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類胡蘿卜素φ環(huán)合酶及其在構(gòu)建合成異海綿烯工程菌株中的應(yīng)用

文檔序號:40402838發(fā)布日期:2024-12-20 12:26閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.?類胡蘿卜素?φ?環(huán)合酶,其氨基酸序列如seq?id?no.6所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述類胡蘿卜素?φ?環(huán)合酶的基因序列,其特征在于,基因序列如seq?id?no.5所示。

3.?權(quán)利要求1所述類胡蘿卜素?φ?環(huán)合酶在異海綿烯合成中的應(yīng)用。

4.?一株合成異海綿烯的重組菌株,其特征在于,所述重組菌株是在巴斯德畢赤酵母中導(dǎo)入香葉基香葉基二磷酸合酶crte、八氫番茄紅素合成酶/番茄紅素環(huán)化酶crtyb、八氫番茄紅素去飽和酶crti、3-羥基-3-甲基戊二酰coa還原酶thmgr和類胡蘿卜素?φ?環(huán)合酶crtu的表達(dá)盒得到;所述crte的編碼基因序列如seq?id?no.1所示;所述crtyb的編碼基因序列如seq?id?no.2所示;所述crti的編碼基因序列如seq?id?no.3所示;所述thmgr的編碼基因序列如seq?id?no.4所示;所述crtu的編碼基因序列如seq?id?no.5所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組菌株,其特征在于,所述表達(dá)盒的啟動子為巴斯德畢赤酵母的pgpm1啟動子、ppdc1啟動子、pmdh3啟動子、padh2啟動子或pgap啟動子;所述終止子為巴斯德畢赤酵母的sccyc1tt終止子、rpp1btt終止子、rps2tt終止子、rpl2att終止子或rps3tt終止子。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組菌株,其特征在于,所述重組巴斯德畢赤酵母還表達(dá)1個標(biāo)記基因;所述標(biāo)記基因選自質(zhì)粒bb3ak-af的硫酸卡那霉素編碼基因表達(dá)盒。

7.權(quán)利要求4-6中任一項所述重組菌株的構(gòu)建方法,其特征在于,將所述crte、crtyb、crti以及thmgr的表達(dá)盒通過質(zhì)粒形式導(dǎo)入所述巴斯德畢赤酵母gs115,整合在巴斯德畢赤酵母菌株基因組上。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建方法,其特征在于,包括:將所述crte、crtyb、crti、thmgr和crtu的基因片段通過goldengate方法插入質(zhì)粒bb1-23中,得到質(zhì)粒bb1-23-crte、bb1-23-crtyb、bb1-23-crti、bb1-23-thmgr和bb1-23-crtu;

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建方法,其特征在于,使用bsa1酶和t4連接酶將所述crte、crtyb、crti、thmgr和crtu的基因片段通過goldengate方法插入質(zhì)粒bb1-23。

10.權(quán)利要求4-6中任一項所述重組菌株在生產(chǎn)異海綿烯中的應(yīng)用。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,在營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)重組菌株,得到含有異海綿烯的發(fā)酵產(chǎn)物,分離得到產(chǎn)物異海綿烯。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了類胡蘿卜素φ環(huán)合酶及其在構(gòu)建合成異海綿烯工程菌株中的應(yīng)用,所述菌株通過向巴斯德畢赤酵母GS115中導(dǎo)入香葉基香葉基二磷酸合酶CrtE、八氫番茄紅素合成酶/番茄紅素環(huán)化酶CrtYB、八氫番茄紅素去飽和酶CrtI、3?羥基?3?甲基戊二酰CoA還原酶tHMGR和類胡蘿卜素φ環(huán)合酶CrtU的表達(dá)盒得到;所述CrtE的編碼基因序列如SEQ?ID?No.1所示;所述CrtYB的編碼基因序列如SEQ?ID?No.2所示;所述CrtI的編碼基因序列如SEQ?ID?No.3所示;所述tHMGR的編碼基因序列如SEQ?ID?No.4所示;所述CrtU的編碼基因序列如SEQ?ID?No.5所示。本發(fā)明首次利用類胡蘿卜素φ環(huán)合酶構(gòu)建了異海綿烯合成巴斯德畢赤酵母菌株,并且實現(xiàn)在酵母內(nèi)生物合成異海綿烯。

技術(shù)研發(fā)人員:姜萬奎,孫敬翔,信豐學(xué),姜岷,李昕怡,章文明,蔣羽佳
受保護的技術(shù)使用者:南京工業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/12/19
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