【
技術(shù)領(lǐng)域：
：】本發(fā)明涉及人類生殖領(lǐng)域，具體涉及一種fsh-hsa融合蛋白及其制備方法。
背景技術(shù)：
：：促卵泡生成素(folliclestimulatinghormone，簡(jiǎn)稱fsh)，是一種由腦垂體前葉嗜喊性細(xì)胞合成與分泌的高度糖基化蛋白，與腦垂體分泌的其他糖蛋白激素如促黃體激素(lh)、促甲狀腺激素(tsh)，還有胎盤分泌的促絨毛膜激素(hcg)共同組成糖蛋白家族，都由α亞基和β亞基所組成，α亞基相同，而β亞基具有激素各自的特異性，是激素生物活性和免疫原性的決定因素。fsh的α亞基由92-96個(gè)氨基酸組成，β亞基由109-115個(gè)氨基酸組成。兩亞基通過內(nèi)部二硫鍵維持自身正確的三級(jí)結(jié)構(gòu)，c端殘基的位置決定其折疊的三維空間結(jié)構(gòu)。根據(jù)qingr.fan等人在nature上發(fā)表的fsh與其受體的三維結(jié)構(gòu)，fsh主要通過β亞基的c端與其受體結(jié)合，同時(shí)β亞基的c端通過內(nèi)部二硫鍵的固定與α亞基緊密結(jié)合，其中真正與受體的結(jié)合位點(diǎn)是β亞基的c端第89-105位氨基酸，它像三明治一樣，夾在α亞基的l2環(huán)和c端中間。女性卵泡顆粒細(xì)胞上含有fsh的特異性受體，雌激素協(xié)同fsh使顆粒細(xì)胞增生，內(nèi)膜細(xì)胞分化，卵泡液形成，卵泡腔擴(kuò)大，從而促進(jìn)卵泡生長和發(fā)育成熟。卵泡在生長過程中會(huì)釋放抑制素以阻斷卵泡剌激素的進(jìn)一步合成，并呈劑量依賴關(guān)系。這一機(jī)制保證了排卵的選擇性。男性由細(xì)胞精管內(nèi)的支持細(xì)胞是fsh的靶細(xì)胞，fsh與支持細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合后將剌激由細(xì)精管上皮和次級(jí)精母細(xì)胞的發(fā)育，在lh和雄激素的協(xié)同下促進(jìn)精子發(fā)育成熟。因?yàn)閒sh對(duì)女性的卵泡成熟和男性的精子發(fā)育有非常重要意義，因而可以單獨(dú)使用fsh或聯(lián)合lh應(yīng)用治療不育不孕癥。fsh可以從腦垂體或絕經(jīng)后的婦女尿液中分離得到，但尿源hfsh存在病毒污染、原料來源有限、采集困難、含量低及純化過程復(fù)雜等問題，歐美等發(fā)達(dá)國家普遍不接受尿源產(chǎn)品上市和銷售。fsh也可以重組生產(chǎn)(us5，639，640、us5，156，957、us4，840，896、ep211，894)，但仍然存在一些缺點(diǎn)。首先，其半衰期短。刺激女性卵泡發(fā)生需要連續(xù)8-10天，有時(shí)高達(dá)21天，而對(duì)于低促性腺激素的男性，誘導(dǎo)精子發(fā)生需要高達(dá)18個(gè)月。為達(dá)到臨床效果，需每天肌肉注射或皮下注射給藥，這樣的給藥方案經(jīng)常伴有局部反應(yīng)和不適，常見的并發(fā)癥如卵巢過渡刺激綜合征，變現(xiàn)為卵巢增大、全身毛細(xì)血管通透性增加和腹水形成，重者可危及患者生命。其次，目前重組hfsh表達(dá)量低，制備過程復(fù)雜和生產(chǎn)成本巨大。因而開發(fā)長效fsh，減少給藥頻率具有實(shí)際臨床應(yīng)用價(jià)值。近年來有多篇專利及文章報(bào)道開發(fā)長效fsh，主要分為兩類，一種是通過增加fsh的糖基化位點(diǎn)來達(dá)到提高半衰期的目的，另一種通過與fc片段融合來提高蛋白體內(nèi)半衰期。前者可再細(xì)分為兩類，一種是在fsh分子內(nèi)部增加糖基化修飾位點(diǎn)，如w001/58493公開了可以在fsh的α亞基進(jìn)行的77種突變和可以在fsh的β亞基進(jìn)行的51種突變，但其未公開其突變后的效果；另一種是在序列末端添加額外序列來增加糖基化修飾位點(diǎn)。目前開發(fā)比較成功的是2010年由德國默克公司上市的elonva，該類似物具有天然fsh的生物活性，但卻具有較長的循環(huán)半衰期，在人體內(nèi)的半衰期約69h。蛋白具體序列在專利us5，338，835和us5，585，345中公開，是一種改造的fshβ亞基，其c末端谷氨酸以hcg的羧基末端肽(ctp)基團(tuán)延長。