專利名稱:以深海魚(yú)為原料制備具有改善記憶的生物活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種記憶改善生物活性肽的制備方法，更具體地說(shuō)，涉及一種以深海魚(yú)類為主要原料的具有記憶改善功效的生物活性肽的制備方法。
背景技術(shù)：
學(xué)習(xí)和記憶是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)的高級(jí)機(jī)能，是大腦最基本也是最重要的高級(jí)神經(jīng)功能之一。一些外界因素，如腦部疾病、嗜好煙酒、年齡增長(zhǎng)、攝入營(yíng)養(yǎng)不足或生活、工作壓力大等原因則可導(dǎo)致記憶力減退。具有改善記憶的保健食品成為當(dāng)今社會(huì)三大人群的重要訴求:中老年“銀發(fā)族”、中青年“白領(lǐng)族”、青少年“備考族”。目前，市場(chǎng)上“輔助改善記憶”的保健食品從起效成分上來(lái)看，主要有以下一些品種:
(I)蛋白質(zhì)和氨基酸類。蛋白質(zhì)參與腦細(xì)胞的代謝，維持大腦的各種運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，且參與神經(jīng)傳導(dǎo)、負(fù)責(zé)信息傳遞的化學(xué)物質(zhì)——神經(jīng)遞質(zhì)也是由蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物氨基酸或其衍生物所構(gòu)成的。如研究發(fā)現(xiàn)新型蛋氨酸衍生物(如S-腺苷-L-蛋氨酸)具有輔助改善記憶的效果；磷脂酰基絲氨酸(PS)可促進(jìn)氧與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入大腦細(xì)胞，同時(shí)刺激多巴胺的分泌，增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力。
(2)脂類。脂類可以促進(jìn)腦細(xì)胞發(fā)育和神經(jīng)髓鞘的形成，并保證其維持良好的功能。如來(lái)自深海魚(yú)的脂類EPA、DHA等有助于腦細(xì)胞中氧的進(jìn)入和二氧化碳的逸出，可直接提高大腦的工作效率。
(3)礦物質(zhì)和微量元素。鈣、鎂、鈉、鉀等協(xié)同維持神經(jīng)的應(yīng)激性；鈣能保證腦力旺盛、工作持久、頭腦冷靜并提高人的判斷力；磷參與生物氧化、調(diào)節(jié)能量和物質(zhì)代謝；鐵質(zhì)可使紅細(xì)胞運(yùn)氧的能力加強(qiáng)，腦組織供氧充足；而鋅缺乏則會(huì)影響智力，妨礙正常的學(xué)習(xí)記憶功能 。
(4)維生素。維生素是提高智力活動(dòng)的重要營(yíng)養(yǎng)素之一，如V。能保護(hù)生物膜；B族維生素尤其是Vbi參與碳水化和物代謝，產(chǎn)生能量，保證神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能；VE能維持腦細(xì)胞活力，抵抗不飽和脂肪酸的過(guò)氧化物對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞的毒害，并能預(yù)防腦細(xì)胞衰退及腦力疲勞。
(5)生物堿。如從石杉科植物千層塔中提取的生物堿石杉?jí)A甲，是一種強(qiáng)力“乙酰膽堿酯酶”抑制劑，能防止腦組織中乙酰膽堿的分解，提高腦力活動(dòng)效率，直接改善記憶力。
(6)植物活性物質(zhì)。如花青素(來(lái)自葡萄籽)、兒茶素(來(lái)自綠茶)等能清除腦組織代謝過(guò)程中產(chǎn)生的游離基，具有減輕腦疲勞和間接提高腦力的作用；銀杏提取物可顯著改善阿爾茨海默病患者的認(rèn)知能力，成為近20年來(lái)國(guó)際保健食品市場(chǎng)上的熱門(mén)產(chǎn)品；長(zhǎng)春花提取物在美國(guó)和日本已被批準(zhǔn)用作功能食品出售，它可以增加大腦氧和糖的消耗量，使腦細(xì)胞間遞質(zhì)量增多，提高記憶力、精神集中能力、方向感和思維能力。
此外，關(guān)于中草藥成分對(duì)于改善記憶的研究也有較多報(bào)道:
