氯乙酸脫蛋白， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)前者效果要優(yōu)于后者。
[0008] 郭輝等人（"用高效凝膠色譜法測定紅毛五加多糖組分的分子量"，《中國藥師》， 2005年，第8卷第7期，551-552頁）公開了將紅毛五加莖皮水提、醇沉、Sevag脫蛋白，透 析除去小分子物質(zhì)，然后上DEAE-纖維素DE 23陰離子交換層析柱純化，得到紅毛五加精制 多糖，再上Sephadex G-100層析柱分離，氯化鈉洗脫，得到多個(gè)均一組分。
[0009] CN1073599A公開了一種紅毛五加多糖及其制劑的制備方法，所述方法為：將紅毛 五加莖皮經(jīng)分選除雜，用粗粉碎機(jī)軋碎，在煮提鍋中煎煮三次，將三次煮提濾液混合、過濾， 其濾液減壓濃縮至呈現(xiàn)稀流浸膏狀，放涼，置于離心機(jī)中離心分離，取出上清液，棄去沉淀 物。將上清液加入85%以上的乙醇充分?jǐn)噭?dòng)，靜置，上清液去回收乙醇，粗多糖沉淀物離心 甩干，用乙醇洗滌，然后冷凍干燥，粉碎，包裝。該方法得到的紅毛五加多糖收率高，步驟簡 便，成本低廉，制備的多種劑型，通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明具有調(diào)節(jié)人體免疫功能，防治艾滋病， 抗腫瘤的作用。
[0010] CN1834108A公開了一種從紅毛五加莖皮中提取、分離、純化得到的紅毛五加多糖， 所述多糖的重均分子量在20000-40000道爾頓之間，主要由阿拉伯半乳聚糖蛋白、鼠李糖 半乳糖醛酸聚糖、半乳糖醛酸聚糖和阿拉伯半乳聚糖組成。使用適量的該紅毛五加復(fù)合多 糖，加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的輔劑，可制成注射劑，該注射劑可用于治療中性粒細(xì) 胞減少癥、貧血、血小板減少癥，病毒感染性疾病和作為抗癌的輔助劑，可單獨(dú)用藥，也可與 其它多糖或G-CSF等聯(lián)合用藥。
[0011] CN103724444A公開了一種紅毛五加多糖的超聲波提取方法，所述方法包括：將紅 毛五加于70-80°C烘干，粉碎機(jī)粉碎；按照紅毛五加與水重量比為1:20-22加水浸泡，并以 超聲波輔助提取紅毛五加多糖，過濾后得提取液；將提取液減壓濃縮至原體積1/10-1/12， 加入三氯醋酸充分溶解后靜置10-12小時(shí)，過濾收集濾液；濾液中加入乙醇充分?jǐn)嚢琛㈧o 置，收集沉淀；用水復(fù)溶后冷凍干燥，既得紅毛五加多糖。所述方法可顯著提高多糖提取率， 縮短提取時(shí)間、能耗低，所得紅毛五加多糖對(duì)化療藥物導(dǎo)致的免疫力低下，有明顯的改善作 用。
[0012] 如上所述，現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開了多種紅毛五加多糖的提取方法、組成分析以及 用途研宄等，但這些方法均存在一定的缺陷，例如提取得率低、提取方法單一等，且得到的 紅毛五加多糖分子量在某個(gè)范圍內(nèi)，無法得到其它分子量范圍內(nèi)的紅毛五加多糖，以及組 成分析方法仍有待擴(kuò)展和改善等等。因此，如何以更高的得率得到紅毛五加多糖，并對(duì)其進(jìn) 行特定的組成分析方法等，這些仍然是廣大科研工作者的目標(biāo)，這也正是本發(fā)明得以完成 的動(dòng)力所在和基礎(chǔ)所倚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 為了研宄紅毛五加多糖的新穎提取方法、組成分析方法及開發(fā)新的用途，本發(fā)明 人對(duì)此進(jìn)行了大量深入的研宄，在付出了充分的創(chuàng)造性勞動(dòng)和經(jīng)過深入的科學(xué)探宄后，從 而完成了本發(fā)明。
[0014] 具體而言，本發(fā)明主要涉及一種紅毛五加多糖、提取方法、組成分析方法及其用 途。
[0015] 第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種紅毛五加粗多糖的提取方法，所述方法包括如下步 驟：
[0016] A、原料預(yù)處理；
[0017] B、分步酶解；
[0018] C、液液萃?。?br>[0019] D、醇沉，得紅毛五加粗多糖。
[0020] 在本發(fā)明的紅毛五加粗多糖的提取方法中，所述步驟A具體如下：
[0021] 將干燥的紅毛五加莖皮粉碎，過100目篩，得到紅毛五加粉末；將該粉末用丙酮浸 泡，使其充分膨脹，然后過濾，得到膨脹后粉末；將該膨脹后粉末加入到索氏抽提器中，用乙 酸乙酯與氯仿的混合溶劑回流提取1-2小時(shí)，趁熱過濾，得到料渣；將料渣充分干燥完全， 得到干燥殘?jiān)?br>[0022] 其中，在步驟A中，所述紅毛五加粉末與丙酮的質(zhì)量體積比為l:4_8g/ml，即每lg 紅毛五加粉末用4-8ml丙酮浸泡，例如可為l:4g/ml、l:6g/ml或l:8g/ml。
[0023] 其中，在步驟A中，進(jìn)行索氏抽提時(shí)，乙酸乙酯與氯仿的體積比為1:2-3,例如可為 1:2、1:2. 5 或 1:3〇
[0024] 其中，在步驟A中，所述膨脹后粉末與混合溶劑（即乙酸乙酯與氯仿的混合溶劑） 的質(zhì)量體積比為l:5-8g/ml，即每lg膨脹后粉末使用5-8ml混合溶劑，例如可為l:5g/ml、 1:6g/ml、1:7g/ml 或 1:8g/ml〇
[0025] 在本發(fā)明的紅毛五加粗多糖的提取方法中，所述步驟B具體如下（也即步驟B包 括如下步驟）：
[0026] B1 :室溫下，將步驟A的干燥殘?jiān)尤肴ルx子水中，再加入混合酶，攪拌完全，得到 殘?jiān)溉芤?；調(diào)節(jié)該溶液的pH為6. 5-7. 5,在溫度T1下保溫酶解50-120分鐘，得到初次酶 解液；
[0027] B2 :將初次酶解液進(jìn)行梯度升溫，當(dāng)溫度達(dá)到T2時(shí)，加入木瓜蛋白酶，并在該溫度 下保溫酶解40-70分鐘，然后以10-15°C /分鐘的升溫速率將溫度升高至沸騰，保持10-15 分鐘，使酶滅活，得到二次酶解液。
[0028] 其中，在步驟B1中，干燥殘?jiān)c去離子水的質(zhì)量比為1:5-8,例如可為1:5、1:6、 1:7 或 1:8。
[0029] 其中，在步驟B1中，所述干燥殘?jiān)c混合酶的質(zhì)量比為1:0. 004-0. 01，例如可為 1:0.004、1:0. 006、1:0. 008 或 1:0. 01〇
[0030] 其中，在步驟B1中，所述混合酶為纖維素酶與木聚糖酶的混合物，兩者的質(zhì)量比 為