本發(fā)明屬于基因工程，具體涉及一種中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、在臨床輸血治療中，rh血型系統(tǒng)的重要性僅次于abo血型系統(tǒng)，rh等位基因共編碼55個(gè)抗原，rh基因多態(tài)性造就了rh抗原多態(tài)性，使之成為人類47個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的系統(tǒng)之一。rh血型系統(tǒng)抗原的免疫原性很強(qiáng)，其中以d抗原的免疫原性最強(qiáng)。有研究發(fā)現(xiàn)rh陰性個(gè)體首次輸入2ml以上的rh陽(yáng)性紅細(xì)胞就有可能產(chǎn)生抗-d。近年來(lái)，隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)步和數(shù)據(jù)的共享，發(fā)現(xiàn)不僅僅是rh陰性(d抗原缺失型)個(gè)體會(huì)產(chǎn)生抗-d，部分rhd基因突變而導(dǎo)致d抗原不完全表達(dá)的d變異型個(gè)體，由于d抗原表位的缺失，在受到d抗原的刺激下，也會(huì)產(chǎn)生抗-d；人群中較為常見(jiàn)弱d15型、rhd-ce(2-9)-d融合型、dvi-ⅲ型等，都有產(chǎn)生抗-d的文獻(xiàn)報(bào)道。抗-d主要是igg型免疫性抗體，可經(jīng)輸血或懷孕等免疫途徑產(chǎn)生。抗-d可引起急性或慢性溶血性輸血反應(yīng)及胎兒新生兒溶血病(hdfn)，因此臨床工作中，準(zhǔn)確檢出抗-d是輸血安全的基本保障，也是指導(dǎo)rh-hdfn預(yù)防和診治的依據(jù)。目前檢出igg型抗-d的方法是間接抗人球蛋白法，采用抗fc端的二抗作為中介，使結(jié)合igg抗體的紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集；檢測(cè)抗體的金標(biāo)準(zhǔn)是試管間接抗人球蛋白法，但存在操作繁瑣，受操作人員技術(shù)水平影響較大的缺點(diǎn)。對(duì)抗-d的濃度通常以效價(jià)或滴度來(lái)表示，檢測(cè)方法是稀釋抗體并用間接抗人球蛋白法檢測(cè)，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量抗-d的量，同樣存在結(jié)果粗略的缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供及一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，該抗獨(dú)特型抗體實(shí)能夠與抗d抗體特異性結(jié)合，可以應(yīng)用到臨床血型檢測(cè)，或預(yù)防或治療抗d抗體相關(guān)疾病的作用。

2、本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，上述重鏈可變區(qū)包含hcdr1、hcdr2和hcdr3序列中的至少一個(gè)，其中：

3、上述hcdr1的氨基酸序列具有如seq?id?no.25所示的氨基酸序列；

4、上述hcdr2的氨基酸序列具有如seq?id?no.26所示的氨基酸序列；

5、上述hcdr3的氨基酸序列具有如seq?id?no.27所示的氨基酸序列；

6、或上述seq?id?no.25、seq?id?no.26和seq?id?no.27經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸獲得的氨基酸序列，或與上述seq?id?no.25、seq?id?no.26和seq?id?no.27具有90％以上同一性的氨基酸序列。

7、進(jìn)一步地，該輕鏈可變區(qū)包含lcdr1、lcdr2和lcdr3序列中的任意一個(gè)，其中：

8、上述lcdr1的氨基酸序列具有如seq?id?no.28所示的氨基酸序列；或

9、上述lcdr2的氨基酸序列具有如seq?id?no.29所示的氨基酸序列；或

10、上述lcdr3的氨基酸序列具有如seq?id?no.30所示的氨基酸序列；

11、或上述seq?id?no.28、seq?id?no.29和seq?id?no.30經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸獲得的氨基酸序列，或與上述seq?id?no.28、seq?id?no.29和seq?id?no.30具有90％以上同一性的氨基酸序列。

12、進(jìn)一步地，該重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.31所示；上述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.32所示。

13、進(jìn)一步地，該抗獨(dú)特型抗體為鼠源抗體。

14、進(jìn)一步地，該抗獨(dú)特型抗體的重鏈的恒定區(qū)為鼠igm，igg1、igg2a、igg2b或igg3的重鏈恒定區(qū)，以及κ或λ型輕鏈恒定區(qū)。

15、進(jìn)一步地，該抗獨(dú)特型抗體的抗原結(jié)合部分選自f(ab’)2片段。

16、本發(fā)明還公開了上述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體的用途，上述抗獨(dú)特型抗體用于檢測(cè)血清中抗d抗體的含量的用途；或用于中和抗d抗體的用途。

17、本發(fā)明還公開了上述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體的用途，其在制備抗d抗體相關(guān)疾病的藥物中的用途。

18、本發(fā)明的有益效果是：1.針對(duì)可變區(qū)的抗原決定簇得到抗獨(dú)特型抗體，能特異性結(jié)合抗d抗體fab端，可以起到模擬抗原的作用。2.該抗獨(dú)特型抗體對(duì)抗d抗體具有高親和性，能夠阻斷抗d抗體介導(dǎo)的紅細(xì)胞凝集作用，可用于檢測(cè)含有抗d的多種血型意外抗體混合樣本，也可于用rh-hdfn的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和臨床診療，對(duì)于提高臨床輸血安全性和疾病救治具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，其特征在于，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含hcdr1、hcdr2和hcdr3序列中的至少一個(gè)，其中：

2.如權(quán)利要求1所述的一種中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)包含lcdr1、lcdr2和lcdr3序列中的任意一個(gè)，其中：

3.如權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.31所示；所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?idno.32所示。

4.如權(quán)利要求3所述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，其特征在于，所述抗獨(dú)特型抗體為鼠源抗體。

5.如權(quán)利要求4所述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，其特征在于，所述抗獨(dú)特型抗體的重鏈的恒定區(qū)為鼠igm，igg1、igg2a、igg2b或igg3的重鏈恒定區(qū)，以及κ或λ型輕鏈恒定區(qū)。

6.如權(quán)利要求5所述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體，其特征在于，所述抗獨(dú)特型抗體的抗原結(jié)合部分選自f(ab’)2片段。

7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體的用途，其特征在于，所述抗獨(dú)特型抗體用于檢測(cè)血清中抗d抗體的含量的用途；或用于中和抗d抗體的用途。

8.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的一種用于檢測(cè)和中和抗d抗體的抗獨(dú)特型抗體的用途，其特征在于，其在制備抗d抗體相關(guān)疾病的藥物中的用途。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種中和抗D抗體的抗獨(dú)特型抗體，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)包含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列中的至少一個(gè)，其中：HCDR1的氨基酸序列具有如SEQ?ID?No.25所示的氨基酸序列；HCDR2的氨基酸序列具有如SEQ?ID?No.26所示的氨基酸序列；HCDR3的氨基酸序列具有如SEQ?ID?No.27所示的氨基酸序列。該抗獨(dú)特型抗體實(shí)能夠與抗D抗體特異性結(jié)合，可以應(yīng)用到臨床血型檢測(cè)，或預(yù)防或治療抗D抗體相關(guān)疾病的作用。

技術(shù)研發(fā)人員：馬超鋒,張良子,張嫄,徐華
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西安市中心血站（陜西省血液中心）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26