本發(fā)明涉及一種靈芝菌種復(fù)壯方法，特別是一種菌絲長勢(shì)好的靈芝復(fù)壯方法。
背景技術(shù)：
：靈芝為多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子實(shí)體。靈芝是一種珍貴的藥用真菌，屬于擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬，在我國有兩千多年的藥用史。靈芝首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代醫(yī)家都認(rèn)為靈芝能治療多種疾病，是滋補(bǔ)強(qiáng)壯扶正固本的珍貴藥物。靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一，存在于靈芝的子實(shí)體、孢子粉和菌絲體中，具有抑制腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)自由基清除的能力，故能減少自由基對(duì)機(jī)體的損傷、有延緩衰老之功效，還可以提高免疫力、抗炎癥、降血脂、降血糖等作用。隨著靈芝的保健功效被人們廣泛的認(rèn)識(shí)和接受，野生靈芝已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。培養(yǎng)基是靈芝賴以生存的條件，不同的培養(yǎng)原料和配方可對(duì)靈芝的菌絲生長、產(chǎn)量和活性成分等產(chǎn)生重要的影響。其中，復(fù)壯用培養(yǎng)基對(duì)后期的成品靈芝的質(zhì)量影響很大。現(xiàn)有復(fù)壯方法中所用的培養(yǎng)基大多數(shù)只含有葡萄糖、土豆、蛋白胨等。這樣制成的培養(yǎng)基營養(yǎng)不充足，使得復(fù)壯過程中菌絲生長狀態(tài)不好，得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢(shì)不好。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的，是提供一種靈芝復(fù)壯方法。本發(fā)明方法進(jìn)行復(fù)壯，菌絲生長狀態(tài)好，得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢(shì)好。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的。一種菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，包括提純、菌種制備、一次培養(yǎng)和二次培養(yǎng)。前述的菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，具體包括以下步驟：(1)提純：試管用70-80％的酒精消毒后，擦拭干凈，置于100萬級(jí)超凈工作臺(tái)，用紫外燈消毒25-35min，裝入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3，取零代母種菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊，放入培養(yǎng)基中，用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)5-7天，得靈芝母種；(2)靈芝菌種的制備：靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)10-15天，得靈芝菌種；(3)一次培養(yǎng)：取玉米粉，加水拌濕使得玉米粉的含水量為50-60％的玉米粉培養(yǎng)基，將靈芝菌種置于小米粉培養(yǎng)基中，于20-30℃下培養(yǎng)8-12天后，得一次培養(yǎng)靈芝菌種；(4)二次培養(yǎng)：將一次培養(yǎng)靈芝菌種轉(zhuǎn)入裝有培養(yǎng)基的試管中，塞入試管塞，于25-28℃培養(yǎng)，待菌絲生長滿試管時(shí)停止培養(yǎng)，即可。前述的菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，所述培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、海藻粉15-25份、蜈蚣粉0.3-0.5份、蛇床子10-20份、野菊花1-10份、大蒜1-10份和莎草5-15份制成。前述的菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，所述培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由葡萄糖18-22份、酵母膏3-5份、土豆190-210份、蛋白胨1.8-2.2份、海藻粉18-22份、蜈蚣粉0.3-0.5份、蛇床子13-17份、野菊花3-7份、大蒜3-7份和莎草8-12份制成。前述的菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，所述培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白胨2.0份、海藻粉20份、蜈蚣粉0.4份、蛇床子15份、野菊花5份、大蒜5份和莎草10份制成。