一種防控連作煙草青枯病的高效拮抗菌株、包括該菌株的微生物有機(jī)肥料、生產(chǎn)方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)集約化生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種綜合防控連作煙草青枯病的高效 拮抗菌SQR-7、用其制成的微生物有機(jī)肥料，以及在防控連作煙草青枯病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙草是我國(guó)主要的經(jīng)濟(jì)作物。煙草青枯病是由茄科勞爾氏菌（Ralstonia solanacearum)引起的細(xì)菌性土傳病害，是煙草的主要病害之一，危害嚴(yán)重，謂之"煙癌"，廣 泛分布于全世界的熱帶、亞熱帶和一些溫暖的地區(qū)。在中國(guó)，此病在河南、山東、江蘇、云南、 廣西、河北、湖南、廣東、福建等煙區(qū)普遍發(fā)生，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)產(chǎn)量損失80%左右，成為影響我 國(guó)煙草產(chǎn)量及質(zhì)量的罪魁禍?zhǔn)字?。煙草青枯病致病菌（Ralstoniasolanacearum)能通 過(guò)土壤、流水（灌溉等）、種子等方式傳播，對(duì)環(huán)境有很強(qiáng)的適應(yīng)能力。青枯菌侵染初期，植 株表現(xiàn)為生長(zhǎng)受限，矮小，畸形，易感病，在高溫高濕的條件下，病害發(fā)展迅速，發(fā)病嚴(yán)重的 田塊發(fā)病率達(dá)100 %，造成絕收。大量的使用化學(xué)農(nóng)藥造成對(duì)生態(tài)環(huán)境的破壞，而目前還沒(méi) 有有效的化學(xué)農(nóng)藥防治煙草青枯病。生物防控結(jié)合農(nóng)藝措施的綜合措施對(duì)青枯病的防控及 保護(hù)環(huán)境都具有重要的作用。
[0003]另一方面，水稻、小麥、玉米、油菜等作物秸桿就地焚燒、規(guī)?；B(yǎng)殖后的畜禽糞便 隨地棄置等不僅嚴(yán)重污染了環(huán)境，也極大地浪費(fèi)了能作為有機(jī)肥產(chǎn)品的原料；大量的養(yǎng)分 資源（C、N、P、K、S及微量元素）流失于土壤-植物系統(tǒng)之外，明顯地削弱了我國(guó)農(nóng)業(yè)可持續(xù) 發(fā)展的能力。如將這些固體有機(jī)廢棄物制成商品有機(jī)肥，再施入土壤，必將提高土壤肥力， 促進(jìn)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。如果將這些固體有機(jī)廢棄物經(jīng)過(guò)高溫發(fā)酵合成高品位的有機(jī)堆肥，再用于 功能菌的載體，也有利于功能菌在土壤中的定殖，發(fā)揮其作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中，煙草青枯病防治效果不明顯，并且化學(xué)防治劑 破壞環(huán)境等問(wèn)題，提供一種使用高效拮抗菌SQR-7、用其制成的微生物有機(jī)肥料、結(jié)合土壤 預(yù)處理的綜合方法，防治效率達(dá)到80%以上，確保煙草種植業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。
[0005]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
[0006] 1.本發(fā)明提供一種防控連作煙草青枯病的高效拮抗菌株SQR-7,該菌株屬于解淀 粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens)，于2013年4月19日保藏在中國(guó)微生物菌種 保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNO. 7497,保藏地址為：北京市朝陽(yáng) 區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
[0007]該菌株主要生物學(xué)特性為：革蘭氏染色陽(yáng)性G+，細(xì)胞形狀為桿狀，芽孢為橢圓 形，菌落周邊不規(guī)則，不透明，表面有褶皺，具運(yùn)動(dòng)性。發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、木糖、山梨 醇、蔗糖、甘露醇產(chǎn)酸，能水解淀粉和液化明膠，接觸酶、檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原反應(yīng)、 V-P (Voges-Proskauer)反應(yīng)、n引噪反應(yīng)均為陽(yáng)性，而甲基紅反應(yīng)、丙二酸利用、酒石酸鹽利 用、硫化氫產(chǎn)生均為陰性，最適生長(zhǎng)溫度30°C，最適pH為7. 0。
