本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
玉米是云南省分布最廣，種植面積最大的糧食作物，包括飼料玉米、甜玉米、糯玉米等，分布極為廣泛，在云南可分為四個種植區(qū):滇西北冷涼玉米區(qū)、滇中溫暖玉米區(qū)、滇南暖熱玉米區(qū)、滇東北溫涼玉米區(qū)。近年來，甜玉米在我省種植面積逐漸擴(kuò)大，現(xiàn)成為高原特色的重點(diǎn)發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)。我國玉米栽培范圍廣泛，在不同玉米生態(tài)區(qū)，由于各地種植的品種、栽培條件、氣象條件等各種因素的影響，玉米病害發(fā)生情況也不完全相同。目前玉米生產(chǎn)中的大、小斑病、絲黑穗病已通過抗病品種的推廣得到有效控制，玉米銹病在全世界各玉米主產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。云南省玉米上發(fā)生的病害主要以普通銹病為主，分布范圍廣，此外，玉米小斑病、大斑病也有一定程度的發(fā)生，當(dāng)前控制玉米葉部病害多以生態(tài)控制和藥劑防治為主：選育和種植抗病品種；科學(xué)管理、合理密植，適當(dāng)早播，配方施肥，實(shí)施健身栽培；選用包衣種子；使用化學(xué)藥劑如多菌靈、百菌清、代森鋅等。
水稻細(xì)菌性條斑病(簡稱條斑病)，病原菌為xanthomonasoryzaepv.oryzicola，屬黃單胞菌屬細(xì)菌，其流行給全世界水稻生產(chǎn)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，達(dá)30％，尤其在秈稻上危害更重。目前水稻條斑病迅速蔓延至全國各稻區(qū)及非洲一些國家，對品種和環(huán)境的適應(yīng)能力更強(qiáng)，在云南德宏、臨滄水稻主產(chǎn)區(qū)，危害已超過水稻白葉枯病。水稻條斑病的流行給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，迫使人們不斷加大對其防治研究的投入。但病害防控仍面臨許多問題：生產(chǎn)上缺乏垂直抗病品種。我國僅少數(shù)水稻品種對條斑病表現(xiàn)數(shù)量抗性，云南不足10％水稻品種對條斑病菌表現(xiàn)抗病性，因此，目前生產(chǎn)上暫時無法利用抗病品種來控制病害的流行；水稻條斑病菌抗藥性菌株的出現(xiàn)，使防治極其困難。研究證實(shí)云南條斑病菌對鏈霉素表現(xiàn)出不同程度的抗藥性，從而加速了水稻條斑病在田間的爆發(fā)流行。目前，水稻條斑病防治中，還是利用防治水稻白葉枯病的殺菌劑，主要有噻枯唑及其復(fù)配劑、硫酸鏈霉素、噻唑鋅、浸種靈等。
應(yīng)用化學(xué)藥劑防治植物病害在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用，然而化學(xué)藥劑的大量使用引起的藥物殘留、環(huán)境污染和抗藥性積累等問題已經(jīng)不符合農(nóng)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的要求，生物防治因其低成本、環(huán)境友好和無藥物殘留等特點(diǎn)已成為當(dāng)前國內(nèi)外防治植物土傳病害的研究熱點(diǎn)，將逐步取代傳統(tǒng)的化學(xué)防治手段，具有較為廣闊的應(yīng)用前景。生物防治是指利用一種或多種微生物來抑制病原菌生命活力和繁殖能力的方法。生物防治植物病害的常見機(jī)制有：改善土壤理化性質(zhì)及營養(yǎng)狀況促進(jìn)植物生長，提高植物健康水平，增強(qiáng)寄主植物的抗病能力；利用生防細(xì)菌、鏈霉菌及放線菌等拮抗微生物的寄生、拮抗作用，及其與病原菌的營養(yǎng)物質(zhì)、生態(tài)位的競爭效應(yīng)抑制和消滅病原菌；誘導(dǎo)寄主植物產(chǎn)生對病原菌的系統(tǒng)抗性。