前述的菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，所述培養(yǎng)基按下述步驟制備：(1)取蛇床子、野菊花、大蒜和莎草，加6-8倍量水，煎煮2-3h，過濾，取濾渣烘干后，粉碎成細(xì)顆粒，得a品；(2)土豆切片，加5-7倍量水煮沸20-30分鐘，過濾，濾渣加5-7倍量水繼續(xù)，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、蜈蚣粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻后，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，硅膠塞密封，6-8支用報(bào)紙包好，120-122℃下滅菌20-30min后，冷卻至50-60℃，傾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小時(shí)后，取出，即得。前述的菌絲長勢(shì)好的靈芝菌種復(fù)壯方法，所述培養(yǎng)基按下述步驟制備：(1)取蛇床子、野菊花、大蒜和莎草，加7倍量水，煎煮2.5h，過濾，取濾渣烘干后，粉碎成細(xì)顆粒，得a品；(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分鐘，過濾，濾渣加6倍量水繼續(xù)，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、蜈蚣粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻后，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，硅膠塞密封，7支用報(bào)紙包好，120-122℃下滅菌25min后，冷卻至50-60℃，傾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小時(shí)后，取出，即得。申請(qǐng)人對(duì)靈芝復(fù)壯方法進(jìn)行了大量的研究，部分實(shí)驗(yàn)如下：實(shí)驗(yàn)例.菌絲生長情況考察1材料1.1靈芝：由山東省壽光市食用菌研究所提供。1.2對(duì)比培養(yǎng)基：原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、海藻粉20kg和蜈蚣粉0.4kg。制作工藝：(1)土豆切片，加6倍量水煮沸25分鐘，過濾，濾渣加6倍量水繼續(xù)，加熱至50-60℃，得a品；(2)a品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、蜈蚣粉和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻后，得b品；(3)b品分裝至180ml試管的1/5，硅膠塞密封，7支用報(bào)紙包好，120-122℃下滅菌25min后，冷卻至50-60℃，傾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小時(shí)后，取出，即得。2試驗(yàn)方法和結(jié)果將靈芝分成2組，本發(fā)明組和對(duì)照組，本發(fā)明組按實(shí)施例1進(jìn)行復(fù)壯。對(duì)照組復(fù)壯方法同實(shí)施例1，但靈芝菌種的制備和二次培養(yǎng)時(shí)，所用的培養(yǎng)基為上述對(duì)比培養(yǎng)基。過程中觀察菌絲的生長情況，并作記錄。結(jié)果見表1和表2。表1不同復(fù)壯培養(yǎng)基上菌絲爬壁情況表2生長形狀觀察結(jié)果組別菌絲潔白度緊密度菌絲長勢(shì)本發(fā)明組潔白緊密很旺盛對(duì)照組暗輝緊密旺盛由表可知，本發(fā)明方法進(jìn)行復(fù)壯后的靈芝菌絲長勢(shì)好，生長形狀優(yōu)于對(duì)照組進(jìn)行復(fù)壯得到的菌絲。與現(xiàn)有技術(shù)相比，用本發(fā)明方法進(jìn)行復(fù)壯，菌絲生長狀態(tài)好，得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢(shì)好。具體實(shí)施方式實(shí)施例1。培養(yǎng)基原料：葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、海藻粉20kg、蜈蚣粉0.4kg、蛇床子15kg、野菊花5kg、大蒜5kg和莎草10kg。培養(yǎng)基的制作方法：具體包括以下步驟：(1)取蛇床子、野菊花、大蒜和莎草，加7倍量水，煎煮2.5h，過濾，取濾渣烘干后，粉碎成細(xì)顆粒，得a品；(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分鐘，過濾，濾渣加6倍量水繼續(xù)，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、蜈蚣粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻后，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，硅膠塞密封，7支用報(bào)紙包好，120-122℃下滅菌25min后，冷卻至50-60℃，傾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小時(shí)后，取出，即得。