(I)單味中藥。如潘陳為等研究表明中草藥川芎嗪對(duì)高血氨大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功有輔助作用，可使大鼠尋找障臺(tái)的平均逃避潛伏期縮短。楊萍等研究發(fā)現(xiàn)何首烏可增加小鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素(NA)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)等單胺遞質(zhì)的含量，從而改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸信息傳遞功能，間接地增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力。戴新民等報(bào)道?？浦参镨鷮?shí)對(duì)正常小鼠的空間辨別學(xué)習(xí)、記憶獲得有促進(jìn)作用；可拮抗東茛菪堿造成的記憶獲得障礙；改善氯霉素和亞硝酸鈉造成的記憶鞏固不良。
(2)復(fù)合中藥。張崗等研究表明由生曬參、制首烏、淫羊藿、干地龍、石菖蒲、川芎、遠(yuǎn)志等藥物組成的參龍健腦膠囊對(duì)于腦缺血損傷(VD)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力有明顯的改善，并可顯著減輕一氧化氮(NO)等活性氮介質(zhì)對(duì)腦的損傷。張吉仲報(bào)道由藏紅花、綠絨蒿、蓽茇、余甘子、麝香、木香、沉香、檀香、黑種草子等組成的藏藥復(fù)方珍珠丸，可以增加記憶再現(xiàn)缺失小鼠模型的逃避潛伏期，減少錯(cuò)誤次數(shù)。袁海峰報(bào)道由人參、川芎、生地黃、益智仁、黃芪、丹參、葛根、石菖蒲、何首烏、枸杞子、冰片等組成的復(fù)方具有抑制阿爾茨海默病(AD)模型小鼠大腦皮層和海馬膽堿酯酶活性，改善小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用。
生物活性肽是蛋白質(zhì)中20種天然氨基酸以不同組成和排列方式構(gòu)成的線性或環(huán)形肽類的總稱，是源于蛋白質(zhì)的功能性化合物。肽通常以非活性狀態(tài)存在于蛋白質(zhì)的長(zhǎng)鏈之中，當(dāng)用適當(dāng)?shù)姆椒ㄡ尫懦瞿承╇钠螘r(shí)，它們的活性就會(huì)表現(xiàn)出來(lái)。肽類分為內(nèi)源性肽與外源性肽兩大類，其中內(nèi)源性肽主要包括體內(nèi)一些重要內(nèi)分泌腺分泌的肽類激素，如促生長(zhǎng)激素、促甲狀腺素、肝臟合成的類胰島素生長(zhǎng)因子、胸腺分泌的胸腺肽、脾臟中的脾臟活性肽等；外源性肽是動(dòng)植物蛋白經(jīng)化學(xué)法或生物酶法等斷裂蛋白質(zhì)肽鏈而釋放出來(lái)的肽段，如從大豆、蛋清蛋白、酪蛋白等動(dòng)植物蛋白中已得到具有不同生理活性的肽類包括抗氧化肽、降血壓肽、抗疲勞肽、解酒肽等等。
內(nèi)源性肽類物質(zhì)與大腦的學(xué)習(xí)記憶有著密切的關(guān)系。據(jù)美國(guó)Duke大學(xué)的D.Nemerοff教授報(bào)道，在哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的多肽可能多達(dá)200種左右，對(duì)記憶有調(diào)節(jié)作用的多肽已經(jīng)證實(shí)的包括:加壓素(VP)，是垂體后葉釋放的一個(gè)9肽，該肽有助于改善注意力和學(xué)習(xí)失調(diào)兒童的記憶再現(xiàn)；促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和黑色細(xì)胞刺激素(MSH)，都是由腺垂體促腎上腺皮質(zhì)激素細(xì)胞分泌的多肽，研究證實(shí)無(wú)論在去垂體或是正常動(dòng)物中，這兩種肽都有提高學(xué)習(xí)能力和加強(qiáng)記憶過(guò)程的作用；膽囊收縮素(CCK)，是從十二指腸提取物中分離得到的一種能使膽囊收縮的物質(zhì)，為33肽，大鼠試驗(yàn)證實(shí)，皮下或腦室注射CCK可防止易遺忘癥的產(chǎn)生。
有關(guān)外源性肽類物質(zhì)對(duì)大腦學(xué)習(xí)記憶能力影響的研究目前甚少。目前公開(kāi)的中國(guó)專利中與記憶增強(qiáng)肽相關(guān)的專利共有3個(gè):
(I)中國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)