[0008] 2.本發(fā)明還提供用上述1提供的高效拮抗菌生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料。
[0009] 3.用上述1提供的菌株生產(chǎn)的微生物有機(jī)肥料，該肥料中包括有1X108個(gè)/g以 上的拮抗菌SQR-7、全氮質(zhì)量比含量為4?5 %，全氮中質(zhì)量比90 %以上為有機(jī)氮，總氮磷鉀 養(yǎng)分質(zhì)量比為6?10%，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量為30?35%。
[0010] 4.上述3提供的微生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，其包括如下步驟：
[0011] 1)將上述1提供的菌株SQR-7接種于NA培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵條件 為：初始pH范圍為7. 0-7. 2,培養(yǎng)溫度30°C，通氣量范圍為30?100%，170轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵 中后期形成芽孢，形成SQR-7液體菌劑，該菌劑中含菌或芽孢量彡1X109個(gè)/ml;
[0012] 2)將SQR-7液體菌劑按20L/噸的量接種到有機(jī)肥中進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵溫度為 30-50°C，發(fā)酵過(guò)程中每天翻堆1次，發(fā)酵5-7天后結(jié)束，使拮抗菌含量達(dá)到1X108個(gè)/g以 上，最后在溫度不超過(guò)60°C的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，包裝出廠 即為防除連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥料；其中，有機(jī)肥由腐熟的牛糞堆肥和菜柏微生 物酶解混合物按照質(zhì)量比1:1混合組成。
[0013] 5.上述4提供的微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中，步驟⑴所用NA培養(yǎng)液配制 方法為：以配制1L培養(yǎng)基為例，葡萄糖10g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，酵母提取物0. 5g溶于 少量水，定容至1L，pH值調(diào)至7. 0-7. 2,121°C滅菌20min。
[0014] 6.上述5提供的微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn)方法，其中，步驟（2)所用腐熟后的牛糞堆 肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量多35%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1. 2-2%，含水量 質(zhì)量比25-30%。
[0015] 7.本發(fā)明還提供上述1提供的高效拮抗菌株SQR-7在防控連作煙草青枯病中的應(yīng) 用。
[0016] 8.本發(fā)明還提供上述2或3提供的微生物有機(jī)肥料在防控連作煙草青枯病中的應(yīng) 用。
[0017] 9.本發(fā)明還提供一種防控連作煙草青枯病的土壤預(yù)處理方法，該方法為用碳酸氫 銨325kg/公頃和生石灰750kg/公頃，均勻撒在土壤表層，澆透水，附上農(nóng)用薄膜，薄膜四周 用土壤覆蓋以防漏氣，預(yù)處理土壤10天后，揭開(kāi)薄膜翻耕土壤，晾曬。
[0018] 9.本發(fā)明還提供上述2或3提供的微生物有機(jī)肥料在防控連作煙草青枯病中的使 用方法，其步驟為：（1) 土壤預(yù)處理：以上述9所述的方法預(yù)處理土壤；
[0019] (2)施加微生物有機(jī)肥料：煙苗移栽時(shí)，以每株煙苗100g的量向步驟1預(yù)處理后 的土壤施加上述2或3提供的微生物有機(jī)肥。
[0020] 本發(fā)明的有益效果：
