本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種降低細(xì)胞破碎液粘度的方法。
背景技術(shù)：
1、大腸桿菌是目前使用最廣泛的原核表達(dá)宿主，大腸桿菌胞內(nèi)表達(dá)重組蛋白時(shí)，要獲得重組蛋白首先要進(jìn)行細(xì)胞破碎，采用酶法等較溫和的破碎方法對(duì)大腸桿菌破碎時(shí)，大腸桿菌染色體dna會(huì)釋放至裂解液中，使得裂解液十分粘稠，影響后續(xù)離心等分離步驟。目前，在采用較溫和方法破碎大腸桿菌過程中降低裂解液粘度的方法通常添加核酸酶，對(duì)大腸桿菌染色體dna進(jìn)行水解，降低粘度利于分離，其缺點(diǎn)在于核酸酶用酶成本較高。另外一種方法是改造基因工程菌，在基因工程菌周質(zhì)空間分泌表達(dá)核酸酶，細(xì)胞破碎后能夠自動(dòng)對(duì)釋放出的宿主dna進(jìn)行降解，該方法避免了添加外源核酸酶帶來的高成本，然而該方法適用性較差，需要對(duì)大腸桿菌改造進(jìn)行周質(zhì)空間分泌表達(dá)核酸酶，或采用改造后的菌株，并不適用于常規(guī)大腸桿菌菌株破碎的粘度降低。
2、因此，目前需研究開發(fā)一種成本低，適用性強(qiáng)的降低大腸桿菌破碎液粘度方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的之一在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種細(xì)胞破碎液的降粘制劑，該降粘制劑能夠有效降低含有待破碎菌的細(xì)胞破碎液的粘度，有利于破碎液的后續(xù)處理。
2、本發(fā)明的目的之二在于提供一種降低細(xì)胞破碎液粘度的方法，該方法簡(jiǎn)單方便，高效且成本低。
3、為此，本發(fā)明第一方面提供了一種細(xì)胞破碎液的降粘制劑，其包含表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌菌體和/或由表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌菌體制得的核酸酶粗品。
4、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述非特異水解dna的核酸酶包括全能核酸酶、金黃色葡萄球菌核酸酶b(staphylococcus?aureus?nucleaseb)和脫氧核糖核酸酶i中的一種或幾種。
5、本發(fā)明第二方面提供了一種降低細(xì)胞破碎液粘度的方法，其將如本發(fā)明第一方面所述的降粘制劑與細(xì)胞破碎液混合形成細(xì)胞破碎體系，以在細(xì)胞破碎過程中降低細(xì)胞破碎液的粘度；其中，所述細(xì)胞破碎液為含待破碎菌的菌懸液經(jīng)過細(xì)胞破碎后的混合液。
6、本發(fā)明中，所述待破碎菌包括革蘭氏陽性菌和/或革蘭氏陰性菌。
7、優(yōu)選地，在細(xì)胞破碎體系中，降粘制劑的濃度與含待破碎菌的菌懸液中菌濃度之比≥1:20萬。
8、例如，在本發(fā)明的一些具體的例子中，所述待破碎菌為革蘭氏陰性菌，例如，大腸桿菌；所述降低細(xì)胞破碎液粘度的方法包括將表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌菌體加入至含待破碎的大腸桿菌的菌懸液中形成細(xì)胞破碎體系，在待破碎的大腸桿菌的破碎過程中，表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌也會(huì)發(fā)生裂解釋放出非特異水解dna的核酸酶，對(duì)破碎體系中釋放的dna進(jìn)行降解，降低裂解液粘度。
9、在一些具體例子中，所述表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌包括但不限于根據(jù)大腸桿菌密碼子優(yōu)化設(shè)計(jì)含有粘質(zhì)沙雷菌(serratia?marcescens)來源的全能核酸酶目的序列的dna序列(如seq?id?no.1所示)的大腸桿菌、根據(jù)大腸桿菌密碼子優(yōu)化設(shè)計(jì)含有金黃色葡萄球菌核酸酶b(staphylococcus?aureus?nucleaseb)目的序列的dna序列(如seqid?no.2所示)的大腸桿菌。
10、本發(fā)明中所述用語“細(xì)胞破碎液”與“裂解液”和“細(xì)胞裂解液”可以互換使用。
11、本發(fā)明提供了一種降低細(xì)胞破碎液粘度的方法，該方法中表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌細(xì)胞和所需破碎的細(xì)胞是兩種不同細(xì)胞，本發(fā)明降低粘度不需要直接添加核酸酶，使用表達(dá)核酸酶的大腸桿菌成本低且簡(jiǎn)單高效。
1.一種細(xì)胞破碎液的降粘制劑，其包含表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌菌體和/或由表達(dá)非特異水解dna的核酸酶的大腸桿菌菌體制得的核酸酶粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降粘制劑，其特征在于，所述非特異水解dna的核酸酶包括全能核酸酶、金黃色葡萄球菌核酸酶b(staphylococcus?aureus?nuclease?b)和脫氧核糖核酸酶i中的一種或幾種。
3.一種降低細(xì)胞破碎液粘度的方法，其將如權(quán)利要求1或2所述的降粘制劑與細(xì)胞破碎液混合形成細(xì)胞破碎體系，以在細(xì)胞破碎過程中降低細(xì)胞破碎液的粘度；其中，所述細(xì)胞破碎液為含待破碎菌的菌懸液經(jīng)過細(xì)胞破碎后的混合液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述待破碎菌包括革蘭氏陽性菌和/或革蘭氏陰性菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，在細(xì)胞破碎體系中，降粘制劑的濃度與含待破碎菌的菌懸液中菌濃度之比≥1:20萬。