本發(fā)明涉及一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法，屬于醫(yī)藥化學領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
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腫瘤已嚴重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標。隨著藥物化學的發(fā)展，以嘧啶環(huán)為結(jié)構(gòu)母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關(guān)注。
甘草查爾酮a被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結(jié)構(gòu)如下所示。
近年來，研究發(fā)現(xiàn)甘草查爾酮a具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有很大的開發(fā)價值。但甘草查爾酮a是平面性強的分子，水溶性差。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于提供一類具有抗腫瘤活性的甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法，以提高甘草查爾酮a的水溶性和抗腫瘤活性。
本發(fā)明的實現(xiàn)過程如下：
結(jié)構(gòu)通式(i)所示的化合物，
其中：r為c1-c4的烷基，c1-c4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的芐基、硝基；
所述的取代為單取代或多取代，取代基為：鹵素、c1-c4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。
結(jié)構(gòu)通式(i)所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮a、硫脲類化合物為原料，以有機堿為催化劑，在甲苯或dmf作為反應溶劑的條件下進行合成。
具體來說，包括如下步驟，
(1)向反應器中按摩爾比為1:1～1:1.5加入甘草查爾酮a和硫脲類化合物，加入有機溶劑混合均勻，加入有機堿催化劑，80℃～120℃回流反應3～8小時；
(2)將步驟(1)反應體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標產(chǎn)物。
步驟(1)中所述的甘草查爾酮a與硫脲類化合物的摩爾比優(yōu)選為1:1～1:1.3，有機溶劑為甲苯或dmf，反應溫度優(yōu)選為105℃～115℃，有機堿優(yōu)選為三乙胺。
本發(fā)明的優(yōu)點在于：原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應條件溫和，可實現(xiàn)反應原料的充分利用，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)率低的問題，同時將嘧啶環(huán)引入到甘草查爾酮a的化學結(jié)構(gòu)中，對探究該類化合物的生物活性與總結(jié)構(gòu)效關(guān)系具有重要的理論價值和應用價值。
具體實施方式：
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述。這些實施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發(fā)明的范圍和實質(zhì)。
一類甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物的合成方法包括如下步驟：
(1)向反應器中按摩爾比為1:1～1:1.5，加入甘草查爾酮a、硫脲類化合物，加甲苯或dmf混合均勻，其中溶劑體積小于反應器容積的2/3，加入有機堿催化劑三乙胺，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃～120℃，回流反應3～8小時；
(2)反應過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應的進行程度，待原料反應完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；
(3)將步驟(2)反應體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標產(chǎn)物。
本發(fā)明部分優(yōu)選實施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：
實施例1
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-甲基-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(1)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和68.44mg1-甲基硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應3小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末113mg，總收率46.57％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,m),5.33(2h,s),5.00-4.98(2h,m),4.0(1h,t),3.83(3h,s),3.10(3h,s),1.76-1.51(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):181.5,164.6,160.2,156.1,155.0,148.5,133.2,129.2,125.2,116.2,111.1,103.8,62.0,56.1,40.2,28.6.ms(esi)for(m+h)+:411.2.
實施例2
1-芐基-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(2)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和107.73mg1-芐基硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應5小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末124.72mg，總收率43.36％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.33-7.23(5h,m),6.90(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,m),5.33(2h,s),5.00-4.98(2h,m),4.0(1h,t),3.83(3h,s),3.80(2h,s),1.76-1.51(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):181.2,164.8,161.0,156.2,155.1,147.8,136.5,133.2,129.1,128.6,127.4,125.0,116.2,111.1,104.0,59.4,55.4,40.5,39.7,28.3.ms(esi)for(m+h)+:487.2.