93112493.X
中公開(kāi)了“記憶增強(qiáng)肽及其應(yīng)用”，發(fā)明人是中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所的杜雨蒼教授，但該專利中涉及的是利用化學(xué)合成法制成的合成多肽，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為“Rl-Asn-Xl-X2-Y-R2”，取名為記憶增強(qiáng)肽。
(2)中國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)
00116876.2
中公開(kāi)了“一類記憶增強(qiáng)肽和它們的用途”，發(fā)明人也是杜雨蒼教授等，該專利涉及對(duì)專利號(hào)
93112493.X
中的記憶增強(qiáng)肽通過(guò)化學(xué)合成進(jìn)行結(jié)構(gòu)改進(jìn)，并借助動(dòng)物試驗(yàn)研究其對(duì)不同人群智力發(fā)育的影響。
(3)中國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)
00104242.4
中公開(kāi)了“記憶增強(qiáng)肽在制備治療更年期綜合征藥物中的應(yīng)用”，該專利中所提及的“記憶增強(qiáng)肽”即為專利號(hào)
93112493.X
中所合成的多肽，此專利僅是探討上述肽在制藥中的新應(yīng)用。
綜上所述， 目前關(guān)于生物酶法制備的生物活性肽對(duì)學(xué)習(xí)和記憶影響的報(bào)道尚無(wú)。限制性酶解法生產(chǎn)生物活性肽具有化學(xué)法所不能比擬的優(yōu)勢(shì)，酶法水解在溫和的條件下進(jìn)行，能在一定的條件下進(jìn)行定位水解分裂產(chǎn)生特定的肽，且易于控制水解進(jìn)程，因而能較好地滿足肽的生產(chǎn)需要。此外，蛋白質(zhì)酶降解法生產(chǎn)生物活性肽安全性極高，能在溫和的條件下進(jìn)行定位水解分裂產(chǎn)生特定的肽，且水解過(guò)程易控制，因而近幾年報(bào)道的活性肽的制備方法主要為酶解法。
近年來(lái)隨著人們對(duì)海洋生物的關(guān)注度愈加提高，由于海洋生物長(zhǎng)期處于海水這樣一個(gè)特異的閉鎖環(huán)境里，在進(jìn)化過(guò)程中產(chǎn)生了與陸上生物不同的代謝系統(tǒng)和機(jī)體防御系統(tǒng)，因此海洋生物中蘊(yùn)藏著許多功能特異、結(jié)構(gòu)新穎的生理活性物質(zhì)，包括肽類、生物堿類、多糖類、多烯類不飽和脂肪酸等化合物。牛津大學(xué)的研究人員對(duì)挪威西部的2031名年齡為70-74歲之間的老年人的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)常吃魚(yú)的老年人，在參加記憶、視覺(jué)感知、空間認(rèn)知、注意力、方向感和語(yǔ)言流暢度測(cè)試時(shí)，得分高于不經(jīng)常吃魚(yú)的老年人。另外，德國(guó)《星期日?qǐng)D片報(bào)》報(bào)道，日本民族平均智商為115，有10%的人智商在130以上，而德國(guó)人、英國(guó)人、美國(guó)人的智商達(dá)到130以上的只有3%。因此， 利用深海魚(yú)類開(kāi)發(fā)益智產(chǎn)品具有潛在的可行性，同時(shí)也是實(shí)現(xiàn)海洋生物資源可持續(xù)性發(fā)展的重要途徑之一。
本發(fā)明人以深海魚(yú)為原料，通過(guò)生物可控酶解的方法制備具有改善記憶功效的生物活性肽。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，提供以深海魚(yú)為原料制備具有改善記憶的生物活性肽的方法，能為相關(guān)健腦功能性食品的開(kāi)發(fā)提供一種基料，具體技術(shù)方案如下。
以深海魚(yú)為原料制備具有改善記憶的生物活性肽的方法，包括如下步驟:
(I)限制性酶解:將冷凍的深海魚(yú)解凍后去頭、內(nèi)臟，攪成肉糜備用，以上述肉糜為原料，加水使蛋白質(zhì)含量達(dá)到6-10% (w/w),水浴加熱至45-60° C,加入Alcalase或木瓜蛋白酶中的一種或兩種，酶解至水解度為28-35%，90-98° C滅酶10_15min，得酶解液；