igg類的免疫球蛋白是人類血液中最豐富的蛋白質(zhì)，它們的半衰期可高達(dá)到21天，而fc片段是igg保持體內(nèi)較長半衰期的主要原因，fc片段可與新生fc受體(fcrn)結(jié)合，避免igg進(jìn)入溶酶體中被降解。因此，igg的fc片段被用來與活性蛋白連接構(gòu)成融合蛋白，以提高活性蛋白的體內(nèi)半衰期，達(dá)到長效的目的。專利uso，186，662公布了通過構(gòu)建fsh-fc融合蛋白同二聚體、異二聚體，在大鼠體內(nèi)半衰期提高至60h。但該蛋白按三天給藥一次，fsh已經(jīng)代謝完畢沒有活性。cn201210476665在此基礎(chǔ)上加以完善，fsh融合蛋白的的β亞基直接或者間接通過鏈接元件linker融合在fc片段上，保留原有親和力的前提下，增強(qiáng)了體內(nèi)半衰期。但是其半衰期仍只有30-40小時(shí)(文獻(xiàn)報(bào)道標(biāo)準(zhǔn)品重組fsh為12h)，且需達(dá)到同等效果劑量約為gonal-f的十倍，用量大。cn201310529897介紹另一種fsh-fc融合蛋白，該蛋白特征為β亞基鏈接ctp，α亞基鏈接fc片段，α亞基通過共價(jià)鍵形式與ctp相連。此蛋白活性與重組fsh相當(dāng)，但其半衰期也仍只有重組fsh的三倍左右。臨床上仍需要一種產(chǎn)品，在同等劑量下提供fsh部分或全部治療相關(guān)的效果，且半衰期長，可以比現(xiàn)有的fsh產(chǎn)品更低頻率給藥。人血清白蛋白(humanserumalbumin，hsa)是人體血清中的主要成分，對(duì)維持體內(nèi)滲透壓和血漿體積起著至關(guān)重要的作用。人血清白蛋白具有585個(gè)氨基酸，是分子量為65kd的非糖基化蛋白，腎清除率非常低，體內(nèi)半衰期為14-20d。它也是體內(nèi)因子和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的天然載體。研究表明將治療性蛋白基因與人血清白蛋白基因融合所表達(dá)的融合蛋白可明顯降低體內(nèi)藥物的清除速率，延長生物半衰期。yeh等發(fā)現(xiàn)，克魯維氏酵母表達(dá)的hsa-cd4融合蛋白在以家兔為動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)中半衰期比單獨(dú)的cd4延長了140倍。而克魯維氏酵母表達(dá)的hsa-ifnα的融合蛋白(albuferon)在獼猴體內(nèi)的半衰期比單獨(dú)的ifnα延長了大約18倍。人血清白蛋白是血液循環(huán)中的一個(gè)非常重要的天然蛋白，在體液循環(huán)中可存在20天以上。目前已有多種hsa融合蛋白處于臨床研究或已經(jīng)上市，包括gsk公司研發(fā)的阿必魯肽，其經(jīng)過hsa融合后，半衰期由2min延長至6-8天，半衰期顯著提高，每周僅需注射一次。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種fsh-hsa融合蛋白及其制備方法。本發(fā)明所述的一種fsh-hsa融合蛋白及其制備方法，它包括fsh的β亞基和α亞基；所述fsh的β亞基直接或者通過鏈接元件間接融合人血清白蛋白；所述fsh的α亞基通過親和力或鏈接原件與β亞基結(jié)合在一起。進(jìn)一步地，fsh-hsa包括兩條肽鏈，為單體；符合以下方程：方程為：fshα@fshβ-l-hsa。其中：fshα指的是fsh的α亞基；@代表了fshα通過α亞基和β亞基的親和力或者鏈接元件與fsh的β亞基結(jié)合在一起；fshβ指的是fsh的β亞基；l代表了hsa直接或通過鏈接元件間接融合到β亞基上；hsa指的是人血清白蛋白。進(jìn)一步地，所述的fsh融合蛋白包括四條肽鏈，為二聚體，符合以下方程：方程為：fshα@fshβ-l-hsa：fshα@fshβ-l-hsa。其中：fshα指的是fsh的α亞基；@代表了fshα通過α亞基和β的親和力或者鏈接元件與fsh的β亞基結(jié)合在一起；fshβ指的是fsh的β亞基；l代表了hsa直接或通過鏈接元件間接融合到α或者β亞基上；hsa指的是人血清白蛋白；冒號(hào)指的是兩個(gè)fsh-hsa融合蛋白單體之間的相互作用。進(jìn)一步地，所述fsh為人促卵泡生成素。進(jìn)一步地，所述的hsa為人血清白蛋白，其氨基酸序列與seqid:7的氨基酸序列至少具有80％的一致性。