技術領域：
本發(fā)明涉及到工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備，直接涉及一種1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備。
技術背景：
自本世紀初，生物發(fā)酵生產1,3-丙二醇成為國內研究的熱門課題，清華大學、北京化工大學、大連理工大學，撫順石化研究院等多家科研機構，在實驗室均取得了重大突破，掌握了核心技術，制備培養(yǎng)基的材料多數采用的分析純，其價格昂貴，不適于工業(yè)發(fā)酵，研究一種1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法是十分重要的。
技術實現要素：
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本發(fā)明的目的就是研究一種合理的1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現的：考慮到工業(yè)培養(yǎng)基的原料與實驗室用原料的差異，通氣、溫度、攪拌等發(fā)酵條件的不同和微生物不同時期生長繁殖及代謝狀態(tài)的不同，研究設計了初始培養(yǎng)基的配方和補料液的配方，改進了補料的流加方式，并進行了多次對比優(yōu)選，發(fā)明了一種1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法。
用計量泵計量自來水100份(wt%)、甘油2.2份(wt%)，加入發(fā)酵罐中，用電子稱計量葡萄糖0.1份(wt%)，酵母粉0.5份(wt%)，硫酸銨0.5份(wt%)，磷酸氫二鉀0.3份(wt%)和其他微量元素，添加10mg/l抗生素，依次裝入發(fā)酵罐中。然后開啟發(fā)酵罐攪拌器電機，轉速80r/min，攪拌10分鐘。停止攪拌通入飽和蒸汽，保持罐內壓力0.2mpa，溫度116℃，滅菌時間20分鐘。冷卻到37℃以后，將搖瓶培養(yǎng)的菌種接入到發(fā)酵罐中，發(fā)酵6-8小時，進入對數生長期，此階段微生物生長繁殖達到高峰，微生物細胞分解出大量蛋白酶，分解甘油被微生物吸收，而轉化為1,3-丙二醇，底物濃度不斷降低，需進行補料，補料液的配比為：自來水：甘油：葡萄糖：酵母粉：磷酸鹽=15:70:2:4:0.2，提高酵母粉和磷酸鹽的比例，意義在于增加培養(yǎng)基的n和p的營養(yǎng)成分，使微生物具有較強的生命力和產物的合成能力。補料采用plc自動控制連續(xù)流加方式，保持培養(yǎng)基甘油濃度10-20g/l,以保證微生物在合理濃度的培養(yǎng)基生長和代謝。
附圖說明：
附圖1示出了本發(fā)明一種1，3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法的示意圖。
具體實施方式：
附圖1示出了本發(fā)明一種1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法的示意圖，下面結合附圖1做進一步說明。
根據權利要求1所述一種1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，具有計量加料1，攪拌溶解2，實罐滅菌3和補料4。
計量加料1是用計量泵計量自來水100份(wt%)、甘油2.2份(wt%)、打入已進行空罐滅菌的發(fā)酵罐；用電子天平稱量葡萄糖0.4份(wt%)、硫酸銨0.5份(wt%)、酵母粉0.5份(wt%)，依次加入發(fā)酵罐內，上述原料均可采用工業(yè)級產品。
待計量加料1全部完成后，開啟發(fā)酵罐攪拌器電動機進行攪拌溶解2步驟，攪拌轉速80r/min,攪拌時間10分鐘。
待培養(yǎng)基中的固體原料完全溶解后，進行實罐滅菌3，開啟發(fā)酵罐的蒸汽進口閥，關閉液面以下所有閥門，并開啟液面以上的所有通氣閥，通入飽和蒸汽，保持罐壓0.2mpa，溫度116℃，滅菌20分鐘。
實罐滅菌3結束后，罐內溫度冷卻至37℃以下，將搖瓶培養(yǎng)的菌種移種至發(fā)酵罐內，先后開啟攪拌，通風、ph調節(jié)、溫度調節(jié)等，發(fā)酵6-8小時，微生物生長繁殖處于對數生長期，開始補料4，補料液的配比：自來水15份(wt%)，甘油70份(wt%)、葡萄糖2份(wt%)，酵母粉4份(wt%)，磷酸鹽0.2份(wt%)，補料采用plc自動控制連續(xù)流加方式，保持底物濃度10-20g/l。
本發(fā)明的主要特點是1,3-丙二醇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基所采用的原料為工業(yè)級產品，提高了主要原料甘油的配比，增加了多種微量元素和抗生素，使得培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分更加豐富，并對菌種進行了適應性馴化，增強了1,3-丙二醇的代謝途徑，采用了plc自動控制連續(xù)流加方式，保持了培養(yǎng)基底物合理的濃度，提高了1,3-丙二醇的產量和甘油轉化率，發(fā)酵水平達到79g/l,轉化率達到70%，接近和超過了實驗室水平。