植物根際促生菌(plantgrowthpromotingrhizobacteria，pgpr)是指自由生活在土壤或附生于植物根系的一類可促進(jìn)植物生長及其對礦質(zhì)營養(yǎng)的吸收和利用，并能抑制有害生物的有益菌類。目前已有多種pgpr菌株，其中包括芽孢桿菌屬(bacillus)和假單胞菌屬(pseudomonas)等。植物根際促生菌促進(jìn)植物生長的機(jī)理較多，大體上主要包括直接和間接2個方面對植物起作用：pgpr可合成某些對植物生長發(fā)育有直接作用的物質(zhì)(如生長素等)或改變土壤中某些無效元素的形態(tài)，使之有效化而利于植物吸收(如固氮、解磷等)；間接作用指的是某些植物根際促生菌抑制或減輕某些植物病害對植物生長發(fā)育和產(chǎn)量的不良影響。貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)是2005年由ruiz-garcía等新命名的，后被確定為解淀粉芽孢桿菌的后期異型體，為革蘭氏陽性、桿狀、菌落米白色，表面褶皺，不透明，好氧，化能異養(yǎng)型細(xì)菌。國內(nèi)已發(fā)現(xiàn)該菌對棉花黃萎病(大麗輪枝菌verticilliumdahliaekleb)、白菜黑斑病(蕓薹鏈格孢菌alternariabrassicae)等有拮抗作用，有研究者利用該菌作為生物制劑并用于防治植物真菌和細(xì)菌性病害。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5及其應(yīng)用，本發(fā)明提供的貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5從云南省文山州硯山縣江那鎮(zhèn)三七植株根際土中分離得到，該貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5可制成水劑或包衣劑，作用于玉米、水稻等農(nóng)作物上，用于防治水稻細(xì)菌性條斑病、水稻白葉枯病以及對玉米、水稻有促生作用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，達(dá)到上述效果，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5，其分類命名為貝萊斯芽孢桿菌bacillusvelezensis，所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5于2016年12月13日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記入冊，保藏編號為:cgmccno.13445。
一種貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5的應(yīng)用，其特征在于：將所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5制備為水劑或包衣劑，用于防治水稻細(xì)菌性條斑病、水稻白葉枯病，并且對玉米、水稻具有促生作用。
優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5水劑制備方法包括如下步驟：
(1)菌種培養(yǎng)
a.試管種培養(yǎng)：將na培養(yǎng)基121℃滅菌30min后倒入9cm的平板中制成na培養(yǎng)基底板，接種貝萊斯芽孢桿菌jn5，28℃培養(yǎng)24-48h；
所述na培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，瓊脂粉17g，用蒸餾水補(bǔ)足到1000ml；
b.菌種搖床擴(kuò)大培養(yǎng)：將平板種子接種茄瓶斜面na培養(yǎng)基上，28℃下培養(yǎng)24-48h，獲得茄瓶種子；
(2)發(fā)酵
a.種子懸浮液的制備：用滅菌水洗下茄瓶斜面上的菌落，得到種子懸浮液；
b.接種：將種子懸浮液通過接種口，利用壓差接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基；
所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的配方及處理方法為：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸鎂1.5％，磷酸氫二鉀1.5％，甘油10％，用蒸餾水補(bǔ)足到1000ml，滅菌前ph8.0；
c.液體發(fā)酵：發(fā)酵罐培養(yǎng)基在接種后，培養(yǎng)36-48小時。發(fā)酵罐的罐溫為25-32℃，罐壓為0.5kg/cm2，罐內(nèi)攪拌速度為200r/min。在接種升壓過程中，罐壓不超過1.5kg/cm2。
優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5包衣劑制備方法包括如下步驟：
聚乙烯醇4g溶于96mlddh2o中制備成4％聚乙烯醇溶液；殼聚糖4g溶于96mlddh2o中制備成4％殼聚糖溶液；黃原膠2g溶于98mlddh2o中制備成2％黃原膠溶液。按4％聚乙烯醇：4％殼聚糖：2％黃原膠＝4:1:1的體積配成混合溶液，再按混合溶液：生防菌懸液＝100:1制備成包衣劑。