菌種復(fù)壯方法：具體包括以下步驟：(1)提純：試管用75％的酒精消毒后，擦拭干凈，置于100萬級(jí)超凈工作臺(tái)，用紫外燈消毒30min，裝入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3，取零代母種菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊，放入培養(yǎng)基中，用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)6天，得靈芝母種；(2)靈芝菌種的制備：靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)13天，得靈芝菌種；(3)一次培養(yǎng)：取玉米粉，加水拌濕使得玉米粉的含水量為55％的玉米粉培養(yǎng)基，將靈芝菌種置于小米粉培養(yǎng)基中，于20-30℃下培養(yǎng)10天后，得一次培養(yǎng)靈芝菌種；(4)二次培養(yǎng)：將一次培養(yǎng)靈芝菌種轉(zhuǎn)入裝有培養(yǎng)基的試管中，塞入試管塞，于25-28℃培養(yǎng)，待菌絲生長滿試管時(shí)停止培養(yǎng)，即可。實(shí)施例2.培養(yǎng)基原料：葡萄糖25kg、酵母膏5kg、土豆220kg、蛋白胨2.5kg、海藻粉25kg、蜈蚣粉0.5kg、蛇床子20kg、野菊花10kg、大蒜10kg和莎草15kg。培養(yǎng)基制作方法：(1)取蛇床子、野菊花、大蒜和莎草，加8倍量水，煎煮3h，過濾，取濾渣烘干后，粉碎成細(xì)顆粒，得a品；(2)土豆切片，加7倍量水煮沸30分鐘，過濾，濾渣加7倍量水繼續(xù)，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、蜈蚣粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻后，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，硅膠塞密封，8支用報(bào)紙包好，120-122℃下滅菌30min后，冷卻至50-60℃，傾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置48小時(shí)后，取出，即得。菌種復(fù)壯方法：具體包括以下步驟：(1)提純：試管用80％的酒精消毒后，擦拭干凈，置于100萬級(jí)超凈工作臺(tái)，用紫外燈消毒35min，裝入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3，取零代母種菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊，放入培養(yǎng)基中，用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)7天，得靈芝母種；(2)靈芝菌種的制備：靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)15天，得靈芝菌種；(3)一次培養(yǎng)：取玉米粉，加水拌濕使得玉米粉的含水量為60％的玉米粉培養(yǎng)基，將靈芝菌種置于小米粉培養(yǎng)基中，于20-30℃下培養(yǎng)12天后，得一次培養(yǎng)靈芝菌種；(4)二次培養(yǎng)：將一次培養(yǎng)靈芝菌種轉(zhuǎn)入裝有培養(yǎng)基的試管中，塞入試管塞，于25-28℃培養(yǎng)，待菌絲生長滿試管時(shí)停止培養(yǎng)，即可。實(shí)施例3.培養(yǎng)基原料：葡萄糖15kg、酵母膏3kg、土豆180kg、蛋白胨1.5kg、海藻粉15kg、蜈蚣粉0.3kg、蛇床子10kg、野菊花1kg、大蒜1kg和莎草5kg。培養(yǎng)基制作方法：(1)取蛇床子、野菊花、大蒜和莎草，加6倍量水，煎煮2h，過濾，取濾渣烘干后，粉碎成細(xì)顆粒，得a品；(2)土豆切片，加5倍量水煮沸20分鐘，過濾，濾渣加5倍量水繼續(xù)，加熱至50-60℃，得b品；(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、蜈蚣粉、a品和海藻粉，邊加邊攪拌，攪勻后，得c品；(4)c品分裝至180ml試管的1/5，硅膠塞密封，6-8支用報(bào)紙包好，120-122℃下滅菌20min后，冷卻至50-60℃，傾斜5度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小時(shí)后，取出，即得。菌種復(fù)壯方法：具體包括以下步驟：(1)提純：試管用70％的酒精消毒后，擦拭干凈，置于100萬級(jí)超凈工作臺(tái)，用紫外燈消毒25min，裝入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3，取零代母種菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊，放入培養(yǎng)基中，用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊，覆蓋厚度為1-1.5cm，塞入試管塞，放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)5天，得靈芝母種；(2)靈芝菌種的制備：靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)10天，得靈芝菌種；(3)一次培養(yǎng)：取玉米粉，加水拌濕使得玉米粉的含水量為50％的玉米粉培養(yǎng)基，將靈芝菌種置于小米粉培養(yǎng)基中，于20-30℃下培養(yǎng)8天后，得一次培養(yǎng)靈芝菌種；(4)二次培養(yǎng)：將一次培養(yǎng)靈芝菌種轉(zhuǎn)入裝有培養(yǎng)基的試管中，塞入試管塞，于25-28℃培養(yǎng)，待菌絲生長滿試管時(shí)停止培養(yǎng)，即可。當(dāng)前第1頁12