本發(fā)明屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用展青霉菌發(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
灰黃霉素是青霉菌發(fā)酵液的菌絲體中分離得到的一種含有氯的次級(jí)代謝產(chǎn)物。它是屬于非多烯類的抗真菌抗生素。灰黃霉素于1958年開始用于醫(yī)學(xué)臨床，主要用于治療皮膚淺層絲狀真菌感染，尤其是對(duì)小芽孢菌、紅色癬菌具有良好的抑制效果。在農(nóng)業(yè)上，灰黃霉素也被用于真菌病害防治。
目前，國(guó)內(nèi)采用發(fā)酵模式生產(chǎn)灰黃霉素，其存在的主要問(wèn)題有以下幾點(diǎn)：
1 工業(yè)化大生產(chǎn)發(fā)酵水平較低，其發(fā)酵水平維持在25000ug/ml左右。
2 國(guó)內(nèi)缺少關(guān)于規(guī)?；笊a(chǎn)春雷霉素完整的發(fā)酵工藝文獻(xiàn)報(bào)道，并且相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道以試驗(yàn)為主，不能夠?yàn)榇笊a(chǎn)模式提供有效地技術(shù)支持。
3 春雷霉素大生產(chǎn)發(fā)酵周期長(zhǎng)，超過(guò)了260h左右，能耗比較高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種可有效提高發(fā)酵單位，降低能耗，縮短發(fā)酵周期，同時(shí)最大限度的降低原輔料對(duì)發(fā)酵單位的影響，降低生產(chǎn)成本，且原輔料來(lái)源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)灰黃霉素穩(wěn)定、高效生產(chǎn)的利用展青霉菌發(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素的培養(yǎng)基。
本發(fā)明的另一目的是提供利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)灰黃霉素的培養(yǎng)方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：
一種利用展青霉菌發(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素的培養(yǎng)基，其特征在于包括種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其中
所述種子培養(yǎng)基的組成為：
葛根粉7～11g/L、大力士甜高粱12～16g/L、葡萄糖5～9g/L、白酒糟6～10g/L、玉米漿11～15ml/L、魚粉10～14g/L、棉籽油8～12ml/L、硫酸銨0.4～0.8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/L；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：
葛根粉9～14g/L、大力士甜高粱14～18g/L、葡萄糖7～11g/L、白酒糟8～12g/L、玉米漿13～17ml/L、魚粉12～16g/L、棉籽油11～15ml/L、硫酸銨0.5～0.9g/L、輕質(zhì)碳酸鈣2～6g/L；磷酸二氫鉀0.05～0.09g/L、硫酸鎂0.03～0.07g/L、硫酸亞鐵0.006～0.01g/L、氯化鈉0.04～0.08g/L。
一種利用上述培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素的培養(yǎng)方法，其特征在于工藝步驟為：
1） 種子培養(yǎng)：首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至20～25℃，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)，至菌體濃度32～34%、培養(yǎng)時(shí)間40～45h移種；
2） 發(fā)酵培養(yǎng)：先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20～25℃，并用無(wú)菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，至菌體濃度35～39%、發(fā)酵周期不超過(guò)250h，化學(xué)效價(jià)＞30000ug/ml時(shí)終止發(fā)酵。
所述種子培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量要求為：氨基氮20～40mg/L、還原糖2～4g/100ml；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量要求為：氨基氮40～60mg/L、還原糖4～6g/100ml。
所述培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為：菌體濃度20～30%；鏡檢無(wú)雜菌。
所述種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：30～50m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速60～80r/min。
所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6～7，
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在100～120r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7，
f 空氣流量：200～300m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
所述發(fā)酵過(guò)程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)糖、補(bǔ)水、補(bǔ)硫酸銨和pH控制，其中
a 補(bǔ)糖工藝控制：
發(fā)酵100～200h，當(dāng)還原糖含量＜2g/100ml時(shí)，補(bǔ)入糊精，控制發(fā)酵液中還原糖含量為2.0～2.5g/100ml，
發(fā)酵201 h～發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)還原糖含量＜1.5g/100ml，補(bǔ)入糊精，控制發(fā)酵液中還原糖含量為1.5～2.0g/100ml；
b補(bǔ)水工藝控制：
發(fā)酵前80h不用進(jìn)行補(bǔ)水，