(2)蛋白質(zhì)與脂質(zhì)分離:酶解液于4-8 °C冷凍離心，離心轉(zhuǎn)速480(T6500g，離心時(shí)間30_45min,尚心后去除上層脂質(zhì),得尚心清液；
(3)超濾祛除大分子蛋白；將離心清液過(guò)濾，過(guò)分子量為10_30kDa的超濾膜，取透過(guò)液；
(4)離子交換樹(shù)脂分離:將透過(guò)液通過(guò)001X7凝膠型苯乙烯系強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以純水為洗脫劑，收集洗脫液；
(5)濃縮、噴霧干燥，得記憶改善肽:真空濃縮步驟(4)分離后的產(chǎn)物，噴霧干燥，得記憶改善肽。
上述方法中，所述冷凍為將捕獲后的深海魚(yú)于_18'22°C溫度下冷凍。
上述方法中，深海魚(yú)包括小黃魚(yú)、石斑魚(yú)中的一種以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明制得的記憶改善肽可使小鼠走迷宮的錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，跳臺(tái)試驗(yàn)亦證實(shí)該肽可使小鼠觸電潛伏期明顯延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)極顯著減少，提高了學(xué)習(xí)記憶的能力，具有改善記憶力的功效。[0032]2、本發(fā)明的記憶改善肽的制備工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品安全，可規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明的實(shí)施不限于此。
實(shí)施例1(I)限制性酶解:小黃魚(yú)捕獲后于_18°C溫度下急凍，解凍后去頭、內(nèi)臟，攪成肉糜備用。以上述肉糜為原料，加水使蛋白質(zhì)含量達(dá)到10% (w/w)，水浴加熱至45°C，加入Alcalase酶解至水解度為28%，98° C滅酶lOmin，得酶解液；
(2)蛋白質(zhì)與脂質(zhì)分離:酶解液于4 °(:冷凍離心，離心轉(zhuǎn)速4800g，離心時(shí)間30min，離心后去除上層脂質(zhì)，得離心清液；
(3)超濾祛除大分子蛋白；將離心清液過(guò)濾，過(guò)分子量為IOkDa的超濾膜，取透過(guò)液；
(4)離子交換樹(shù)脂分離:將透過(guò)液通過(guò)001X7凝膠型苯乙烯系強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以純水為洗脫劑，收集洗脫液；
(5)濃縮、噴霧干燥，得記憶改善肽:真空濃縮分離后的產(chǎn)物，噴霧干燥，得記憶改善肽。
實(shí)施例2
(I)限制性酶解:石斑魚(yú)捕獲后于-22° C溫度下急凍，解凍后去頭、內(nèi)臟，攪成肉糜備用。以上述肉糜為原料,加水使蛋白質(zhì)含量達(dá)到6% (w/w)，水浴加熱至60°C，加入木瓜蛋白酶酶解至水解度為35%，90° C滅酶15min，得酶解液；
(2)蛋白質(zhì)與脂質(zhì)分離:酶解液于8 °(:冷凍離心，離心轉(zhuǎn)速6500g，離心時(shí)間45min，離心后去除上層脂質(zhì)，得離心清液；
(3)超濾祛除大分子蛋白；將離心清液過(guò)濾，過(guò)分子量為30kDa的超濾膜，取透過(guò)液；
(4)離子交換樹(shù)脂分離:將透過(guò)液通過(guò)001X7凝膠型苯乙烯系強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以純水為洗脫劑，收集洗脫液；
(5)濃縮、噴霧干燥，得記憶改善肽:真空濃縮分離后的產(chǎn)物，噴霧干燥，得記憶改善肽。
本實(shí)施方式通過(guò)不同的試驗(yàn)證明記憶改善肽對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響及其機(jī)制:(I)跳臺(tái)法評(píng)價(jià)記憶改善肽對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響；(2)迷宮法評(píng)價(jià)記憶改善肽對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康合格的NIH小鼠，雌雄兼有，體重17-20克；健康合格的SD大鼠，雌雄兼有，體重60-80克；均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