優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5水劑的使用方法為噴霧、灌根、浸種。
本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5，可制成水劑或包衣劑，作用于玉米、水稻等農(nóng)作物上，通過產(chǎn)生次生
4代謝產(chǎn)物：蛋白酶、生長素、赤霉素、豐源素、伊枯草菌素等抗菌相關(guān)物質(zhì)來降解病原菌的細(xì)胞壁，對病原菌的孢子萌發(fā)和芽管伸長都有一定的抑制作用，用于防治水稻細(xì)菌性條斑病、水稻白葉枯病；其產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物對作物生長、開花結(jié)實(shí)具有顯著地促進(jìn)作用；并且使用安全無殘留，有助于減少化學(xué)藥劑在農(nóng)產(chǎn)品中的使用量和殘留量，降低生產(chǎn)成本，實(shí)用性強(qiáng)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明提供的貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5綜合性狀較好，具有防病、促生作用，此外，還對一些三七根腐病和白菜根腫病等都有較好的抑制作用。
具體實(shí)施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
一種貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5，其分類命名為貝萊斯芽孢桿菌bacillusvelezensis，所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5于2016年12月13日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記入冊，保藏編號為:cgmccno.13445。
一種貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5的應(yīng)用，其特征在于：將所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5制備為水劑或包衣劑，用于防治水稻細(xì)菌性條斑病、水稻白葉枯病，并且對玉米、水稻具有促生作用。
所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5制備為水劑，其制備方法包括如下步驟：
(1)菌種培養(yǎng)
a.試管種培養(yǎng)：將na培養(yǎng)基121℃滅菌30min后倒入9cm的平板中制成na培養(yǎng)基底板，接種貝萊斯芽孢桿菌jn5，28℃培養(yǎng)24-48h；
所述na培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，瓊脂粉17g，用蒸餾水補(bǔ)足到1000ml；
b.菌種搖床擴(kuò)大培養(yǎng)：將平板種子接種茄瓶斜面na培養(yǎng)基上，28℃下培養(yǎng)24-48h，獲得茄瓶種子；
(2)發(fā)酵
a.種子懸浮液的制備：用滅菌水洗下茄瓶斜面上的菌落，得到種子懸浮液；
b.接種：將種子懸浮液通過接種口，利用壓差接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基；
所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的配方及處理方法為：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸鎂1.5％，磷酸氫二鉀1.5％，甘油10％，用蒸餾水補(bǔ)足到1000ml，滅菌前ph8.0；
c.液體發(fā)酵：發(fā)酵罐培養(yǎng)基在接種后，培養(yǎng)36-48小時。發(fā)酵罐的罐溫為25-32℃，罐壓為0.5kg/cm2，罐內(nèi)攪拌速度為200r/min。在接種升壓過程中，罐壓不超過1.5kg/cm2。
優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5包衣劑制備方法包括如下步驟：
聚乙烯醇4g溶于96mlddh2o中制備成4％聚乙烯醇溶液；殼聚糖4g溶于96mlddh2o中制備成4％殼聚糖溶液；黃原膠2g溶于98mlddh2o中制備成2％黃原膠溶液。按4％聚乙烯醇：4％殼聚糖：2％黃原膠＝4:1:1的體積配成混合溶液，再按混合溶液：生防菌懸液＝100:1制備成包衣劑。