進(jìn)一步地，所述fsh融合蛋白，其中l(wèi)為直接鍵合。進(jìn)一步地，所述的連接子為約1-20個(gè)氨基酸。進(jìn)一步地，所述fsh融合蛋白，其中兩個(gè)單體的相互作用為非共價(jià)或共價(jià)結(jié)合。進(jìn)一步地，所述fsh融合蛋白，其表達(dá)體系可是是哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，包括但不限于cho，hek293，骨髓瘤細(xì)胞，宿主細(xì)胞也可以是酵母或者原核細(xì)胞如e.coli。進(jìn)一步地，所述fsh融合蛋白，其純化方法包括但不限于色譜技術(shù)如體積排阻、離子交換、親和色譜法及超濾法，也包括上述各種方法的適當(dāng)組合。采用上述結(jié)構(gòu)后，本發(fā)明有益效果為：本發(fā)明所述的一種fsh-hsa融合蛋白及其制備方法，它旨在提供一種融合hsa的fsh產(chǎn)品，進(jìn)一步提高半衰期的同時(shí)，保持原有活性?！靖綀D說明】此處所說明的附圖是用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定，在附圖中：圖1為fsh-hsa融合蛋白單體(a)及二聚體(b)示意圖。圖2為fsh-hsa融合蛋白fshα重組質(zhì)粒(a)及fshβ-hsa重組質(zhì)粒(b)。圖3為fsh-hsa二聚體經(jīng)一步純化后native-page圖譜。圖4為fsh-hsa二聚體經(jīng)一步純化后sds-page圖譜。圖5為fsh-hsa二聚體hplc-sec圖譜；【具體實(shí)施方式】下面將結(jié)合附圖以及具體實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明，其中的示意性實(shí)施例以及說明僅用來解釋本發(fā)明，但并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。如圖1-圖5所示，本具體實(shí)施方式所述的一種fsh-hsa融合蛋白及其制備方法，fsh融合蛋白的β亞基直接或者通過鏈接元件間接融合重組人血清白蛋白,而fsh的α亞基通過親和力或鏈接原件與β亞基結(jié)合在一起。本發(fā)明同cn201210476665的fsh-fc融合蛋白的區(qū)別為其β亞基鏈接fc片段，而本發(fā)明β亞基末端鏈接hsa。本發(fā)明的fsh融合蛋白包括兩條肽鏈，為單體，其特征符合以下方程：fshα@fshβ-l-hsa；其中：fshα指的是fsh的α亞基；@代表了fshα通過α亞基和β亞基的親和力或者鏈接元件與fsh的β亞基結(jié)合在一起；fshβ指的是fsh的β亞基；l代表了hsa直接或通過鏈接元件間接融合到β亞基上；hsa指的是人血清白蛋白。本發(fā)明的fsh融合蛋白包括四條肽鏈，為同二聚體，其特征符合以下方程：(fshα@fshβ-l-hsa)；其中：fshα指的是fsh的α亞基；@代表了fshα通過α亞基和β亞基的親和力或者鏈接元件與fsh的β亞基結(jié)合在一起；fshβ指的是fsh的β亞基；l代表了hsa直接或通過鏈接元件間接融合到β亞基上；hsa指的是人血清白蛋白。括號(hào)內(nèi)下標(biāo)2代表著此代表為二價(jià)同二聚體。本發(fā)明還涉及一種載體，該載體含有編碼seqidno:3的序列的fshα亞基的dna。該載體可以是表達(dá)載體。本發(fā)明還涉及一種載體，該載體含有編碼seqidno:6的序列的fshβ-hsa亞基的dna。該載體可以是表達(dá)載體。本發(fā)明還涉及一種載體，該載體含有第一dna和第二dna，其中第一dna編碼含有seqidno:3的序列的fshα亞基的dna，第二dna編碼含有seqidno:6的序列的fshβ-hsa亞基的dna。該載體可以是表達(dá)載體。所述的fsh-hsa融合蛋白涉及的hsa包括全長野生型的人血清白蛋白，也包括對(duì)于野生型人血清白蛋白氨基酸個(gè)別的改變，還包括某個(gè)人血清白蛋白結(jié)構(gòu)域或其新生兒fc受體(fcrn)結(jié)合片段。在具體實(shí)施方法中，本發(fā)明所用的人血清白蛋白為全長野生型人血清白蛋白，包括三個(gè)結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明涉及的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括但不限于cho，hek293，骨髓瘤細(xì)胞。