實(shí)驗(yàn)劑量設(shè)計(jì):給NIH小鼠灌胃，測(cè)得其對(duì)記憶改善肽的最大耐受量為36g/kg。均按體重法換算，實(shí)驗(yàn)中大鼠與小鼠的劑量設(shè)計(jì)均按小鼠(按公斤體重法)最大耐受量的1/18、1/36、1/72設(shè)置，即為高劑量組(2g/kg*bw)、中劑量組(lg/kg*bw)、低劑量組(0.5g/kg*bw)?？瞻讓?duì)照組灌胃生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃天然牛磺酸(純度大于95%)。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，其有效劑量為150mg/kg*bw，故按此劑量試驗(yàn)。
統(tǒng)計(jì)分析:所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析由SPSS13.0軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(x 土 s)表不，以/*〈0.05為差異有顯著意義。
跳臺(tái)法評(píng)價(jià)改善記憶肽對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響
(I)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及分組:選取健康合格的NIH小鼠90只，隨機(jī)分成5組(即空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量組、中劑量組和低劑量組)，每組18只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，動(dòng)物體重17±2.lg，按上述實(shí)驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)連續(xù)灌胃30天。
(2)跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練及測(cè)驗(yàn)方案:跳臺(tái)裝置為一長(zhǎng)方形反射箱，其長(zhǎng)徑被黑色塑料板隔為若干區(qū)間，底部鋪以間距為5_的銅柵，可通電流。每個(gè)小區(qū)間有一個(gè)小平臺(tái)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將小鼠放在銅柵上，當(dāng)銅柵通電時(shí)，跳在銅柵上的小鼠受到電擊，其正常反應(yīng)是躲避電擊跳上平臺(tái)，大部分小鼠有可能再次或多次跳下平臺(tái)受到電擊，受到電擊時(shí)又會(huì)迅速跳回平臺(tái)，如此進(jìn)行訓(xùn)練。訓(xùn)練頻率為每2天I次，灌胃期間訓(xùn)練15次，訓(xùn)練于灌胃前I小時(shí)進(jìn)行。具體訓(xùn)練方案如下:電壓控制在36V，將小鼠放入銅網(wǎng)上，先適應(yīng)環(huán)境3min，然后通電，小鼠受電擊后，多數(shù)跳上平臺(tái)逃避電擊，若小鼠跳下平臺(tái)，以小鼠雙足同時(shí)接觸銅網(wǎng)為觸電，視為錯(cuò)誤反應(yīng)。灌胃30天后，進(jìn)行正式試驗(yàn)。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，將小鼠放在跳臺(tái)上，同時(shí)按動(dòng)秒表，記錄小鼠第I次跳下時(shí)間，此為觸電潛伏期，記錄5min內(nèi)小鼠跳下次數(shù)(即錯(cuò)誤次數(shù))，作為記憶指標(biāo)，將結(jié)果進(jìn)行t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析(表I)。