實施例3
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-苯基-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(3)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和116.95mg1-苯基硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末115.31mg，總收率41.28％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.87(2h,d,j＝7.52hz),7.25(2h,t),6.95(1h,s),6.83(2h,d,j＝7.52hz),6.75(1h,m),6.60(2h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,148.9,140.3,134.3,129.1,128.4,126.2,121.6,117.0,111.1,103.8,69.9,56.1,41.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:473.2
實施例4
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(鄰甲苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(4)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和97.73mg1-(鄰甲苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末(121.79mg),總收率42.35％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.18(1h,d),7.04(1h,t),6.95(1h,s),6.83(2h,d,j＝7.52hz),6.65(1h,t),6.41(1h,s),6.30(1h,q),6.19(1h,d),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),2.12(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,139.2,137.2,133.2,131.8,129.4,128.3,126.0,123.2,121.7,116.0,111.1,103.8,70.2,55.1,40.1,39.8,28.6,18.2.ms(esi)for(m+h)+:487.2.
實施例5
1-(2-氯苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(5)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和113.41mg1-(2-氯苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應4小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末(148.23mg),總收率49.46％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.85(2h,d,j＝7.52hz),7.43(1h,d),7.11(1h,t),6.95(1h,s),6.85(2h,d,j＝7.52hz),6.71(1h,t),6.54(1h,d),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,146.0,138.8,133.2,131.7,130.2,129.1,128.3,127.5,125.2,122.6,116.0,111.1,103.8,68.4,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:507.2.
實施例6
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(2-甲氧基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(6)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和110.02mg1-(2-甲氧基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末(135.94mg)，總收率45.76％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),6.95(1h,s),6.88(1h,m),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.79(1h,m),6.66(1h,m),6.41(1h,s),6.39(1h,d),6.30(1h,q),5.35(2h,s),5.00-4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(6h,s),1.88-1.63(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,166.9,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,133.2,129.1,128.4,127.2,125.2,123.0,121.4,116.0,112.9,111.1,103.8,75.2,56.1,56.8,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:503.2.
實施例7
1-(3-氟苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(7)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和130.77mg1-(3-氟苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到90℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末126.76mg，總收率43.72％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.21(1h,m),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.56(1h,m),6.54(1h,m),6.41(1h,s),6.37(1h,m),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,163,2,160.8,155.1,154.7,147.8,141.9,135.2,130.6,129.1,128.2,125.2,121.6,117.2,115.0,111.1,103.8,67.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:491.2.
實施例8
3-(6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-2-硫代-5,6-二氫嘧啶1(2h)-基)芐腈(8)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和126.16mg1-(3-氰基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到105℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末117.83mg，總收率40.06％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.30(1h,m),7.24(1h,m),6.95(1h,s),6.78(1h,m),6.85(2h,d,j＝7.52hz),6.69(1h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,148.8,141.0,136.7,133.5,131.2,129.4,127.3,125.2,121.6,118.6,116.0,112.9,111.1,106.8,69.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:498.2.
實施例9
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)-5，6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(9)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和169.19mg1-(3-(三氟甲基)苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末131.32mg，總收率41.10％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.85(2h,d,j＝7.52hz),7.16(1h,t),6.95(1h,s),6.94(1h,m),6.91(1h,m),6.75(2h,d,j＝7.52),6.60(1h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,153.7,148.8,140.6,135.5,133.2,131.3,129.2,128.3,125.2.124.1,123.3,121.3,116.0,111.1,103.8,69.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:541.2.
實施例10
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(對甲苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(10)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和127.73mg1-(對-甲苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到115℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末139.51mg,總收率48.51％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.01(2h,d,j＝7.34hz),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,q),6.13(2h,d,j＝7.34hz),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),2.34(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,153.7,148.8,138.3,137.3,134.2,129.2,128.3,125.2,122.6,116.0,111.1,103.8,69.9,56.1,41.1,39.8,28.6,21.3.ms(esi)for(m+h)+:487.2.
實施例11
1-(4-氟苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(11)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和120.77mg1-(4-氟苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到120℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末136.21mg，總收率46.98％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.02(2h,t),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.58(2h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,163.3,160.8,155.1,154.7,147.8,135.9,133.2,129.1,128.2,123.2,121.6,116.0,115.8,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+：491.2.
實施例12
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(4-苯氧基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(12)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和157.71mg1-(4-苯氧基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末147.08mg,總收率44.07％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.41(2h,t),7.17(1h,m),7.14(2h,m),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.79(2h,m),6.78(2h,m),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,157.0,155.1,154.7,151.2,148.8,133.3,129.1,128.3,126.2,125.2,122.7,118.9,116.0,115.7,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:565.2.
