，形成橢圓形芽孢，菌落周邊不規(guī)則，不透明，表面有褶皺，如圖1所示。發(fā)酵葡萄糖、麥芽 糖、木糖、山梨醇、蔗糖、甘露醇產(chǎn)酸，能水解淀粉和液化明膠，接觸酶、檸檬酸鹽利用、硝酸 鹽還原反應(yīng)、V-P(Voges-Proskauer)反應(yīng)、n引噪反應(yīng)均為陽性，而甲基紅反應(yīng)、丙二酸利用、 酒石酸鹽利用、硫化氫產(chǎn)生均為陰性，最適生長溫度30°C，最適pH為7. 0。經(jīng)生理生化特性 和16SrRNA基因序列分析，SQR-7屬于解淀粉芽抱桿菌（Bacillusamyloliquefaciens)。 2013年4月19日保藏與中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為 CGMCCNO. 7497〇
[0047](二）菌劑生產(chǎn)
[0048] 1)將菌株SQR-7接種于NA培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵條件為：初始pH范 圍為7. 0-7. 2,培養(yǎng)溫度30°C，通氣量范圍為30?100%，170轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵中后期形成芽 孢，形成SQR-7拮抗菌菌液，其中，拮抗菌細(xì)胞和芽孢總量彡IX109個(gè)/ml;
[0049] 所用NA培養(yǎng)液配制方法為，以配制1L培養(yǎng)基為例：葡萄糖10g，牛肉膏3g，蛋白胨 l〇g，酵母提取物〇? 5g溶于少量水，定容至1L，pH值調(diào)至7. 0-7. 2,121°C滅菌20min。
[0050] 2)將SQR-7拮抗菌菌液按20L/噸的量接種到有機(jī)肥（由腐熟的牛糞堆肥和菜柏 的微生物酶解混合物按照質(zhì)量比1: 1組成）中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵過程中每天翻堆1次， 使固體發(fā)酵溫度30-55°C，發(fā)酵5-7天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到1X108個(gè)/g以上，即為含 有拮抗菌SQR-7的微生物有機(jī)肥。
[0051] 其中所用腐熟后的牛糞堆肥其發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量彡35%， 有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1. 2-2%，含水量質(zhì)量比25-30%。
[0052] 其中菜柏的微生物分解混合物制備方法為（公知公用，見發(fā)明專利 ZL200610086126. 0, 一種農(nóng)用氨基酸的生物制取方法及其肥料產(chǎn)品），菌株SQR-7發(fā)酵液加 入到菜柏原料中，調(diào)節(jié)含水量55-65%和pH6. 0-7. 5,進(jìn)行開放式固體發(fā)酵，待發(fā)酵溫度上 升至50°C時(shí)立即開始翻堆，以后每天翻堆，使堆溫始終維持在35-50°C共5天，每次翻堆時(shí) 調(diào)節(jié)含水量和PH，使它們分別維持在55-65 %和6. 0-7. 0,發(fā)酵終止時(shí)進(jìn)行低溫干燥或自然 涼干，即為菜柏的微生物分解混合物，其為含氨基酸的混合材料。
[0053]用上述拮抗菌所生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥即為防控連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥 料，該肥料中含有IX108個(gè)/g以上的拮抗菌SQR-7、全氮質(zhì)量比含量為4?5%，全氮中 質(zhì)量比90%以上為有機(jī)氮，總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為6?10%、有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量為30? 35%〇
[0054] 實(shí)施例2
[0055] 煙草青枯病的防控試驗(yàn)
[0056] (一）土壤預(yù)處理方法
[0057] 用碳酸氫銨325kg/公頃（=67. 4kgN)和生石灰750kg/公頃，均勻撒在連作土 壤表層，澆透水，附上農(nóng)用薄膜，四周用土覆蓋以防漏氣。預(yù)處理土壤10天后，揭開薄膜翻 耕土壤，晾曬。
[0058](二）微生物有機(jī)肥的使用
[0059]土壤預(yù)處理后，煙苗移栽時(shí)，以每株煙苗100g的量，采用穴施施加上述微生物有 機(jī)肥。
[0060](三）盆栽實(shí)驗(yàn)
[0061] 供試土壤為煙草連作土，青枯病發(fā)病嚴(yán)重。煙草為青枯病敏感型"紅花大金元"。 分5個(gè)處理，分別如下：
[0062] 1)T1 :按常規(guī)施用當(dāng)?shù)責(zé)煵輰Ｓ脽o機(jī)復(fù)合肥，作為對(duì)照組；
[0063] 2) T2 :在T1的基礎(chǔ)上加100g/株的普通有機(jī)肥；
[0064] 3) T3 :在T1的基礎(chǔ)上加100g/株的微生物有機(jī)肥；
[0065] 4)T4:移栽前用碳酸氫銨和生石灰預(yù)處理土壤，用薄膜覆蓋10天，揭膜使土壤透 氣3天，用化肥補(bǔ)足與T1相同的N、P、K量；
[0066] 5)T5:在移栽前對(duì)土壤用石灰和碳酸氫銨進(jìn)行土壤預(yù)處理，用薄膜覆蓋10天，揭 膜使土壤透氣3天，用化肥補(bǔ)足與T1相同的N、P、K量，再加100g/株微生物有機(jī)肥。每處 理10個(gè)重復(fù)，每重復(fù)l〇kg病土 /盆。
[0067] 結(jié)果如表1，煙草自移栽100天后，對(duì)照（T1)病情指數(shù)達(dá)到82. 5%，施用微生物有 機(jī)肥（T3)可以顯著降低煙草青枯病的發(fā)病率，其防治效果達(dá)到66. 7%。用石灰-薄膜覆蓋 處理（T4)，防治效果達(dá)到81. 8%。而土壤先用石灰-碳銨-薄膜覆蓋處理后再施用微生物 有機(jī)肥的處理（T5)，表現(xiàn)出最好的防治效果達(dá)到87. 9%。表明對(duì)于土傳病害嚴(yán)重的土壤， 先進(jìn)行土壤預(yù)處理，然后再施用微生物有機(jī)肥能有效控制連作土壤煙草青枯病的發(fā)生（圖 2)〇
[0068] 煙草青枯病病情級(jí)數(shù)（以煙草病情分級(jí)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)劃分）：0級(jí)：全株無??；1級(jí)：莖 部偶有退綠斑，或在有條斑一側(cè)有少數(shù)葉片凋萎；2級(jí)：莖部有黑色條斑，但尚未達(dá)到頂部， 或病側(cè)半數(shù)以上葉片凋萎；3級(jí)：莖部黑色條斑到達(dá)煙株頂部，或發(fā)病一側(cè)三分之二以上葉 片萎焉；4級(jí)：病株基本枯死。
