技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種快速構(gòu)建禽傳染性支氣管炎病毒反向遺傳株的方法，屬于冠狀病毒反向遺傳技術(shù)領(lǐng)域。所述構(gòu)建方法包括：以BAC載體為骨架，運(yùn)用體外同源重組技術(shù)，快速完成包含禽傳染性支氣管炎病毒基因組全長cDNA克隆的構(gòu)建，將構(gòu)建的重組質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄獲得具有感染性的轉(zhuǎn)錄本，并完成病毒包裝，將細(xì)胞與培養(yǎng)基的混合液接種SPF雞胚并傳代，獲得禽傳染性支氣管炎病毒反向遺傳株。該構(gòu)建方法操作簡(jiǎn)單，陽性克隆率高，而且獲得的反向遺傳株具有傳代穩(wěn)定性，為體外研究病毒的致病機(jī)理、開發(fā)新型疫苗等提供了有效的工具；本發(fā)明利用5’添加的CMV啟動(dòng)子，在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，利用3’添加的HDVR序列，大大提高了病毒的拯救效率。

技術(shù)研發(fā)人員：廖敏;周繼勇;石婷婷;曹尚尚;顏焰
受保護(hù)的技術(shù)使用者：浙江大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.06.28
技術(shù)公布日：2017.09.22