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:表I所示為各組實(shí)驗(yàn)小鼠觸電潛伏期及5min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)的記錄，從表中可以看出，與空白對(duì)照組相比較，高、中、低3個(gè)劑量灌胃記憶改善肽均均可使小鼠觸電潛伏期明顯延長(zhǎng)，其中高、中劑量組與空白對(duì)照組之間對(duì)比差異顯著(/X0.05)，而低劑量組的改善效果不顯著0°>0.05)。此外，高、中劑量組灌胃記憶改善肽可使小鼠5min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)顯著減少，尤其是高劑量組灌胃的效果與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)，比起空白對(duì)照組有極顯著的改善0°〈0.01)，中劑量灌胃組的效果也比空白對(duì)照組有顯著改善0°〈0.05)，但低劑量灌胃組的效果與空白對(duì)照 組無(wú)顯著差異0°>0.05)。以上結(jié)果提示，按中劑量(1.0g/kg)以上灌胃記憶改善肽有助于小鼠記憶獲得，且效果顯著。
表I改善記憶肽對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響(跳臺(tái)法)(n=18, 土SD)
權(quán)利要求
1.以深海魚(yú)為原料制備具有改善記憶的生物活性肽的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)限制性酶解:將冷凍的石斑魚(yú)解凍后去頭、內(nèi)臟，攪成肉糜備用，以上述肉糜為原料，加水使蛋白質(zhì)含量達(dá)到6-10% (w/w),水浴加熱至45_60°C,加入Alcalase或木瓜蛋白酶中的一種或兩種，酶解至水解度為35%，90-98° C滅酶10-15min，得酶解液； (2)蛋白質(zhì)與脂質(zhì)分離:酶解液于4-8°(:冷凍離心，離心轉(zhuǎn)速480(T6500g，離心時(shí)間30-45min,尚心后去除上層脂質(zhì),得尚心清液； (3)超濾祛除大分子蛋白；將離心清液過(guò)濾，過(guò)分子量為30kDa的超濾膜，取透過(guò)液； (4)離子交換樹(shù)脂分離:將透過(guò)液通過(guò) 001X7凝膠型苯乙烯系強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)月旨，以純水為洗脫劑，收集洗脫液； (5)濃縮、噴霧干燥，得記憶改善肽:真空濃縮步驟(4)分離后的產(chǎn)物，噴霧干燥，得記憶改善肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于所述冷凍為將捕獲后的石斑魚(yú)于-18'22°C溫度下冷凍。
專利摘要
本發(fā)明公開(kāi)了以深海魚(yú)為原料制備具有改善記憶的生物活性肽的方法，該方法包括以下步驟(1)限制性酶解；(2)蛋白質(zhì)與脂質(zhì)分離；(3)超濾法祛除大分子蛋白；(4)離子交換樹(shù)脂分離純化；(5)濃縮、噴霧干燥，得記憶改善肽。本發(fā)明所研制的改善記憶肽，通過(guò)小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)及日式迷宮試驗(yàn)證明該肽具有明顯的生理活性，且大腦皮質(zhì)組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化揭示該肽能明顯增多大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞突觸類型、增厚突觸膜、增多突觸小泡、增多線粒體且大型化，證明該改善記憶肽十分有益于大腦皮層的生長(zhǎng)發(fā)育。該肽可改善成年人記憶力減退并促進(jìn)未成年兒童的智力發(fā)育，同時(shí)有望發(fā)展成為老年癡呆患者的臨床營(yíng)養(yǎng)食品。
文檔編號(hào)C07K1/18GKCN102286582 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 201110167083
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2011年6月21日
發(fā)明者任嬌艷, 趙謀明, 崔春, 游麗君, 蘇國(guó)萬(wàn) 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (5), 非專利引用 (7),