所述貝萊斯芽孢桿菌菌株jn5水劑的使用方法為噴霧、灌根、浸種。
本發(fā)明所述的貝萊斯芽孢桿菌jn5菌株，具有以下形態(tài)和生理生化特征：
貝萊斯芽孢桿菌jn5為革蘭氏陽性、有芽孢的桿狀、菌落米白色，邊緣不光滑且不完整，表面有褶皺，不透明，最適生長溫度為28℃。
貝萊斯芽孢桿菌jn5菌株以biologgiii板鑒定具有以下生理生化特征：能利用糊精、d-麥芽糖、d-海藻糖、d-纖維二糖、龍膽二糖、蔗糖、d-松二糖、水蘇糖、蜜三糖、α-d-乳糖、β-甲酰-d-葡糖苷、d-水楊苷、n-乙酰-d-葡糖胺、n-乙酰-β-d-甘露糖胺、n-乙酰-d-半乳糖胺、n-乙酰神經(jīng)氨酸、d-甘露糖、d-阿拉伯醇、肌苷、乳酸鈉、梭鏈孢酸、d-絲氨酸、d-山梨醇、d-甘露醇、d-阿拉伯醇、甘油、d-天冬氨酸、利福霉素sv、明膠、l-丙氨酸、l-精氨酸、l-天冬氨酸、l-谷氨酸、l-組胺、l-焦谷氨酸、l-絲氨酸、d-葡糖酸、奎寧酸、l-乳酸、檸檬酸、α-酮-戊二酸、l-蘋果酸、溴-丁二酸、氯化鋰、亞碲酸鉀、吐溫40、乙酰乙酸、氨曲南、丁酸鈉等。
實(shí)施例1
貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5水劑的制備
(1)菌種培養(yǎng)
a.試管種培養(yǎng)(以下均為重量百分比)
將na培養(yǎng)基(蛋白胨5g，蔗糖10g，酵母粉1g，牛肉浸膏3g，瓊脂17-20g)放入試管中，用蒸餾水補(bǔ)足到1000ml，滅菌，做成平板，接種貝萊斯芽孢桿菌jn5菌株，28℃培養(yǎng)48h。
b.菌種搖床擴(kuò)大培養(yǎng)
將平板種子接種茄瓶斜面na培養(yǎng)基(培養(yǎng)基配方與上述步驟a相同)上，26℃下培養(yǎng)48h，獲得茄瓶種子。
(2)發(fā)酵
具體發(fā)酵生產(chǎn)過程如下：
a.種子懸浮液的制備：用滅菌水洗下茄瓶斜面上的菌落，得到種子懸浮液；
b.接種：將種子懸浮液通過接種口，利用壓差接入發(fā)酵罐(發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方為：蛋白胨5％，葡萄糖7％，酵母膏1％，硫酸鎂1.5％，磷酸氫二鉀1.5％，甘油10％，滅菌前ph8.0；發(fā)酵罐的罐溫為25-32℃，罐壓為0.5kg/cm2，罐內(nèi)攪拌速度為200r/min)，注意避免污染；升壓時罐壓不能超過1.5kg/cm2；
c.液體發(fā)酵：
發(fā)酵罐在接種后，培養(yǎng)36小時，至菌數(shù)不再增加，立即放罐，經(jīng)平板計(jì)數(shù)測定含菌量，含菌量達(dá)180億cfu/ml；
本制劑可通過噴霧或灌根方式施用于作物生長前期和發(fā)病階段的葉部或根部作為病害防控和增產(chǎn)措施，方法如下：作物生長前期或在病害始發(fā)期，采用生物制劑灌根或噴霧于作物根部或葉部以控病和促生作用。對農(nóng)作物發(fā)生嚴(yán)重地區(qū)可在作物生長過程中追施2至3次。
實(shí)施例2
貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5包衣劑的制備
(1)制備液體生防菌劑：將生防菌劃線培養(yǎng)于實(shí)例1所述na培養(yǎng)基，28℃倒置培養(yǎng)48h，挑取單菌落接種于na液體培養(yǎng)基中，28℃160rpm振蕩培養(yǎng)48h，于紫外分光光度計(jì)下調(diào)節(jié)菌懸液od600nm＝0.5，即菌懸液濃度相當(dāng)于1x108cfu/ml以備用。
(2)包衣劑配方：聚乙烯醇4g溶于96mlddh2o中制備成4％聚乙烯醇溶液；殼聚糖4g溶于96mlddh2o中制備成4％殼聚糖溶液；黃原膠2g溶于98mlddh2o中制備成2％黃原膠溶液。按4％聚乙烯醇：4％殼聚糖：2％黃原膠＝4:1:1的體積配成混合溶液，再按混合溶液：生防菌懸液＝100:1制備成包衣劑。
實(shí)施例3
貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5對水稻細(xì)菌性條斑病的離體抑菌試驗(yàn)
所用培養(yǎng)基如下：
na培養(yǎng)基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，蔗糖10g，瓊脂17g，水1000ml，ph7.0)；
pda培養(yǎng)基(馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，水1000ml,自然ph值)。
貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5的菌劑水稻細(xì)菌性條斑病及其它病原菌的離體抑菌試驗(yàn)
供試病原菌
包括水稻細(xì)菌性條斑病(xanthomonasoryzaepv.oryzicola)、水稻白葉枯病菌(xanthomonasoryzaepv.oryzae)、魔芋軟腐果膠桿菌pectobacteriumcarotovorasubsp.carotovora,pcc.)、腐皮鐮刀菌(fusariumsolani)、煙草疫霉菌(phytophthoraparasiticavar.nicotianae)等，以上病原菌由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植保學(xué)院植物病理實(shí)驗(yàn)室提供。
試驗(yàn)方法
病原真菌的活化：將保存的病原菌菌株移至pda培養(yǎng)基中，置26℃恒溫條件下擴(kuò)大培養(yǎng)，待菌絲長滿培養(yǎng)皿時，供抑菌實(shí)驗(yàn)備用。
細(xì)菌的活化：于-20℃保存的病原細(xì)菌凍存管中吸取50μl菌液于na培養(yǎng)基中，28℃倒置培養(yǎng)48h，待細(xì)菌活化后進(jìn)行劃線擴(kuò)大培養(yǎng)，28℃倒置培養(yǎng)48h，供抑菌實(shí)驗(yàn)備用。
測定方法：病原真菌抑菌試驗(yàn)：采用平板對峙培養(yǎng)法檢測各個菌株對病原菌生長的抑制能力，無菌操作室將pda培養(yǎng)基上長好的病原菌用打孔器制成d＝5mm菌餅，然后將菌餅轉(zhuǎn)接至pda培養(yǎng)基平板中央，再用移液槍槍頭將分離純化的細(xì)菌接至距病原菌2.5cm處，每皿接種一株供試細(xì)菌，共設(shè)3個重復(fù)，同時以只放病原菌菌餅的平板為對照，26℃恒溫培養(yǎng)，待培養(yǎng)至ck長滿培養(yǎng)基時，測量抑菌帶寬度。病原細(xì)菌抑菌試驗(yàn)：挑取活化的病原細(xì)菌的單菌落接種于100mlna液體培養(yǎng)基中，28℃160rpm振蕩培養(yǎng)48h制備成菌懸液，將菌懸液與40℃的na固體培養(yǎng)基混勻制成帶菌底板，將生防菌點(diǎn)接與帶菌底板中央，28℃倒置培養(yǎng)48h，測量抑菌帶寬度。
試驗(yàn)結(jié)果與分析
試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5對不同病原菌生長抑制效果測定
由表1可知，貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5對5種病原菌均有較強(qiáng)的拮抗作用，其中貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5對水稻白葉枯病菌的抑制作用最強(qiáng)，抑菌圈半徑達(dá)20.2mm；作用次之的為水稻細(xì)菌性條斑病菌，抑菌圈半徑為14.5mm；作用居中的為魔芋軟腐病菌，抑菌圈半徑為10.7mm；對腐皮鐮刀菌的抑制作用最弱，抑菌圈半徑為4.2mm，因此該生防細(xì)菌主要表現(xiàn)為對病原細(xì)菌的抑制作用。
實(shí)施例4
貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5對甜玉米溫室盆栽促生試驗(yàn)
供試作物：盆栽甜玉米
供試培養(yǎng)基：kb液體培養(yǎng)基：蛋白胨20g，甘油10ml，磷酸氫二鉀1.5g，七水硫酸鎂1.5g，ddh2o1000ml，ph7.0，121℃滅菌備用。
實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：云南省昆明市云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植保學(xué)院溫室
生防菌劑的制備
將貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5接種于裝有500mlkb液體培養(yǎng)基三角瓶中，在搖床中(28℃，160rpm)振蕩培養(yǎng)3d，紫外分光光度計(jì)調(diào)節(jié)菌懸液od600nm＝0.5，菌懸液濃度相當(dāng)于1x108cfu/ml以備用。
包衣劑制備：如實(shí)例2所述制備包衣劑。
試驗(yàn)方法：
水劑處理：出苗后種植30天的玉米苗根部灌根生防菌劑，設(shè)置2個處理和1個清水對照，每個處理15株苗，每株苗灌根100ml，每隔7天灌根一次，連續(xù)灌根3次，待第三次灌根后30天對玉米進(jìn)行農(nóng)藝性狀調(diào)查并分析結(jié)果。