[0021] 1.本發(fā)明為一種能克服或消除連作煙草青枯病的綜合防控措施和方法。
[0022] 其中微生物有機(jī)肥料與目前市場(chǎng)上的產(chǎn)品相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0023] 1)該肥料產(chǎn)品中含有抑制煙草青枯病病原菌生長(zhǎng)的高效菌株即解淀粉芽孢桿菌 SQR-7。試驗(yàn)結(jié)果表明，在連作煙草土壤上施用本產(chǎn)品結(jié)合土壤預(yù)處理后，煙草青枯病的生 物防治率達(dá)80%以上。
[0024]2)該肥料為有機(jī)肥，含有豐富的有機(jī)質(zhì)（含量30-35% )，有機(jī)氮含量為4%，而且 大部分為氨基酸和小分子多肽，易于被植物吸收利用。本產(chǎn)品總磷含量為4%，大多數(shù)為有 效磷，使用本產(chǎn)品后能使作物順利度過(guò)苗期磷素敏感期。相比之下，含磷化肥施入土壤后生 物有效性較差。有機(jī)肥料中含有的豐富營(yíng)養(yǎng)也為其中的拮抗菌提供了生長(zhǎng)繁殖的條件，使 在土壤中易于定殖，從而發(fā)揮防病作用。
[0025] 3)由于是微生物制劑，完全沒(méi)有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來(lái)的一系列環(huán)境污染問(wèn) 題，因而有利于煙草的無(wú)公害生產(chǎn)，農(nóng)民可以不用或少用化學(xué)農(nóng)藥，節(jié)省開(kāi)支。同時(shí)，該微生 物肥料還有增產(chǎn)功能，可為農(nóng)民增加收入。
[0026] 2.本發(fā)明還包括一種用土壤化學(xué)改良劑預(yù)處理土壤的方法，利用農(nóng)用碳酸氫銨和 生石灰對(duì)連作土壤進(jìn)行消毒，降低病原菌數(shù)量，具有成本低，方便獲得，消毒效果良好的優(yōu) 點(diǎn)。
[0027] 3.本發(fā)明綜合利用土壤化學(xué)改良劑和微生物有機(jī)肥，能顯著抑制病原菌的生長(zhǎng)， 改良土壤微生物區(qū)系，增加拮抗微生物在根圍的定殖能力，從而更有效地防控?zé)煵萸嗫莶　?br>【附圖說(shuō)明】
[0028] 圖1拮抗菌SQR-7拮抗煙草青枯菌的對(duì)峙圖
[0029] 圖2盆栽試驗(yàn)防控效果
[0030] T1 :按常規(guī)施用當(dāng)?shù)責(zé)煵輰Ｓ脽o(wú)機(jī)復(fù)合肥，作為對(duì)照組；
[0031] T2 :在T1的基礎(chǔ)上加100g/株的普通有機(jī)肥；
[0032] T3 :在T1的基礎(chǔ)上加100g/株的微生物有機(jī)肥；
[0033]T4:移栽前用碳酸氫銨和生石灰預(yù)處理土壤，用薄膜覆蓋10天，揭膜使土壤透氣3 天，用化肥補(bǔ)足與T1相同的N、P、K量；
[0034]T5:在移栽前對(duì)土壤用石灰和碳酸氫銨進(jìn)行土壤預(yù)處理，用薄膜覆蓋10天，揭膜 使土壤透氣3天，用化肥補(bǔ)足與T1相同的N、P、K量，再加100g/株微生物有機(jī)肥。
[0035] 圖3:大田試驗(yàn)防控效果
[0036]T1、T2、T3、T4、T5處理如盆栽試驗(yàn)
[0037] 圖4 :土壤預(yù)處理對(duì)土壤pH的影響
[0038] 圖5 :不同處理?xiàng)l件下青枯菌數(shù)量變化
[0039] BP :移栽前；TD :土壤消毒10天后
[0040]T1、T2、T3、T4、T5處理如盆栽試驗(yàn)
【具體實(shí)施方式】
[0041] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方 法，通常按照本領(lǐng)域的公知手段。
[0042] 實(shí)施例1
[0043] 防控連作煙草青枯病的微生物有機(jī)肥料的生產(chǎn) [0044](一）菌株的分離和鑒定
[0045] 采集已經(jīng)發(fā)生連作障礙并出現(xiàn)嚴(yán)重青枯病病癥的煙草植株和根際土壤，樣品低 溫保存，采用Kelman'sTTCAgar選擇培養(yǎng)基分離病原菌茄科勞爾氏菌（Ralsotnia solanacearum)。然后以茄科勞爾氏菌為指示菌，采集連作煙草青枯病發(fā)病田塊中的健康植 株的根際土壤，分離拮抗菌。再通過(guò)盆栽試驗(yàn)最終復(fù)篩出高效拮抗菌株SQR-7,菌種在30% 甘油中-70 °C保存。
[0046] 菌株SQR-7的主要生物學(xué)特性為：革蘭氏染色陽(yáng)性G+，細(xì)胞形狀為桿狀，具運(yùn)動(dòng) 性