本發(fā)明涉及中藥成分提取及應(yīng)用，具體涉及一種球花石斛中性多糖、制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、胃粘膜損傷導(dǎo)致的炎癥和消化性潰瘍是常見的全球性問題。飲酒、心理緊張、不良飲食習(xí)慣、吸煙和過量服用非甾體抗炎藥可導(dǎo)致胃粘膜損傷。其中，由于飲酒造成的急慢性胃炎、胃粘膜上皮的損傷及胃潰瘍發(fā)病率不斷上升，已經(jīng)成為飲酒文化中的一個嚴(yán)重健康問題。因此，尋找安全有效的胃粘膜保護(hù)的藥物是治療胃損傷的重要任務(wù)。

2、石斛(dendrobium)，藥用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。其藥用歷史悠久，具有生津益胃、滋陰清熱等功能。我國石斛資源豐富，共有石斛屬植物76種，2變種?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)石斛屬植物具有豐富的多糖，且這些多糖大都具有較強生物活性，如抑制炎癥、護(hù)肝、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)以及治療胃病等。

3、球花石斛(dendrobium?thyrsiflorum?rchb.f)是中藥石斛的主要來源之一，可供觀賞，以花姿優(yōu)美，花色艷麗而著稱。由于球花石斛集藥用和觀賞于一體，在藥學(xué)及園藝業(yè)上受到了廣泛的關(guān)注。國內(nèi)外對球花石斛化學(xué)成分的研究已有報道，目前從球花石斛中分離得到香豆素類、菲類、聯(lián)芐類、芴酮類及黃酮類等多種類型化合物。現(xiàn)有報道球花石斛也富含多糖類化合物，但對球花石斛中多糖的鑒定以及相關(guān)應(yīng)用則未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明通過對球花石斛中的多糖進(jìn)行提取分析，最終獲得一種分子量在9.18×103da、葡萄糖和甘露糖摩爾比0.415：0.585的多糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析并探索其保護(hù)胃粘膜的藥理學(xué)活性。

2、為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一種球花石斛中性多糖，所述球花石斛中性多糖具有如下結(jié)構(gòu)：

3、

4、優(yōu)選地，所述球花石斛中性多糖由葡萄糖和甘露糖以摩爾比0.415：0.585組成，分子量為：mw＝9.18×103da。

5、本發(fā)明第二方面提供第一方面所述的球花石斛中性多糖的制備方法，包括：

6、步驟s1，制備球花石斛粗多糖；

7、步驟s2，將球花石斛粗多糖進(jìn)行分離純化，所述純化過程包括：先將粗多糖通過陰離子交換樹脂進(jìn)行純化，收集第一洗脫液后濃縮；濃縮物透析后通過葡聚糖凝膠柱純化，收集第二洗脫液后冷凍干燥。

8、優(yōu)選地，所述步驟s1包括：

9、步驟s1-1，將球花石斛粉碎過篩；

10、步驟s1-2，將球花石斛粉采用溶劑進(jìn)行超聲提取，收集提取液；

11、步驟s1-3，去除提取液中的蛋白質(zhì)；

12、步驟s1-4，將去除蛋白質(zhì)的提取液與乙醇反應(yīng)，獲得球花石斛粗多糖。

13、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述步驟s1-2包括：

14、步驟s1-2-1，將球花石斛粉采用丙酮于50～56℃加熱提取1～2h，收集粉末；

15、步驟s1-2-2，將粉末再采用去離子水于95～100℃加熱提取2～3h，分離出液體，即為所述提取液；更為優(yōu)選提取3次；

16、更為優(yōu)選地，所述提取是采用超聲提取，超聲頻率為200～400w。

17、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述步驟s1-3中，采用sevage試劑去除提取液中的蛋白質(zhì)。

18、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述步驟s1-4中，乙醇在體系中的體積占比不低于90％。

19、優(yōu)選地，所述步驟s2中，將粗多糖通過陰離子交換樹脂進(jìn)行純化，是采用deae-纖維素陰離子交換樹脂，調(diào)整流速為15ml/min，分別采用去離子水和不同濃度的nacl液洗脫，收集去離子水洗脫液，濃縮；和/或，

20、濃縮物透析是采用3500da透析袋。

21、本發(fā)明第三方面提供第一方面所述的球花石斛中性多糖在制備胃黏膜修復(fù)藥物上的應(yīng)用。

22、本發(fā)明第四方面提供第一方面所述的球花石斛中性多糖在制備用于降低非甾體抗炎藥副作用的保護(hù)劑上的應(yīng)用。

23、相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

24、本發(fā)明首次從球花石斛中提取出一種球花石斛中性多糖，并對該多糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)、分子量以及成分分析。此外，本發(fā)明還通過體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，該多糖可以極顯著提高乙醇損傷ges-1細(xì)胞的活力(p<0.01)，且顯著降低乙醇損傷的ges-1細(xì)胞中的ros及ges-1細(xì)胞中炎性因子(tnf-α、il-8和il-1β)的水平(p<0.05)，從而顯著減少由乙醇造成的ges-1細(xì)胞氧化損傷，因此該球花石斛中性多糖在開發(fā)成保護(hù)胃粘膜損傷的藥物或者降低非甾體抗炎藥副作用的保護(hù)劑具有極好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種球花石斛中性多糖，其特征在于，所述球花石斛中性多糖具有如下結(jié)構(gòu)：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述球花石斛中性多糖由葡萄糖和甘露糖以摩爾比0.415：0.585組成，分子量為：mw＝9.18×103da。

3.權(quán)利要求1或2所述的球花石斛中性多糖的制備方法，其特征在于，包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟s1包括：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟s1-2包括：

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟s1-3中，采用sevage試劑去除提取液中的蛋白質(zhì)。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟s1-4中，乙醇在體系中的體積占比不低于90％。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟s2中，將粗多糖通過陰離子交換樹脂進(jìn)行純化，是采用deae-纖維素陰離子交換樹脂，調(diào)整流速為15ml/min，分別采用去離子水和不同濃度的nacl液洗脫，收集去離子水洗脫液，濃縮；和/或，

9.權(quán)利要求1或2所述的球花石斛中性多糖在制備胃黏膜修復(fù)藥物上的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求1或2所述的球花石斛中性多糖在制備用于降低非甾體抗炎藥副作用的保護(hù)劑上的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種球花石斛中性多糖、制備方法及應(yīng)用，所述球花石斛中性多糖具有如下結(jié)構(gòu)：本發(fā)明首次從球花石斛中提取出一種球花石斛中性多糖，并對該多糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)、分子量以及成分分析。此外，本發(fā)明還通過體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，該多糖可以極顯著提高乙醇損傷GES?1細(xì)胞的活力(p<0.01)，且顯著降低乙醇損傷的GES?1細(xì)胞中的ROS及GES?1細(xì)胞中炎性因子(TNF?α、IL?8和IL?1β)的水平(p<0.05)，從而顯著減少由乙醇造成的GES?1細(xì)胞氧化損傷，因此該球花石斛中性多糖在開發(fā)成保護(hù)胃粘膜損傷的藥物或者降低非甾體抗炎藥副作用的保護(hù)劑具有極好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：范益軍,羅傲雪,王剛,馬杰,李雪冰,李婷,許琳龍,王慧,何思雨,劉昊霖,吳君蘭,曾樂,朱良杰
受保護(hù)的技術(shù)使用者：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19