發(fā)酵81～200h，當(dāng)菌體濃度高于45%時(shí)，加入滅菌水，控制發(fā)酵液菌體濃度在40～45%，每隔6～8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵201h～發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于40%時(shí)，加入滅菌水，控制發(fā)酵液菌體濃度在35～40%，每隔6～8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度；
c 發(fā)酵過(guò)程pH控制：
發(fā)酵前80h，pH不進(jìn)行控制，
發(fā)酵81～200h，當(dāng)pH＜6.0，采用流加法加入10～20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6～7，當(dāng)pH＞7，采用流加法加入30%的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH至6～7；
d 補(bǔ)硫酸銨：
在發(fā)酵120h和200h時(shí)補(bǔ)入10%的硫酸銨溶液，其用量控制在發(fā)酵液體積的0.01～0.03%。
本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在：
1 本發(fā)明確認(rèn)了展青霉菌發(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素的種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源和最佳配伍比例。
2 本發(fā)明對(duì)種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)的工藝進(jìn)行了詳細(xì)的闡述，確認(rèn)了灰黃霉素最佳的發(fā)酵工藝和控制參數(shù)。通過(guò)本發(fā)明發(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素，其發(fā)酵單位達(dá)到30000ug/ml以上，同國(guó)內(nèi)技術(shù)相比，發(fā)酵單位提高了20%以上；發(fā)酵周期控制在250h以內(nèi)，降低了發(fā)酵能耗。
3 本發(fā)明培養(yǎng)基中加入白酒糟，因其含有豐富的氨基酸和促生長(zhǎng)因子，可以部分替代魚粉，降低了生產(chǎn)成本。
4 本發(fā)明培養(yǎng)基中加入葛根粉代替淀粉，降低了發(fā)酵液的黏度，避免了高溫滅菌過(guò)程中出現(xiàn)的糊化現(xiàn)象，減少了毒性物質(zhì)的釋放；葛根粉中的碳水化合物含量達(dá)到了88%，能夠滿足灰黃霉素生物合成中所需的乙酸用量。
5 本發(fā)明適用于工業(yè)化規(guī)?；l(fā)酵生產(chǎn)灰黃霉素。
具體實(shí)施方法
下面用實(shí)例予以說(shuō)明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。
下述實(shí)施例的菌種選用：生產(chǎn)使用的菌種來(lái)源為展青霉菌母瓶發(fā)酵液。母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為：菌體濃度20～30%；鏡檢無(wú)雜菌。
葛根淀粉來(lái)源：將塊狀葛根送入碎解機(jī)中碎解。碎解機(jī)的篩網(wǎng)孔徑選取2-3毫米規(guī)格即可。
白酒糟：白酒發(fā)酵的副產(chǎn)物，蛋白含量應(yīng)＞14%，水分含量＜1.5%。
實(shí)施例1
種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
葛根粉70kg、大力士甜高粱120kg、葡萄糖50kg、白酒糟60 kg、玉米漿110L、魚粉100 kg、棉籽油80L、硫酸銨4kg、輕質(zhì)碳酸鈣10kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至20℃，并用無(wú)菌空氣保壓，培養(yǎng)基滅菌后質(zhì)量為：氨基氮20mg/L、還原糖2g/100ml。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液按照30L的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：30m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速60r/min。至菌體濃度32%、培養(yǎng)時(shí)間40h移種。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
葛根粉900kg、大力士甜高粱1400kg、葡萄糖700kg、白酒糟800 kg、玉米漿1300L、魚粉1200kg、棉籽油1100L、硫酸銨50kg、輕質(zhì)碳酸鈣200kg；磷酸二氫鉀5kg、硫酸鎂3kg、硫酸亞鐵0.6kg、氯化鈉4kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20℃，并用無(wú)菌空氣保壓，發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量為：氨基氮40mg/L、還原糖4g/100ml。然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6.9；
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在100r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7，
f 空氣流量：200m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度35%、發(fā)酵周期不超過(guò)241h，化學(xué)效價(jià)30127ug/ml。實(shí)施例2
種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
葛根粉80kg、大力士甜高粱130kg、葡萄糖60kg、白酒糟70 kg、玉米漿120L、魚粉110 kg、棉籽油90L、硫酸銨5kg、輕質(zhì)碳酸鈣20kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至21℃，并用無(wú)菌空氣保壓，培養(yǎng)基滅菌后質(zhì)量為：氨基氮25mg/L、還原糖2.5g/100ml。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液按照32L的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：35m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速65r/min。至菌體濃度32.5%、培養(yǎng)時(shí)間41h移種。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