宿主細(xì)胞也可以是酵母或者原核細(xì)胞如e.coli。本發(fā)明涉及的fsh-hsa融合蛋白可以用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)手段從宿主細(xì)胞中純化。例如fsh-hsa融合蛋白包含了hsa，蛋白可以用bluesepharose純化。純化包括但不限于色譜技術(shù)如體積排阻、離子交換、親和色譜法及超濾法。本發(fā)明涉及的融合蛋白的分離純化也包括上述各種方法的適當(dāng)組合。本發(fā)明提供了一個(gè)在不丟失fsh體內(nèi)活性的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增強(qiáng)fsh的體內(nèi)半衰期的融合方法。具體方式是將fshβ亞基直接或間接通過鏈接元件融合在hsa蛋白上，而α亞基則通過親和力或鏈接元件與此亞基結(jié)合在一起。本發(fā)明的fsh-hsa融合蛋白為二聚體或者是單體。具體實(shí)施例一：fsh-hsa同二聚體的質(zhì)粒構(gòu)建：1)根據(jù)基因庫中搜索到的人fshα亞基基因序列(fj624079.1)，經(jīng)密碼子優(yōu)化后人工合成獲得的人fshα基因(seqidno：1)，合成好的fshα基因經(jīng)金斯瑞公司通過ta克隆構(gòu)建到載體pcdna3.3topo中，測(cè)序驗(yàn)證構(gòu)建質(zhì)粒的準(zhǔn)確性，獲得重組質(zhì)粒dna。2)人的fshα序列見seqidno:1，信號(hào)肽序列見(seqidno:2)，編碼該序列的核苷酸序列檢seqidno:3。3)根據(jù)基因庫中搜索到的人fshβ亞基基因序列(hf564664.1)，野生型全長人血清白蛋白基因序列(dq986150.1)，經(jīng)密碼子優(yōu)化后人工合成獲得的人fshβ-hsa融合蛋白基因(seqidno：4)，合成好的fshα基因經(jīng)金斯瑞公司通過ta克隆構(gòu)建到載體poptivec-topo中，測(cè)序驗(yàn)證構(gòu)建質(zhì)粒的準(zhǔn)確性，獲得重組質(zhì)粒dna。4)人的fshβ-hsa融合蛋白基因序列見seqidno:4，信號(hào)肽序列見(seqidno:5)，編碼該序列的核苷酸序列檢seqidno:6。具體實(shí)施例二：fsh-hsa二聚體蛋白瞬時(shí)表達(dá)：1)轉(zhuǎn)染前24小時(shí)，用培養(yǎng)基以2x106cells/ml密度接種cho-te細(xì)胞。轉(zhuǎn)染當(dāng)天搖勻，取樣計(jì)數(shù)。轉(zhuǎn)染前，將準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞使用預(yù)熱的培養(yǎng)基稀釋，將密度調(diào)至4x106cells/ml，將準(zhǔn)備好的細(xì)胞放入溫度36.5℃，濕度85％，co26％，80～110rpm培養(yǎng)。dna用量為1μg/106cells/ml，pei的用量是dna的3倍，即3μg/106cells/ml.使用移液器吸取peireagent滴加入待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，搖動(dòng)搖瓶使其混勻；再使用移液器將相應(yīng)的dna滴加入待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中。該過程應(yīng)在2分鐘內(nèi)完成，然后將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞放回到36.5℃搖床中，四小時(shí)后向每份轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中加入1％體積的vpa溶液、0.5倍體積的anti-clumping和0.8％體積的cystine溶液。然后放到32℃搖床上。每天對(duì)細(xì)胞取樣進(jìn)行vi-cell計(jì)數(shù)直到活率在80％左右，取細(xì)胞懸液7000rpm離心10min收集fsh-hsa二聚體培養(yǎng)上清。