實施例13
1-(3,5-二氯苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(13)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和169.87mg1-(3,5-二氯苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末134.25mg，總收率41.95％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.01(1h,m),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.66(2h,s),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,155.1,154.7,147.8,143.1,138.8,133.2,129.2,128.3,123.2,121.6,116.0,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:541.1.
實施例14
1-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(14)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和221.44mg1-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末153.09mg，總收率42.56％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),7.33(1h,m),6.95(1h,s),6.91(2h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(3h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,164.6,160.8,156.1,154.7,147.8,140.9,133.2,131.6,129.1,128.3,125.4,122.6,119.1,116.0,111.1,103.8,68.9,56.1,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:609.2.
實施例15
1-(2,4-二甲氧基苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮(15)的制備。
在反應器中加入200mg甘草查爾酮a和163.09mg1-(2,4-二甲基苯基)硫脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應6小時。薄層色譜追蹤反應，反應結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末135.70mg，總收率43.11％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.75(2h,d,j＝7.52hz),6.95(1h,s),6.75(2h,d,j＝7.52hz),6.41(1h,s),6.38(1h,m),6.36(1h,m),6.33(1h,m),6.30(1h,q),5.35(2h,s),4.99(2h,m),3.9(1h,t),3.83(9h,s),1.88(1h,d),1.69(6h,s),1.63(1h,d)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):178.7,170.0,164.6,160.8,157.6,155.1,154.7,148.8,133.2,129.1,127.4,125.2,121.6,119.5,116.0,111.1,105.9,103.8,100.7,70.2,56.1,56.8,40.1,39.8,28.6.ms(esi)for(m+h)+:533.2.
實施例16
本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測試
對本發(fā)明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法采用常規(guī)的mtt法。
細胞株選用：人肝癌細胞(hepg2)，人肺癌細胞(a-549)，人胃癌細胞(sgc-7901)。培養(yǎng)液為dmem+15％nbs+雙抗。
樣品液的配制：用dmso(merck)溶解后，加入pbs(-)配成的100μmol/l的溶液或者均勻的混懸液，然后用dmso的pbs(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/l。
將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(ara-c)以同樣的條件配成對照品溶液。
細胞培養(yǎng)：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養(yǎng)于含10％滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬u/l)的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5％co2，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞貼壁生長，每2～3天傳代1次，傳代時首先倒出培養(yǎng)液，pbs洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細胞至適當濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對數(shù)生長期細胞用于實驗。
mtt法檢測細胞活性及ic50的測定：
實驗原理：活細胞線粒體中脫氫酶能將黃色的mtt還原成不溶于水的藍紫色產(chǎn)物甲臜(mttformazan)，并沉積在細胞中，生成的量與活細胞數(shù)目成正比，而死細胞沒有這種功能。dmso能溶解藍紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標儀測定的光吸收值可反映細胞存活率。
實驗方法：取對數(shù)生長期細胞，消化、計數(shù)，以2×104/ml的密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl。培養(yǎng)24小時后，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/l濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔，以含0.4％dmso的培養(yǎng)液作對照。藥物作用48小時后，去上清，每孔加入100μlmtt(2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2h-四唑氫溴酸鹽)(1mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，棄上清，每孔加入100μldmso，振蕩混勻，用酶標儀在570nm處測定吸光度值，采用ic50計算軟件求出半數(shù)抑制濃度(ic50)。
試驗結(jié)果詳見表1，其中，樣品是指相應實施例中制備的甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物，樣品編號對應制備實施例中所得到的化合物的具體編號。
表1化合物對不同腫瘤細胞的半數(shù)抑制濃度ic50(單位：μmol/l)
化合物7和化合物2在所測試的3種細胞株中均表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性，化合物1和11次之，在不同的細胞株中也表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性。以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，特別是部分甘草查爾酮a硫脲嘧啶類衍生物的活性在特定細胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于阿糖胞苷，可用于抗腫瘤藥物的研究。