本發(fā)明涉及微生物技術領域，特別是涉及一種提高納豆激酶產生菌穩(wěn)定性與納豆激酶活性的培養(yǎng)基。
背景技術：
納豆激酶(nattokinase簡稱nk)是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發(fā)酵過程中由納豆枯草桿菌(bacillussubtilislnatto)產生的一種絲氨酸蛋白酶，于1980年在納豆中被發(fā)現(xiàn)，由275個氨基酸按照固定排列方式組成，分子量是27724，有分解血栓的獨特功能。納豆激酶具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循環(huán)，軟化和增加血管彈性等作用。
最開始的納豆激酶都是從納豆中分離提取得來的，納豆的制作屬于固態(tài)發(fā)酵，固態(tài)發(fā)酵的缺點在于易染菌、難散熱、回收率低，很難滿足有嚴格要求的藥品尤其是生物制品的生產要求。因此近年來，成本低廉、產量高并更易于工業(yè)化的液態(tài)發(fā)酵逐步替代了固態(tài)發(fā)酵，成為工業(yè)化生產納豆激酶的主要方式。但是不管是固態(tài)發(fā)酵還是液態(tài)發(fā)酵，要提高納豆激酶產品的質量，同時降低其生產成本，最關鍵的都是要提高納豆激酶的單位產物的酶活力。
目前對于納豆激酶液態(tài)發(fā)酵的研究雖然比較多，但主要都集中在優(yōu)良菌種選育、發(fā)酵工藝的優(yōu)化和分離純化方法的選擇方面，而對于培養(yǎng)基成分的篩選和匹配則研究比較少。事實上，培養(yǎng)基的性狀、所含成分及其配比，對其發(fā)酵過程和發(fā)酵結果都有很大影響，因此，對納豆激酶產生菌的培養(yǎng)基的優(yōu)化研究具有重要的意義。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種提高納豆激酶產生菌穩(wěn)定性與納豆激酶活性的培養(yǎng)基，提高納豆激酶產生菌的穩(wěn)定性和納豆激酶的活性。
本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：一種提高納豆激酶產生菌穩(wěn)定性與納豆激酶活性的培養(yǎng)基，包括下述質量百分比含量的組分：脫脂大豆粉10-30%、葡萄糖1~3%、l-半胱氨酸0.01~0.1%、l-絲氨酸0.01~0.1%、nacl0.3~0.5%、mgso4·7h2o0~0.1%、cacl20.01~0.1%，余量為水。
優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基的ph值為7.0-7.8。
優(yōu)選的，所述脫脂大豆粉的質量百分比含量為20%、葡萄糖的質量百分比含量為1.5%、l-半胱氨酸的質量百分比含量為0.07%、l-絲氨酸的質量百分比含量為0.02%、nacl的質量百分比含量為0.3%、mgso4·7h2o的質量百分比含量為0.02%、cacl2的質量百分比含量為0.03%，余量為水。
優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基的ph值為7.4。
本發(fā)明的有益效果是：
（1）本發(fā)明能夠促進較大比例細菌產生芽胞（細菌的休眠體），而芽孢具有較強的抗性，對高溫、紫外線、干燥、電離輻射和很多有毒的化學物質都有很強的抗性，從而可提升培養(yǎng)物的穩(wěn)定性；
（2）利用本發(fā)明的培養(yǎng)基得到的納豆激酶產生菌能獲得高納豆激酶活性的發(fā)酵物。
具體實施方式
下面進一步詳細描述本發(fā)明的技術方案，但本發(fā)明的保護范圍不局限于以下所述。
【實施例一】該實施例描述了一種提高納豆激酶產生菌穩(wěn)定性與納豆激酶活性的培養(yǎng)基，包括下述質量百分比含量的組分：10%脫脂大豆粉、1%葡萄糖、0.01%l-半胱氨酸、0.01%l-絲氨酸、0.3%nacl、0.01%cacl2，余量為水，培養(yǎng)基的ph值為7.0。
按接種量1.5%的比例接種納豆激酶產生菌培養(yǎng)物（濃度1×106cfu/ml）——枯草芽胞桿菌枯草亞種，購買自cicc（中國工業(yè)微生物菌種保藏中心），菌株編號：21076），在37℃、150r/min的條件下恒溫振蕩培養(yǎng)24h，芽胞數(shù)量達到5.6×108cfu/ml。取發(fā)酵上清液，用紫外分光光度法測得產品酶活為51960u/ml。
【實施例二】該實施例描述了一種提高納豆激酶產生菌穩(wěn)定性與納豆激酶活性的培養(yǎng)基，包括下述質量百分比含量的組分：15%脫脂大豆粉、2%葡萄糖、0.07%l-半胱氨酸、0.02%l-絲氨酸、0.3%nacl、0.02%mgso4·7h2o、0.03%cacl2，余量為水，培養(yǎng)基的ph值為7.4。
按接種量1%的比例接種納豆激酶產生菌培養(yǎng)物（濃度1×106cfu/ml）——枯草芽胞桿菌枯草亞種，購買自cicc（中國工業(yè)微生物菌種保藏中心），菌株編號：21076），在36℃、150r/min的條件下恒溫振蕩培養(yǎng)24h，芽胞數(shù)量達到6×108cfu/ml。取發(fā)酵上清液，用紫外分光光度法測得產品酶活為74250u/ml。
【實施例三】該實施例描述了一種提高納豆激酶產生菌穩(wěn)定性與納豆激酶活性的培養(yǎng)基，包括下述質量百分比含量的組分：30%脫脂大豆粉、3%葡萄糖、0.1%l-半胱氨酸、0.1%l-絲氨酸、0.5%nacl、0.1%mgso4·7h2o、0.1%cacl2，余量為水，培養(yǎng)基的ph值為7.8。
按接種量2%的比例接種納豆激酶產生菌培養(yǎng)物（濃度1×106cfu/ml）——枯草芽胞桿菌枯草亞種，購買自cicc（中國工業(yè)微生物菌種保藏中心），菌株編號：21076，在36℃、180r/min的條件下恒溫振蕩培養(yǎng)24h，芽胞數(shù)量達到7×108cfu/ml。取發(fā)酵上清液，用紫外分光光度法測得產品酶活為72120u/ml。
盡管本發(fā)明已進行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可進行各個條件的適當變化?？梢岳斫猓景l(fā)明不限于所述實施方案，而歸于權利要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。