包衣劑處理：將制備好的生防菌包衣劑與玉米種子拌勻(包衣劑1000ml可處理玉米種子3000g)，然后于陰涼處自然風(fēng)干，制成包衣種子。將玉米種子撒入土中，每穴3-5粒，待出苗后剔除多余苗，使每穴2株，定期澆水，待玉米70天后調(diào)查農(nóng)藝性狀并分析其結(jié)果。
試驗(yàn)結(jié)果與分析
試驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5水劑和包衣劑對玉米的促生作用
由表2可知：施用生防菌jn5生物制劑對玉米的促生作用顯著，其中使用菌劑略優(yōu)于包衣劑，與對照相比，jn5水劑和包衣劑對玉米的株高、鮮重、根長、葉片數(shù)、葉面積、根鮮重、地上部鮮重和根冠比均有較強(qiáng)的促生效果，其中對玉米的株高、根長、葉面積、根鮮重表現(xiàn)最為顯著。
實(shí)施例5
貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)jn5對水稻細(xì)菌性條斑病的防治和對水稻的促生作用
防治對象：水稻細(xì)菌性條斑病
供試培養(yǎng)基如下：
kb培養(yǎng)基(蛋白胨20g，磷酸氫二鉀1.5g，七水硫酸鎂1.5g，甘油10ml，蒸餾水1000ml；ph7.0)；
na培養(yǎng)基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏1g，蔗糖10g，瓊脂17g，水1000ml，ph7.0)；
試驗(yàn)地點(diǎn)：云南省西雙版納自治州景洪市勐龍鎮(zhèn)進(jìn)行水稻細(xì)菌性條斑病大田防效試驗(yàn)。選用水稻感病品種ir24在歷年發(fā)病重的田塊種植，開展生防細(xì)菌防控水稻細(xì)菌性病害的試驗(yàn)，統(tǒng)一化水肥管理，嚴(yán)格控制氮肥。小區(qū)為一畦4行區(qū)，面積20平方米，每處理設(shè)3個重復(fù)，隨機(jī)排列，共9個小區(qū)，四周設(shè)保護(hù)行。
生防菌劑的制備
生防菌劑的制備：將貝萊斯芽孢桿菌jn5接種于裝有500mlkb液體培養(yǎng)基三角瓶中，在搖床中(28℃，160rpm)振蕩培養(yǎng)3d，調(diào)節(jié)菌懸液濃度相當(dāng)于1x108cfu/ml。
試驗(yàn)方法
水稻細(xì)菌性條斑病的防治：設(shè)置生防菌劑jn5、農(nóng)藥葉枯唑和清水對照共3個處理，以生防菌劑稀釋50倍后對水稻苗期葉部進(jìn)行噴霧，每20平方米施用生防菌劑量為10l，每隔7天施用一次，連續(xù)施用3次。
生防菌對水稻的促生：設(shè)置稀釋100倍、200倍、500倍濃度的生防菌劑jn5對水稻的包衣、澆苗和清水對照多個處理，每隔7天施用一次，連續(xù)施用3次。
調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)
水稻細(xì)菌性條斑病病級標(biāo)準(zhǔn)：
0級：無?。?/p>
1級：病斑面積(或長度，下同)占面積的1/5以下；
2級：病斑面積為葉面積的1/5-1/3；
3級：病斑面積為葉面積的1/3-1/2；
4級：病斑面積為葉面積的1/2以上。
病情指數(shù)＝σ(各級病株數(shù)×相對級數(shù)值)×100/(調(diào)查總株數(shù)×最高級數(shù)值)
相對防效＝(對照區(qū)病指增長率-處理區(qū)病指增長率)/對照區(qū)病指增長率×100％
試驗(yàn)結(jié)果與分析
結(jié)果見表3，表4。
表3西雙版納州景洪市大勐龍水稻細(xì)菌性條斑病的防治結(jié)果
從表3可知，當(dāng)田間水稻病株率為60.85％，病情指數(shù)為28.00％時，jn5菌劑對條斑病的防效為46.20％；當(dāng)田間水稻病株率為51.34％，病情指數(shù)為23.16％時，農(nóng)藥葉枯唑?qū)l斑病的防效為55.50％。結(jié)果表明生防菌劑jn5可有效防治水稻細(xì)菌性條斑病。
表4生防菌jn5對水稻的促生作用
從表4可知，生防菌jn5的菌劑和包衣劑與對照相比均對水稻具有顯著的促生作用，其中菌劑稀釋100倍澆苗對水稻的促生效果最顯著，主要表現(xiàn)為株高和根干重方面；菌劑稀釋500倍包衣處理對水稻的株高、根長、苗干重和根干重與對照相比有促生作用均表現(xiàn)顯著。因此，該株生防細(xì)菌jn5可作為一種新型綠色防控制劑，并可達(dá)到減施化學(xué)藥劑的目的。
以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。