葛根粉1000kg、大力士甜高粱1500kg、葡萄糖800kg、白酒糟900 kg、玉米漿1400L、魚粉1300kg、棉籽油1200L、硫酸銨60kg、輕質(zhì)碳酸鈣300kg；磷酸二氫鉀6kg、硫酸鎂4kg、硫酸亞鐵0.7kg、氯化鈉5kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至21℃，并用無(wú)菌空氣保壓，發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量為：氨基氮45mg/L、還原糖4.5g/100ml。然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6.7；
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在105r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7；
f 空氣流量：220m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度36%、發(fā)酵周期不超過(guò)242h，化學(xué)效價(jià)30291ug/ml。
實(shí)施例3
種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
葛根粉90kg、大力士甜高粱140kg、葡萄糖70kg、白酒糟80 kg、玉米漿130L、魚粉120 kg、棉籽油100L、硫酸銨6kg、輕質(zhì)碳酸鈣30kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至22℃，并用無(wú)菌空氣保壓，培養(yǎng)基滅菌后質(zhì)量為：氨基氮30mg/L、還原糖3g/100ml。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液按照35L的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：40m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速70r/min。至菌體濃度33%、培養(yǎng)時(shí)間43h移種。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
葛根粉1100kg、大力士甜高粱1600kg、葡萄糖900kg、白酒糟1000 kg、玉米漿1500L、魚粉1400kg、棉籽油1300L、硫酸銨70kg、輕質(zhì)碳酸鈣400kg；磷酸二氫鉀7kg、硫酸鎂5kg、硫酸亞鐵0.8kg、氯化鈉6kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至23℃，并用無(wú)菌空氣保壓，發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量為：氨基氮50mg/L、還原糖5g/100ml。然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6.5，
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在110r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7，
f 空氣流量：250m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度37%、發(fā)酵周期不超過(guò)245h，化學(xué)效價(jià)30374ug/ml。
實(shí)施例4
種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
葛根粉100kg、大力士甜高粱150kg、葡萄糖80kg、白酒糟90 kg、玉米漿140L、魚粉130 kg、棉籽油110L、硫酸銨7kg、輕質(zhì)碳酸鈣40kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至24℃，并用無(wú)菌空氣保壓，培養(yǎng)基滅菌后質(zhì)量為：氨基氮35mg/L、還原糖3.5g/100ml。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液按照38L的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：45m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速75r/min。至菌體濃度33.5%、培養(yǎng)時(shí)間44h移種。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
葛根粉1200kg、大力士甜高粱1700kg、葡萄糖1000kg、白酒糟1100 kg、玉米漿1600L、魚粉1500kg、棉籽油1400L、硫酸銨80kg、輕質(zhì)碳酸鈣500kg；磷酸二氫鉀8kg、硫酸鎂6kg、硫酸亞鐵0.9kg、氯化鈉7kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至24℃，并用無(wú)菌空氣保壓，發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量為：氨基氮55mg/L、還原糖5.5g/100ml。然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6.3，
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在115r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7，
f 空氣流量：280m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度37%、發(fā)酵周期不超過(guò)245h，化學(xué)效價(jià)30304ug/ml。實(shí)施例5
種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