[0069] 病情指數(shù)=[E(病情級(jí)數(shù)X此級(jí)菌株數(shù)）八最高級(jí)數(shù)\總株數(shù)）]父100%。
[0070] 防病效果=100X(對(duì)照病情指數(shù)-處理感病指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)
[0071] 表1不同處理對(duì)煙草青枯病的防治效果（100天）
[0072]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種防控連作煙草青枯病的高效拮抗菌株SQR-7,該菌株屬于解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)，于2013年4月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委 員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC NO. 7497。
2. 用權(quán)利要求1所述的高效拮抗菌生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料。
3. 用權(quán)利要求1所述菌株生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料，其特征在于：該肥料中包括有 IX 108個(gè)/g以上的拮抗菌SQR-7、全氮質(zhì)量比含量為4?5%，全氮中質(zhì)量比90%以上為 有機(jī)氮，總氮磷鉀養(yǎng)分質(zhì)量比為6?10%，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量為30?35%。
4. 權(quán)利要求3所述微生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 將權(quán)利要求1所述的菌株SQR-7接種于NA培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵條件 為：初始pH范圍為7. 0-7. 2,培養(yǎng)溫度30°C，通氣量范圍為30?100%，170轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵 中后期形成芽孢，形成SQR-7液體菌劑，該菌劑中含菌或芽孢量彡1 X 109個(gè)/ml ; 2) 將SQR-7液體菌劑按20L/噸的量接種到有機(jī)肥中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵溫度為 30-50°C，發(fā)酵過程中每天翻堆1次，發(fā)酵5-7天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到1 X 108個(gè)/g以 上，最后在溫度不超過60°C的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，包裝出廠 即為防控連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥料；其中，有機(jī)肥由腐熟的牛糞堆肥和菜柏微生 物酶解混合物按照質(zhì)量比1:1混合組成。
5. 權(quán)利要求4所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其特征在于，步驟1所用NA培養(yǎng)液配 制方法為：以配制1L培養(yǎng)基為例，葡萄糖10g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，酵母提取物0. 5g溶 于少量水，定容至1L，pH值調(diào)至7. 0-7. 2,121°C滅菌20min。
6. 權(quán)利要求5所述微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其特征在于：步驟2所用腐熟后的牛 糞堆肥其發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量多35%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1. 2-2%， 含水量質(zhì)量比25-30%。
7. 權(quán)利要求1所述的高效拮抗菌株SQR-7在防控連作煙草青枯病中的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求2或3所述的微生物有機(jī)肥料在防控連作煙草青枯病中的應(yīng)用。
9. 一種防控連作煙草青枯病的土壤預(yù)處理方法，其特征在于：用碳酸氫銨325kg/公頃 和生石灰750kg/公頃，均勻撒在土壤表層，澆透水，附上農(nóng)用薄膜，薄膜四周用土壤覆蓋以 防漏氣，預(yù)處理土壤10天后，揭開薄膜翻耕土壤，晾曬。
10. 權(quán)利要求2或3所述的微生物有機(jī)肥料在防控連作煙草青枯病中的使用方法，其特 征在于：（1) 土壤預(yù)處理：以權(quán)利要求9所述方法對(duì)土壤進(jìn)行預(yù)處理； (2)施加微生物有機(jī)肥料：煙苗移栽時(shí)，以每株煙苗100g的量向步驟1預(yù)處理后的土 壤施加權(quán)利要求2或3所述的微生物有機(jī)肥。
【專利摘要】本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)集約化生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，提供一種綜合防控連作煙草青枯病的高效拮抗菌SQR-7、用其制成的微生物有機(jī)肥料，以及在防控連作煙草青枯病中的應(yīng)用。SQR-7菌株屬于解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2013年4月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC NO.7497。包括該菌株的微生物有機(jī)肥料，對(duì)煙草青枯病的生物防治率達(dá)80％以上。結(jié)合土壤化學(xué)改良劑預(yù)處理土壤，對(duì)連作土壤進(jìn)行消毒，降低病原菌數(shù)量，既改善了土壤微生物區(qū)系，抑制病原菌的生長，也促進(jìn)了煙草的生長，大大提高了煙草的抗病能力。CGMCC NO.749720130419
【IPC分類】C05F17-00, C12N1-20, A01P1-00, A01B79-02, C12R1-07, C05F15-00
【公開號(hào)】CN104531588
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510008090
【發(fā)明人】沈標(biāo), 袁賽飛, 石俊雄, 施文, 劉艷霞, 楊興明
【申請(qǐng)人】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2015年1月7日