具體實(shí)施例三：fsh-hsa二聚體白純化：用20mmtris，7.0平衡folliclestimulatinghormoneaffinitymatrix(lifetechnologies)。細(xì)胞液經(jīng)離心后，取上清0.22μm過濾后上載到fsh親和柱上，然后用20mmtris漂洗后，最后用20mmtris，2mmgcl27.0洗脫蛋白。具體實(shí)施例四：fsh-hsa二聚體蛋白分析鑒定：native-page結(jié)果如圖3所示，sds-page結(jié)果如圖4所示，hplc-sec結(jié)果如圖5所示。fsh中β亞基的c端通過內(nèi)部二硫鍵的固定與α亞基緊密結(jié)合，而hsa與β融合后會(huì)以非共價(jià)鍵形式形成二硫鍵。在非變性膠(native-page)及hplc-sec中，非還原不加熱條件非共價(jià)鍵均未打開，成單一條帶，分子量約180kd。加入dtt后，β亞基中二硫鍵斷裂，不能與α亞基結(jié)合，從而只存在(fshβ-hsa)2。另外dtt斷裂hsa中二硫鍵，使之產(chǎn)生多聚體，加熱時(shí)亦產(chǎn)生多聚體。在變性膠(sds-page)中，由于本身sds作用，破壞了部分hsa間的作用力，使之有大量單體fsh-hsa產(chǎn)生，同時(shí)也有少量fshα亞基解離，形成fshα亞基及fshβ-hsa。加熱后，αβ亞基之間的共價(jià)鍵斷裂更為嚴(yán)重，fshα亞基及fshβ-hsa含量增加，同時(shí)多聚體產(chǎn)生。加入dtt的還原樣品可看到，β亞基中二硫鍵斷裂，不能與α亞基結(jié)合，fsh-hsa消失，產(chǎn)生大量fshα亞基及fshβ-hsa。經(jīng)一步純化后，fsh-hsa二聚體蛋白純度達(dá)98％以上本發(fā)明所述的一種fsh-hsa融合蛋白及其制備方法，它旨在提供一種融合hsa的fsh產(chǎn)品，進(jìn)一步提高半衰期的同時(shí)，保持原有活性。以上所述僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施方式，故凡依本發(fā)明專利申請(qǐng)范圍所述的構(gòu)造、特征及原理所做的等效變化或修飾，均包括于本發(fā)明專利申請(qǐng)范圍內(nèi)。inhaosequencetable<110>hangzhouhaoyangbiotechnologyco.,ltd.<120>akindoffsh-hsafusionproteinanditspreparationmethod<130>indicatesthefilereferencenumber<160>representsthenumberofsequencesinthesequencetable<170>indicatesthesoftwareversioninformationoftheseriallistelectronicfile<210>1<211>122<212>ptr<213>race（homosapiens）<223>peoplefshαsubunitaminoacidsequence<400>1mdyyrkyaaiflvtlsvflhvlhsapdvqdcpectlqenpffsqpgapilqcmetgccfsrayptplrskktmetlvqknvtsestccvaksynrvtvmetggfkvenhtachcstcyyhks<210>2<211>24<212>ptr<213>race（homosapiens）<223>peoplefshαsignalpeptideaminoacidsequence<400>2mdyyrkyaaiflvtlsvflhvlhs<210>3<211>351<212>dna<213>race（homosapiens）<223>peoplefshαsubunitnucleotidesequence<400>3atggactactatagaaagtacgccgctatcttcctggtgaccctgagcgtgtttctgcacgtgctgcattctgcccctgacgtgcaggattgcccagagtgtacactgcaggagaaccccttcttttctcagccaggagctccaatcctgcagtgcatgggatgctgtttctccagggcttaccccacccctctgcggagcaagaagacaatgctggtgcagaagaatgtgacctccgagagcacatgctgcgtggccaagtcctataaccgcgtgaccgtgatgggcggctttaaggtggagaatcacaccgcttgccattgttctacatgttactatcacaagtcctga<210>4<211>745<211>ptr<213>race（homosapiens）<223>peoplefshβ-hsaaminoacidsequence<400>4metktlqffflfccwkaiccnsceltnitiaiekeecrfcisinttwcagycytrdlvykdparpkiqktctfkelvyetvrvpgcahhadslytypvatqchcgkcdsdstdctvrglgpsycsfgemetkeggggsggggsggggsdahksevahrfkdlgeenfkalvliafaqylqqcpfedhvklvnevtefaktcvadesaencdkslhtlfgdklctvatlretygemetadccakqepernecflqhkddnpnlprlvrpevdvmetctafhdneetflkkylyeiarrhpyfyapellffakrykaafteccqaadkaacllpkldelrdegkassakqrlkcaslqkfgerafkawavarlsqrfpkaefaevsklvtdltkvhtecchgdllecaddradlakyicenqdsissklkeccekpllekshciaevendemetpadlpslaadfveskdvcknyaeakdvflgmetflyeyarrhpdysvvlllrlaktyettlekccaaadphecyakvfdefkplveepqnlikqncelfeqlgeykfqnallvrytkkvpqvstptlvevsrnlgkvgskcckhpeakrmetpcaedylsvvlnqlcvlhektpvsdrvtkccteslvnrrpcfsalevdetyvpkefnaetftfhadictlsekerqikkqtalvelvkhkpkatkeqlkavmetddfaafvekcckaddketcfaeegkklvaasqaalgl<210>5<211>18<211>ptr<213>race（homosapiens）<223>peoplefshβ-hsasignalpeptideaminoacidsequence<210>5mktlqffflfccwkaicc<210>6<211>2190<212>dna<213>race（homosapiens）<223>peoplefshβ-hsanucleotidesequence<210>6atgaagaccctgcagttctttttcctgttctgctgttggaaggccatctgctgtaactcctgcgagctgaccaatatcacaatcgctatcgagaaggaggagtgcagattttgtatcagcatcaacaccacatggtgcgccggctactgttataccagagacctggtgtacaaggatcccgctcgccctaagatccagaagacctgcacattcaaggagctggtgtatgagacagtgagagtgccaggctgtgcccaccatgctgattccctgtacacctatcccgtggccacacagtgccactgtggcaagtgcgacagcgattctaccgactgtacagtgcgcggactgggaccatcctactgcagctttggcgagatgaaggagggcggcggcggctctggaggaggaggatccggaggaggaggaagcgatgcccacaagtctgaggtggctcatcgctttaaggacctgggcgaggagaatttcaaggccctggtgctgatcgcttttgcccagtatctgcagcagtgccctttcgaggaccacgtgaagctggtgaacgaggtgaccgagtttgccaagacatgcgtggccgacgagtccgctgagaattgtgataagagcctgcataccctgttcggcgataagctgtgcaccgtggctacactgagagagacatacggcgagatggccgactgctgtgctaagcaggagcccgagcgcaacgagtgctttctgcagcataaggacgataacccaaatctgcccagactggtgcgccctgaggtggacgtgatgtgcaccgcctttcacgataatgaggagacattcctgaagaagtacctgtatgagatcgctaggcggcatccctacttctatgcccctgagctgctgtttttcgctaagcggtataaggccgcttttaccgagtgctgtcaggccgctgataaggccgcttgcctgctgcctaagctggacgagctgagggatgagggcaaggcttcctccgccaagcagcggctgaagtgtgccagcctgcagaagtttggcgagagggctttcaaggcttgggctgtggctaggctgtcccagcggtttccaaaggccgagttcgctgaggtgagcaagctggtgaccgacctgacaaaggtgcacaccgagtgctgtcatggcgacctgctggagtgcgctgacgatagggctgatctggctaagtacatctgtgagaaccaggacagcatctcttccaagctgaaggagtgctgtgagaagcctctgctggagaagtctcactgcatcgccgaggtggagaacgacgagatgcctgctgatctgccatctctggccgctgacttcgtggagtccaaggacgtgtgcaagaattacgccgaggctaaggacgtgttcctgggcatgttcctgtacgagtatgccagacgccacccagactactctgtggtgctgctgctgaggctggctaagacctatgagaccacactggagaagtgctgtgccgctgccgatccccatgagtgctatgccaaggtgtttgacgagttcaagccactggtggaggagccccagaacctgatcaagcagaattgtgagctgttcgagcagctgggcgagtacaagtttcagaacgctctgctggtgcggtataccaagaaggtgcctcaggtgagcaccccaacactggtggaggtgtctaggaatctgggcaaggtcggctccaagtgctgtaagcacccagaggctaagaggatgccttgcgctgaggattacctgtctgtggtgctgaatcagctgtgcgtgctgcatgagaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgtacagagagcctggtgaacaggcggccttgcttctctgccctggaggtggatgagacatatgtgccaaaggagtttaatgccgagacctttacattccacgctgacatctgtaccctgtctgagaaggagcgccagatcaagaagcagacagctctggtggagctggtgaagcataagcccaaggccaccaaggagcagctgaaggctgtgatggacgattttgctgccttcgtggagaagtgctgtaaggccgacgataaggagacatgcttcgctgaggagggcaagaagctggtggctgcctcccaggctgccctgggcctgtga<210>7<211>585<212>ptr<213>race（homosapiens）<223>hsaaminoacidsequence<400>7dahksevahrfkdlgeenfkalvliafaqylqqcpfedhvklvnevtefaktcvadesaencdkslhtlfgdklctvatlretygemadccakqepernecflqhkddnpnlprlvrpevdvmctafhdneetflkkylyeiarrhpyfyapellffakrykaafteccqaadkaacllpkldelrdegkassakqrlkcaslqkfgerafkawavarlsqrfpkaefaevsklvtdltkvhtecchgdllecaddradlakyicenqdsissklkeccekpllekshciaevendempadlpslaadfveskdvcknyaeakdvflgmflyeyarrhpdysvvlllrlaktyettlekccaaadphecyakvfdefkplveepqnlikqncelfeqlgeykfqnallvrytkkvpqvstptlvevsrnlgkvgskcckhpeakrmpcaedylsvvlnqlcvlhektpvsdrvtkccteslvnrrpcfsalevdetyvpkefnaetftfhadictlsekerqikkqtalvelvkhkpkatkeqlkavmddfaafvekcckaddketcfaeegkklvaasqaalgl<210>8<211>1758<212>dna<213>race（homosapiens）<223>hsanucleotidesequence<400>8gatgcccacaagtctgaggtggctcatcgctttaaggacctgggcgaggagaatttcaaggccctggtgctgatcgcttttgcccagtatctgcagcagtgccctttcgaggaccacgtgaagctggtgaacgaggtgaccgagtttgccaagacatgcgtggccgacgagtccgctgagaattgtgataagagcctgcataccctgttcggcgataagctgtgcaccgtggctacactgagagagacatacggcgagatggccgactgctgtgctaagcaggagcccgagcgcaacgagtgctttctgcagcataaggacgataacccaaatctgcccagactggtgcgccctgaggtggacgtgatgtgcaccgcctttcacgataatgaggagacattcctgaagaagtacctgtatgagatcgctaggcggcatccctacttctatgcccctgagctgctgtttttcgctaagcggtataaggccgcttttaccgagtgctgtcaggccgctgataaggccgcttgcctgctgcctaagctggacgagctgagggatgagggcaaggcttcctccgccaagcagcggctgaagtgtgccagcctgcagaagtttggcgagagggctttcaaggcttgggctgtggctaggctgtcccagcggtttccaaaggccgagttcgctgaggtgagcaagctggtgaccgacctgacaaaggtgcacaccgagtgctgtcatggcgacctgctggagtgcgctgacgatagggctgatctggctaagtacatctgtgagaaccaggacagcatctcttccaagctgaaggagtgctgtgagaagcctctgctggagaagtctcactgcatcgccgaggtggagaacgacgagatgcctgctgatctgccatctctggccgctgacttcgtggagtccaaggacgtgtgcaagaattacgccgaggctaaggacgtgttcctgggcatgttcctgtacgagtatgccagacgccacccagactactctgtggtgctgctgctgaggctggctaagacctatgagaccacactggagaagtgctgtgccgctgccgatccccatgagtgctatgccaaggtgtttgacgagttcaagccactggtggaggagccccagaacctgatcaagcagaattgtgagctgttcgagcagctgggcgagtacaagtttcagaacgctctgctggtgcggtataccaagaaggtgcctcaggtgagcaccccaacactggtggaggtgtctaggaatctgggcaaggtcggctccaagtgctgtaagcacccagaggctaagaggatgccttgcgctgaggattacctgtctgtggtgctgaatcagctgtgcgtgctgcatgagaagaccccagtgtccgacagagtgaccaagtgctgtacagagagcctggtgaacaggcggccttgcttctctgccctggaggtggatgagacatatgtgccaaaggagtttaatgccgagacctttacattccacgctgacatctgtaccctgtctgagaaggagcgccagatcaagaagcagacagctctggtggagctggtgaagcataagcccaaggccaccaaggagcagctgaaggctgtgatggacgattttgctgccttcgtggagaagtgctgtaaggccgacgataaggagacatgcttcgctgaggagggcaagaagctggtggctgcctcccaggctgccctgggcctgtga當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12