本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，具體是涉及一種用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒。

背景技術(shù)：

1、牛皰疹病毒1型(bhv-1)屬于皰疹病毒科，甲皰疹病毒亞科，水痘病毒屬，是導(dǎo)致傳染性牛呼吸道疾病或流產(chǎn)的關(guān)鍵病原體，可引起牛的一系列疾病綜合征，包括牛呼吸系統(tǒng)疾病(brd)、生殖道疾病外陰陰道炎和流產(chǎn)、結(jié)膜炎和嚴(yán)重新生兒疾病，對畜牧業(yè)造成威脅和重大經(jīng)濟(jì)損失。目前使用滅活或減毒疫苗對抗牛皰疹病毒1型(bhv-1)。然而，它們對野生型牛皰疹病毒1型(bhv-1)感染只有部分保護(hù)作用。

2、牛皰疹病毒1型(bhv-1)分為1.1和1.2型，不同基因型的bhv-1病毒感染后的癥狀類似，但流行病學(xué)數(shù)據(jù)表明牛皰疹病毒1型(bhv-1)1.1毒株和牛皰疹病毒1型(bhv-1)1.2毒株的臨床效果不同，因此在進(jìn)行疫苗免疫前，對bhv-1病毒基因型的鑒別尤為重要?，F(xiàn)有技術(shù)中，商品化elisa試劑盒可用于確認(rèn)bhv-1感染，但無法區(qū)分其為何種基因型感染，而采用限制性酶切和單克隆抗體(mab)結(jié)合進(jìn)行區(qū)分的方法操作繁瑣，成本高，因此亟需開發(fā)一種操作簡便、快速、準(zhǔn)確的鑒別牛皰疹病毒1型基因型的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明創(chuàng)造旨在克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種鑒別牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的雙重pcr檢測方法。

2、為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的引物組，所述引物組包含以下引物：

4、引物ibrv-1.1-f的核苷酸序列如seq?id?no：1所示；

5、引物ibrv-1.1-r的核苷酸序列如seq?id?no：2所示；

6、引物ibrv-1.2-f的核苷酸序列如seq?id?no：3所示；

7、引物ibrv-1.2-r的核苷酸序列如seq?id?no：4所示。

8、一種用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒，所述試劑盒包含如下組分：

9、引物ibrv-1.1-f的核苷酸序列如seq?id?no：1所示；

10、引物ibrv-1.1-r的核苷酸序列如seq?id?no：2所示；

11、引物ibrv-1.2-f的核苷酸序列如seq?id?no：3所示；

12、引物ibrv-1.2-r的核苷酸序列如seq?id?no：4所示；

13、pcr?10×ex?taq?bufferr(mg2+plus)、dntp?mixture、dna模板、ddh2o。

14、進(jìn)一步的，所述試劑盒的pcr擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性5min；95℃20s，56℃30s，72℃40s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。

15、所述用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒，在鑒別牛皰疹病毒1.1和1.2基因型中的應(yīng)用。

16、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢：

17、本試劑盒檢測靈敏度高，特異性好，通過對牛呼吸道合胞體病毒、牛病毒性腹瀉病毒、牛輪狀病毒、牛冠狀病毒等核酸樣品檢測，只有牛皰疹病毒1型(bhv-1)陽性模板擴(kuò)增出預(yù)期條帶。本試劑盒檢測重復(fù)性好，通過分別對3種混合和單一模板進(jìn)行三次重復(fù)性檢測，條帶均得到一致性結(jié)果。

18、本發(fā)明提供的檢測方法可進(jìn)行定性檢測，快速分型，方法流程簡單，易于操作，可快速掌握，用該發(fā)明方法對牛皰疹病毒1型(bhv-1)的1.1型dna、牛皰疹病毒1型(bhv-1)的1.2型dna及混合其dna作為模板進(jìn)行擴(kuò)增來驗(yàn)證本方法的準(zhǔn)確性，同時(shí)臨床收集的60份鼻拭子和10份牛肺用該體系進(jìn)行檢測，均得到預(yù)期結(jié)果。

19、本方法能同時(shí)鑒別檢測牛皰疹病毒1型(bhv-1)的1.1和1.2基因型，對相關(guān)病毒檢驗(yàn)檢疫技術(shù)的研究有實(shí)際的借鑒意義。通過此法可了解在家畜群里牛皰疹病毒1型的基因型信息，同時(shí)對部分地區(qū)飼養(yǎng)的奶牛進(jìn)行病毒分子流行病學(xué)的研究，以此了解疾病流行情況，為預(yù)防和控制牛牛皰疹病毒病提供數(shù)據(jù)和技術(shù)支持。該方法能夠廣泛應(yīng)用于出入境檢驗(yàn)檢疫部門、畜牧獸醫(yī)部門和養(yǎng)殖單位，為疫病的有效防控具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一種用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的引物組，其特征在于，所述引物組包含以下引物：

2.一種用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如下組分：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的pcr擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性5min；95℃20s，56℃30s，72℃40s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。

4.一種如權(quán)利要求2所述用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒，在鑒別牛皰疹病毒1.1和1.2基因型中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的引物組，還提供了用于檢測牛皰疹病毒1.1和1.2基因型的試劑盒，本試劑盒檢測靈敏度高，特異性好，重復(fù)性高，本發(fā)明提供的檢測方法可進(jìn)行定性檢測，快速分型，方法流程簡單，易于操作。

技術(shù)研發(fā)人員：白悅,車艷杰,李守軍,王顯兵,蔣珊珊,呂茂杰,李睿,劉海霞
受保護(hù)的技術(shù)使用者：天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19