葛根粉140kg、大力士甜高粱160kg、葡萄糖90kg、白酒糟100kg、玉米漿150L、魚粉140kg、棉籽油120L、硫酸銨8kg、輕質(zhì)碳酸鈣50kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25℃，并用無(wú)菌空氣保壓，培養(yǎng)基滅菌后質(zhì)量為：氨基氮40mg/L、還原糖4g/100ml。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液按照40L的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：50m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速80r/min。至菌體濃度34%、培養(yǎng)時(shí)間45h移種。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
葛根粉1300kg、大力士甜高粱1800kg、葡萄糖1100kg、白酒糟1200 kg、玉米漿1700L、魚粉1600kg、棉籽油1500L、硫酸銨90kg、輕質(zhì)碳酸鈣600kg；磷酸二氫鉀9kg、硫酸鎂7kg、硫酸亞鐵1kg、氯化鈉8kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至25℃，并用無(wú)菌空氣保壓，發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量為：氨基氮60mg/L、還原糖6g/100ml。然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6.1，
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在120r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7，
f 空氣流量：300m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度37%、發(fā)酵周期不超過(guò)245h，化學(xué)效價(jià)30127ug/ml。
對(duì)比實(shí)施例（培養(yǎng)工藝及控制參數(shù)依據(jù)實(shí)施例3）
種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
大米粉90kg、葡萄糖70kg、花生餅粉80 kg、玉米漿130L、黃豆餅粉120 kg、硫酸銨6kg、輕質(zhì)碳酸鈣30kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至22℃，并用無(wú)菌空氣保壓，培養(yǎng)基滅菌后質(zhì)量為：氨基氮18mg/L、還原糖2g/100ml。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的展青霉菌母瓶發(fā)酵液按照35L的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：40m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速70r/min。至菌體濃度30%、培養(yǎng)時(shí)間44h移種。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
大米粉1100kg、葡萄糖900kg、花生餅粉800kg、玉米漿1200L、黃豆餅粉1000kg、硝酸鈉50kg、輕質(zhì)碳酸鈣400kg；磷酸二氫鉀7kg、硫酸鎂5kg、硫酸亞鐵0.8kg、氯化鈉6kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至23℃，并用無(wú)菌空氣保壓，發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量為：氨基氮37mg/L、還原糖3.8g/100ml。然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6.5，
b 溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在110r/min，
d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa，
e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6～7，
f 空氣流量：250m3/h，
h 溶氧控制：
發(fā)酵前90h內(nèi)，不控制溶氧，
91～160h，溶氧控制在40%以上，
161～發(fā)酵結(jié)束：溶氧控制在30%以上。
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度35%、發(fā)酵周期不超過(guò)264h，化學(xué)效價(jià)24761ug/ml。
上述實(shí)施例1-5中，發(fā)酵過(guò)程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)糖、補(bǔ)水、補(bǔ)硫酸銨和pH控制，其中
a 補(bǔ)糖工藝控制：
發(fā)酵100～200h，當(dāng)還原糖含量＜2g/100ml時(shí)，補(bǔ)入糊精，控制發(fā)酵液中還原糖含量為2.0～2.5g/100ml，
發(fā)酵201 h～發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)還原糖含量＜1.5g/100ml，補(bǔ)入糊精，控制發(fā)酵液中還原糖含量為1.5～2.0g/100ml；
b補(bǔ)水工藝控制：
發(fā)酵前80h不用進(jìn)行補(bǔ)水，
發(fā)酵81～200h，當(dāng)菌體濃度高于45%時(shí)，加入滅菌水，控制發(fā)酵液菌體濃度在40～45%，每隔6～8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵201h～發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于40%時(shí)，加入滅菌水，控制發(fā)酵液菌體濃度在35～40%，每隔6～8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度；
c 發(fā)酵過(guò)程pH控制：
發(fā)酵前80h，pH不進(jìn)行控制，
發(fā)酵81～200h，當(dāng)pH＜6.0，采用流加法加入10～20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6～7，當(dāng)pH＞7，采用流加法加入30%的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH至6～7；
d 補(bǔ)硫酸銨：
在發(fā)酵120h和200h時(shí)補(bǔ)入10%的硫酸銨溶液，其用量控制在發(fā)酵液體積的0.01～0.03%。